應(yīng)用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位-文庫吧在線文庫
【正文】 。磷酸化蛋白βcasein蛋白為sigma產(chǎn)品，純度90％。這種方法的成功建立，將使人們對磷酸化蛋白質(zhì)的研究跨上一個新的臺階，對功能性蛋白的尋找和作用機制探尋具有重要意義，在國內(nèi)具有廣泛的需求。在哺乳動物中大約有三分之一的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是磷酸化修飾的，對眾多生物化學(xué)功能起開/關(guān)調(diào)控作用，是一種普遍的調(diào)控機制。生物質(zhì)譜是目前進行蛋白質(zhì)磷酸化分析最有力的方法之一。目前沒有一個自動測序方法能夠?qū)θN主要的磷酸化氨基酸，即磷酸化絲氨基酸（pSer）、磷酸化蘇氨基酸（pThr）和磷酸化酪氨酸（pTyr）。中性丟失掃描法具有很高的靈敏度，檢測限在fmol級。其它試劑均為國產(chǎn)分析純。碰撞氣體為氬氣。Nanoflow probe進樣毛細(xì)管電壓為3000v。圖1：上半部分為中性丟失49掃描的離子流色譜圖，下半部分為掃描總離子流色譜圖。但不適于分析在復(fù)雜混合物中的相對含量較低的磷酸化肽段。綜上所述，我們嘗試用不同方法對磷酸化蛋白的磷酸化肽段進行分析，定位磷酸化位點。A為處理前；B為處理后，箭頭所指為磷酸化肽段有文獻報道不同的金屬離子富集磷酸化肽段的選擇性和靈敏度不同，我們選擇的金屬鉫離子是選擇性和靈敏度均比較理想的一種能金屬離子，其缺點是比較昂貴。圖2 ：m/圖中上方序列由左至右為肽段的C端到N端。L點在Scorce384靶上，送入離子源中進行檢測。MCP 檢測器電壓為2200V。 加入分裝保存的胰蛋白酶1 ug，37℃，12h后取出部分稀釋成所需濃度備用。一、材料與方法1．材料試劑：ZipTipMC，ZipTipμC18 為millipore公司產(chǎn)
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1