應(yīng)用生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位點(diǎn)-生物質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)磷酸化位(專業(yè)版)
【正文】 結(jié)果表明經(jīng)濃度為2pmol/μL 以上的樣品ZipTipMC處理之后的樣品中非磷酸化肽段幾乎全部被除去，磷酸化肽段信號顯著增強(qiáng)；低于此濃度的樣品經(jīng)處理后質(zhì)譜圖中無磷酸化肽信號。中性丟失掃描：設(shè)定掃描范圍400－2000，掃描方式為中性丟失掃描，尋找中性丟失49的雙電荷離子?；|(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(Autoflex，Bruker)。生物質(zhì)譜（MS）是揭示蛋白質(zhì)許多翻譯后修飾和蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)分析的一個(gè)不可缺少的工具，所用的蛋白質(zhì)樣品量在fmol水平。兩種方法具有不同的特點(diǎn)及局限性，具體研究中還要視具體情況優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。這兩種方法的建立和成熟運(yùn)用將為磷酸化蛋白的研究提供便利條件。TOF 。該段序列為牛βcasein 前體蛋白的48 – 63位氨基酸序列。但不同方法在進(jìn)行磷酸化分析時(shí)各有優(yōu)點(diǎn)及局限性，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)樣品情況和具體要求選擇應(yīng)用何種方法及具體條件。圖中所示的肽段為掃描得到的磷酸化肽段，與βcasein理論酶切所得到的磷酸化肽段質(zhì)荷比一致。源溫80176。固相金屬親和色譜（IMAC）法是近年來應(yīng)用最廣泛的特異性富集磷酸化肽段的方法，該方法適用于微量復(fù)雜樣品的處理。我們用天然磷酸化蛋白建立了中性丟失掃描和固相金屬親和色譜（IMAC）兩種基于質(zhì)譜的磷酸化蛋白分析方法。近年來，生物質(zhì)譜的發(fā)展顯著地促進(jìn)了對具有生物學(xué)功能的磷酸化蛋白質(zhì)的研究，是國際上當(dāng)前最重要的一個(gè)前沿領(lǐng)域，也是目前蛋白質(zhì)組研究的一個(gè)重要方面。 加入分裝保存的胰蛋白酶1 ug，37℃，12h后取出部分稀釋成所需濃度備用。L點(diǎn)在Scorce384靶上，送入離子源中進(jìn)行檢測。A為處理前；B為處
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