應(yīng)用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位(參考版)
2025-04-07 23:21本頁(yè)面
【正文】 但不同方法在進(jìn)行磷酸化分析時(shí)各有優(yōu)點(diǎn)及局限性，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)樣品情況和具體要求選擇應(yīng)用何種方法及具體條件。因此具體研究中還要根據(jù)具體要求優(yōu)化具體實(shí)驗(yàn)參數(shù)。另外，研究表明該方法具有一定的局限性：磷酸化肽段的損失，一部分磷酸化肽段不能吸附在色譜柱上，另外一部分磷酸化肽段難于洗脫下來(lái)。AB圖3：2pmol/μl胰酶酶解混合物ZipTipMC處理前后的肽指紋譜。2. IMAC法選擇性富集磷酸化肽段： 用1％甲酸水溶液將樣品稀釋為不同濃度（100fmol/μL, 500fmol/μL,2pmol/μL 5pmol/μL），各取 5μL分別用鉫離子親和色譜ZipTipMC處理，洗脫后取1μL 直接進(jìn)行MAILDTof質(zhì)譜檢測(cè)，結(jié)果見圖3。中性丟失掃描可以高靈敏度準(zhǔn)確的定位磷酸化肽段。標(biāo)記處為磷酸化絲氨酸。該段序列為牛βcasein 前體蛋白的48 – 63位氨基酸序列。圖中所示的肽段為掃描得到的磷酸化肽段，與βcasein理論酶切所得到的磷酸化肽段質(zhì)荷比一致。二、結(jié)果與討論中性丟失掃描：1μL 1μg/μL βcasein酶解混合物用50％乙腈／水溶液稀釋為100μL（約500fmol/μL）注射泵進(jìn)樣，正離子中性丟失掃描模式掃描中性丟失49的雙電荷離子（圖1）。反射檢測(cè)方式；；氮激光器：波長(zhǎng)337nm；加速電壓25KV；；反射電壓23KV?；|(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀為Bruker公司的Autoflex，%TFA中，取1μL與飽和CCA基質(zhì)上清液混合，取1181。所有測(cè)定均在正離子方式下進(jìn)行，用Glufib(sigma)的串
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