應用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位-wenkub.com
2025-04-01 23:21 本頁面
【正文】 綜上所述，我們嘗試用不同方法對磷酸化蛋白的磷酸化肽段進行分析，定位磷酸化位點。A為處理前；B為處理后，箭頭所指為磷酸化肽段有文獻報道不同的金屬離子富集磷酸化肽段的選擇性和靈敏度不同，我們選擇的金屬鉫離子是選擇性和靈敏度均比較理想的一種能金屬離子，其缺點是比較昂貴。但不適于分析在復雜混合物中的相對含量較低的磷酸化肽段。圖2 ：m/圖中上方序列由左至右為肽段的C端到N端。圖1：上半部分為中性丟失49掃描的離子流色譜圖，下半部分為掃描總離子流色譜圖。L點在Scorce384靶上，送入離子源中進行檢測。Nanoflow probe進樣毛細管電壓為3000v。MCP 檢測器電壓為2200V。碰撞氣體為氬氣。 加入分裝保存的胰蛋白酶1 ug，37℃，12h后取出部分稀釋成所需濃度備用。其它試劑均為國產(chǎn)分析純。一、材料與方法1．材料試劑：ZipTipMC，ZipTipμC18 為millipore公司產(chǎn)品。中性丟失掃描法具有很高的靈敏度，檢測限在fmol級。近年來，生物質(zhì)譜的發(fā)展顯著地促進了對具有生物學功能的磷酸化蛋白質(zhì)的研究，是國際上當前最重要的一個前沿領域，也是目前蛋白質(zhì)組研究的一個重要方面。目前沒有一個自動測序方法能夠?qū)θN主要的磷酸化氨基酸，即磷酸化絲氨基酸（pSer）、磷酸化蘇氨基酸（pThr）和磷酸化酪氨酸（pTyr）。蛋白質(zhì)可逆磷酸化是最普遍、最重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTM）。生物質(zhì)譜是目前進行蛋白質(zhì)磷酸化分析最有力的方法之一。我們用天然磷酸化蛋白建立了中性丟失掃描和固相金屬親和色譜（IMAC）兩種基于質(zhì)譜的磷酸化蛋
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