【正文】 為保持冰箱的穩(wěn)定，不要隨意過多地打開冰箱，在條件允許下，設(shè)置一個(gè)永久的保藏冰箱，與經(jīng)常用菌種的冰箱分開使用。 ? 定期調(diào)換配方 在菌種保藏過程中，一般應(yīng)每隔一定時(shí)期，調(diào)換 1次培養(yǎng)基配方，以補(bǔ)充營養(yǎng)、水分，消除菌絲體代謝產(chǎn)物的影響，保持菌種正常的生活能力。 二、礦油保藏法 ? 礦油（主要是液體石蠟）保藏，又稱液體石蠟覆蓋保藏。用此法保藏，不需要太多的設(shè)備，操作簡便，只需在菌苔上灌注一層無菌的液體石蠟，即可使菌種與外界空氣隔絕，達(dá)到防止培養(yǎng)基水分散失，抑制菌種新陳代謝，延長保存時(shí)間的目的。一般室溫下可保藏 5～ 7年，期間 1～ 2年應(yīng)移接 1次。用此法保藏的菌種不必置于冰箱內(nèi)，室內(nèi)保藏即可。 ? 礦油處理 選用化學(xué)純的液體石蠟（要求不含水，不霉變），分裝于三角燒瓶中，裝至瓶體的1/3處，加棉塞封口，在 1小時(shí) ,由于高壓蒸汽滅菌常有水蒸氣滲入 ,需放在40℃ 溫箱中烘烤 8～ 10小時(shí) ,使水分蒸發(fā)至石蠟液透明為止 . ? 灌注礦油 用無菌吸管將滅菌石蠟液注入在要保藏的菌種斜面試管內(nèi)，用量以高出斜端 1厘米為宜。然后將棉塞齊口剪平，再用蠟密封管口。 ? 活化培養(yǎng) 剛從石蠟油菌種中移出的菌絲體常沾有少許礦油，生長較弱，因此，需要再移植一次，才能恢復(fù)生長。也可用接種工具從斜面上取一小塊菌絲先在無菌水中洗滌，然后移接于斜面培養(yǎng)基上即可，余下的種可重新封口繼續(xù)保藏。 三、冷凍干燥貯藏法 ? 此法是采用真空、干燥和低溫 3種手段來保藏菌種，菌種保藏期可達(dá) 10～ 20年，仍不降低其原有性能，是目前應(yīng)用最廣泛、效果較好的孢子貯藏方法。 ? 冷凍管準(zhǔn)備 選用中性玻璃吹制的 10毫米 100毫米，底端突出球狀的安瓿管，用 /升鹽酸浸泡 8～ 10小時(shí)，沖洗至中性，烘干，在管壁貼上標(biāo)簽，標(biāo)明菌名、日期等，加棉塞，干熱滅菌。 ? 制備孢子懸浮液 在試管中加入 3毫升脫脂牛奶加棉塞，121℃ 滅菌 30分鐘，在無菌條件下放入食用菌孢子，攪動(dòng)制成孢子懸浮液，用無菌的長毛細(xì)滴管吸取孢子懸浮液注入安瓿管底球部，每管約 。分裝時(shí)不要沾污管壁，塞好棉塞。 ? 速凍干燥 將安瓿管放在 40℃ ～ 30℃ 低溫冰箱內(nèi)預(yù)凍1小時(shí)，防止抽氣時(shí)產(chǎn)生泡沫外溢。也可將安瓿管置 1:1的干冰和 95％的乙醇組成的凍結(jié)劑內(nèi)，預(yù)凍 3～ 4分鐘。然后戴上防凍手套，將安瓿管壁擦干凈，立即放入真空干燥器內(nèi)抽真空。真空度用麥?zhǔn)险婵沼?jì)測量，要求 30分內(nèi)達(dá)，繼續(xù)抽氣，使真空度維持在 ，經(jīng) 6～ 8小時(shí)后，即可使管內(nèi)水分升華干燥。 ? 真空熔封 將安瓿管安裝在抽氣管上抽氣熔封，真空度達(dá) ,邊抽氣邊用單火焰或雙火焰將安瓿管上端熔斷封口，熔封后，檢查安瓿管是否漏氣。 ? 保藏和啟用 置 4℃ ～ 6℃ 冰箱內(nèi)或常溫下遮光保藏。使用時(shí)，在無菌條件下用砂輪把安瓿管上端劃一刻痕，置火焰上加熱，再把蘸有來蘇爾的紗布敷上，使之破裂。然后管內(nèi)注入 ，用接種環(huán)移接入斜面上活化培養(yǎng)。 四、液氮超低溫保藏法 ? 是根據(jù)活細(xì)胞在超低溫下（ 196℃ ）處于休眠狀態(tài)而設(shè)計(jì)的一種長期保藏菌種的方法。由于超低溫能使代謝水平降到最低限度，用此法保藏的菌種基本上不發(fā)生變異。是目前保藏菌種的最好方法。 ? 保藏方法 采用 10％（體積比）的二甲基亞砜蒸餾水為保護(hù)劑，淹沒料面，輕輕地刮落面料上的菌絲體，使之成菌絲懸浮液，吸取 5～ 8毫升注入已滅菌的安瓿管中，熔封管口，放液氮冷凍器內(nèi)，以每分鐘降低 1℃ 的速度緩慢降溫，在 1小時(shí)內(nèi)使其凍結(jié)到 35℃ ，以后速度不需控制，當(dāng)安瓿管凍結(jié)后，立即放入液氮罐中。罐內(nèi)的氣相溫度為150℃ ，液體溫度為 196℃ 。 ? 活化培養(yǎng) 在啟用液氮超低溫保藏菌種時(shí)，應(yīng)先將安瓿管置于 35℃ ～ 40℃ 的溫水中，使管中的冰塊迅速溶解，然后再開啟安瓿管，取懸浮的菌絲塊移植于適宜的培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)。 五、自然基質(zhì)簡易保藏法 ? 麥粒保藏法 用麥粒保藏蘑菇和靈芝菌種，保藏期蘑菇達(dá)一年半，而靈芝可達(dá) 5年之久仍有活力。麥粒保藏法是利用麥粒作培養(yǎng)基，用于保種的麥粒，含水量在 25％左右，這樣的麥粒，在滅菌后種皮不破裂。制作方法：先將麥粒浸水 4～ 5小時(shí)，濾去水后晾干麥粒表面的水分，裝入小試管，裝量為試管高度的 1/3，高壓蒸汽滅菌，在 帕壓力下，滅菌 1小時(shí)，冷卻后接入孢子液或菌絲懸浮液，搖勻后置適宜溫度下培養(yǎng)，當(dāng)試管中的麥粒發(fā)滿菌絲后，放入裝有氯化鈣的干燥器內(nèi)，進(jìn)行抽氣干燥 ,干燥后，將干燥器放于 20℃ 以下的溫度保藏。此法保藏菌絲，經(jīng) 1～ 2年后，再接到培養(yǎng)基上，菌絲生長仍然良好。 ? 木屑保藏法 采用木屑麩皮培養(yǎng)基，裝入試管長度 3/4后，擦洗干凈，管口塞好棉塞，捆扎后，在 時(shí)，取出接種后，在 25℃ 恒溫下培養(yǎng)。待菌絲長到培養(yǎng)基 2/3時(shí)，取出用蠟將棉塞封好，包上塑料薄膜，置于 4℃ 冰箱內(nèi)，保藏1～ 2年。使用時(shí)，從冰箱取出后在 25℃ 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 18～ 24小時(shí)，在無菌條件下去掉試管上部的菌種，取下部較新鮮的菌絲體，接入斜面培養(yǎng)基即可。此法適用香菇、黑木耳、黃背木耳菌絲保藏。 ? 草粉保藏法 稻草粉碎后加入 30％麩皮，pH值調(diào)到 8左右，分裝入試管內(nèi)，裝量為管長的 2/3左右，在 小時(shí)，接入草菇菌種適溫培養(yǎng)，菌絲長滿管后，在接種箱內(nèi)，換上無菌橡皮塞，置8℃ 以上室溫下保藏。用此法保藏草菇菌種，可達(dá) 1年以上。 六、干燥保藏法 ? 沙土管保藏法 ? 此法是將食用菌孢子保藏于干燥的無菌沙土中，保藏期為2～ 10年。具體方法如下： ? 第一、取河沙過篩（ 60～ 80目篩子），除去大沙粒，用10％的鹽酸浸泡以除去有機(jī)質(zhì)。鹽酸用量以淹沒沙面為宜。浸泡 2～ 4小時(shí)后，倒去鹽酸，用清水沖洗幾次，直到接近中性，置 60℃ ～ 80℃ 烘箱中烘干。 ? 第二、沙土比例為 2:1或 4:1，裝于小試管中，裝入量以～ 1厘米高為宜，洗凈試管，塞好棉塞，在 壓力下滅菌 30分鐘，需重復(fù)進(jìn)行 3次。如采用干熱滅菌在165℃ 下保持 2～ 3小時(shí)， 1次即可。滅菌后取少許干沙土放入牛肉湯培養(yǎng)液中無菌培養(yǎng)，檢查無菌，證明沙土管滅菌徹底合格后，方可使用。 ? 第三、用接種環(huán)將收集的孢子接于沙土管中拌勻即可?；?qū)㈡咦咏佑?5毫升無菌水的試管中，充分搖勻成孢子懸浮液，然后用 1毫升無菌吸管吸取孢子懸浮液加入沙土管中（每管加 ）即可。 ? 第四、將接種后的沙土管置于盛有干燥劑（生石灰、氯化鈣或硅膠）的容器內(nèi)，接上 8小時(shí)，使沙土基本干燥。 ? 第五、經(jīng)抽樣檢查，證明無雜菌生長，即可封口進(jìn)行保藏。 ? 濾紙片保藏法 此法適用于蘑菇、金針菇、香菇、黑木耳和猴頭，用濾紙片保藏孢子，可存活。 ? （ 1）、濾紙片準(zhǔn)備 將白色或黑色濾紙片剪成寬～ ，長 ～ 8厘米 ,整齊地平鋪在大培養(yǎng)皿底 (直徑 15厘米 ),蓋上皿蓋 ,并用牛皮紙包好 ,在 30分鐘，然后在烘箱中稍加烘干。 ? （ 2）、孢子收集 將滅過菌的濾紙片培養(yǎng)皿移入接種箱孢子采集罩內(nèi)，接受孢子。 ? （ 3）、貯藏方法 待孢子彈射上濾紙片后，在無菌條件下，用鑷子將紙片一一移入無菌空試管中，然后將試管封熔保藏在 0℃ ～ 1℃ 冰箱內(nèi)。 七、懸液保藏法 ? 生理鹽水保藏法 將保藏的食用菌菌種，在無菌條件下接入馬鈴薯汁蔗糖培養(yǎng)液中，振蕩培養(yǎng)5～ 7天，然后將形成的菌絲球吸入裝有 5毫升無菌生理鹽水的試管中，每管移入 4～ 5個(gè)菌絲球，塞好試管，并蠟封，置于常溫或 4℃ 溫度下保藏。一般可保藏 1～ 3年。 ? 菌絲體液體保藏法 將保藏的菌種在無菌條件下，取菌塊放入馬鈴薯培養(yǎng)液中，在常溫下靜置培養(yǎng)，其成活率達(dá) 33個(gè)月為 ％， 42個(gè)月為％。