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食用菌菌種的制備ppt課件-資料下載頁

2025-03-22 05:46本頁面
  

【正文】 為保持冰箱的穩(wěn)定,不要隨意過多地打開冰箱,在條件允許下,設(shè)置一個(gè)永久的保藏冰箱,與經(jīng)常用菌種的冰箱分開使用。 ? 定期調(diào)換配方 在菌種保藏過程中,一般應(yīng)每隔一定時(shí)期,調(diào)換 1次培養(yǎng)基配方,以補(bǔ)充營養(yǎng)、水分,消除菌絲體代謝產(chǎn)物的影響,保持菌種正常的生活能力。 二、礦油保藏法 ? 礦油(主要是液體石蠟)保藏,又稱液體石蠟覆蓋保藏。用此法保藏,不需要太多的設(shè)備,操作簡便,只需在菌苔上灌注一層無菌的液體石蠟,即可使菌種與外界空氣隔絕,達(dá)到防止培養(yǎng)基水分散失,抑制菌種新陳代謝,延長保存時(shí)間的目的。一般室溫下可保藏 5~ 7年,期間 1~ 2年應(yīng)移接 1次。用此法保藏的菌種不必置于冰箱內(nèi),室內(nèi)保藏即可。 ? 礦油處理 選用化學(xué)純的液體石蠟(要求不含水,不霉變),分裝于三角燒瓶中,裝至瓶體的1/3處,加棉塞封口,在 1小時(shí) ,由于高壓蒸汽滅菌常有水蒸氣滲入 ,需放在40℃ 溫箱中烘烤 8~ 10小時(shí) ,使水分蒸發(fā)至石蠟液透明為止 . ? 灌注礦油 用無菌吸管將滅菌石蠟液注入在要保藏的菌種斜面試管內(nèi),用量以高出斜端 1厘米為宜。然后將棉塞齊口剪平,再用蠟密封管口。 ? 活化培養(yǎng) 剛從石蠟油菌種中移出的菌絲體常沾有少許礦油,生長較弱,因此,需要再移植一次,才能恢復(fù)生長。也可用接種工具從斜面上取一小塊菌絲先在無菌水中洗滌,然后移接于斜面培養(yǎng)基上即可,余下的種可重新封口繼續(xù)保藏。 三、冷凍干燥貯藏法 ? 此法是采用真空、干燥和低溫 3種手段來保藏菌種,菌種保藏期可達(dá) 10~ 20年,仍不降低其原有性能,是目前應(yīng)用最廣泛、效果較好的孢子貯藏方法。 ? 冷凍管準(zhǔn)備 選用中性玻璃吹制的 10毫米 100毫米,底端突出球狀的安瓿管,用 /升鹽酸浸泡 8~ 10小時(shí),沖洗至中性,烘干,在管壁貼上標(biāo)簽,標(biāo)明菌名、日期等,加棉塞,干熱滅菌。 ? 制備孢子懸浮液 在試管中加入 3毫升脫脂牛奶加棉塞,121℃ 滅菌 30分鐘,在無菌條件下放入食用菌孢子,攪動(dòng)制成孢子懸浮液,用無菌的長毛細(xì)滴管吸取孢子懸浮液注入安瓿管底球部,每管約 。分裝時(shí)不要沾污管壁,塞好棉塞。 ? 速凍干燥 將安瓿管放在 40℃ ~ 30℃ 低溫冰箱內(nèi)預(yù)凍1小時(shí),防止抽氣時(shí)產(chǎn)生泡沫外溢。也可將安瓿管置 1:1的干冰和 95%的乙醇組成的凍結(jié)劑內(nèi),預(yù)凍 3~ 4分鐘。然后戴上防凍手套,將安瓿管壁擦干凈,立即放入真空干燥器內(nèi)抽真空。真空度用麥?zhǔn)险婵沼?jì)測(cè)量,要求 30分內(nèi)達(dá),繼續(xù)抽氣,使真空度維持在 ,經(jīng) 6~ 8小時(shí)后,即可使管內(nèi)水分升華干燥。 ? 真空熔封 將安瓿管安裝在抽氣管上抽氣熔封,真空度達(dá) ,邊抽氣邊用單火焰或雙火焰將安瓿管上端熔斷封口,熔封后,檢查安瓿管是否漏氣。 ? 保藏和啟用 置 4℃ ~ 6℃ 冰箱內(nèi)或常溫下遮光保藏。使用時(shí),在無菌條件下用砂輪把安瓿管上端劃一刻痕,置火焰上加熱,再把蘸有來蘇爾的紗布敷上,使之破裂。然后管內(nèi)注入 ,用接種環(huán)移接入斜面上活化培養(yǎng)。 四、液氮超低溫保藏法 ? 是根據(jù)活細(xì)胞在超低溫下( 196℃ )處于休眠狀態(tài)而設(shè)計(jì)的一種長期保藏菌種的方法。由于超低溫能使代謝水平降到最低限度,用此法保藏的菌種基本上不發(fā)生變異。是目前保藏菌種的最好方法。 ? 保藏方法 采用 10%(體積比)的二甲基亞砜蒸餾水為保護(hù)劑,淹沒料面,輕輕地刮落面料上的菌絲體,使之成菌絲懸浮液,吸取 5~ 8毫升注入已滅菌的安瓿管中,熔封管口,放液氮冷凍器內(nèi),以每分鐘降低 1℃ 的速度緩慢降溫,在 1小時(shí)內(nèi)使其凍結(jié)到 35℃ ,以后速度不需控制,當(dāng)安瓿管凍結(jié)后,立即放入液氮罐中。罐內(nèi)的氣相溫度為150℃ ,液體溫度為 196℃ 。 ? 活化培養(yǎng) 在啟用液氮超低溫保藏菌種時(shí),應(yīng)先將安瓿管置于 35℃ ~ 40℃ 的溫水中,使管中的冰塊迅速溶解,然后再開啟安瓿管,取懸浮的菌絲塊移植于適宜的培養(yǎng)基上活化培養(yǎng)。 五、自然基質(zhì)簡易保藏法 ? 麥粒保藏法 用麥粒保藏蘑菇和靈芝菌種,保藏期蘑菇達(dá)一年半,而靈芝可達(dá) 5年之久仍有活力。麥粒保藏法是利用麥粒作培養(yǎng)基,用于保種的麥粒,含水量在 25%左右,這樣的麥粒,在滅菌后種皮不破裂。制作方法:先將麥粒浸水 4~ 5小時(shí),濾去水后晾干麥粒表面的水分,裝入小試管,裝量為試管高度的 1/3,高壓蒸汽滅菌,在 帕壓力下,滅菌 1小時(shí),冷卻后接入孢子液或菌絲懸浮液,搖勻后置適宜溫度下培養(yǎng),當(dāng)試管中的麥粒發(fā)滿菌絲后,放入裝有氯化鈣的干燥器內(nèi),進(jìn)行抽氣干燥 ,干燥后,將干燥器放于 20℃ 以下的溫度保藏。此法保藏菌絲,經(jīng) 1~ 2年后,再接到培養(yǎng)基上,菌絲生長仍然良好。 ? 木屑保藏法 采用木屑麩皮培養(yǎng)基,裝入試管長度 3/4后,擦洗干凈,管口塞好棉塞,捆扎后,在 時(shí),取出接種后,在 25℃ 恒溫下培養(yǎng)。待菌絲長到培養(yǎng)基 2/3時(shí),取出用蠟將棉塞封好,包上塑料薄膜,置于 4℃ 冰箱內(nèi),保藏1~ 2年。使用時(shí),從冰箱取出后在 25℃ 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 18~ 24小時(shí),在無菌條件下去掉試管上部的菌種,取下部較新鮮的菌絲體,接入斜面培養(yǎng)基即可。此法適用香菇、黑木耳、黃背木耳菌絲保藏。 ? 草粉保藏法 稻草粉碎后加入 30%麩皮,pH值調(diào)到 8左右,分裝入試管內(nèi),裝量為管長的 2/3左右,在 小時(shí),接入草菇菌種適溫培養(yǎng),菌絲長滿管后,在接種箱內(nèi),換上無菌橡皮塞,置8℃ 以上室溫下保藏。用此法保藏草菇菌種,可達(dá) 1年以上。 六、干燥保藏法 ? 沙土管保藏法 ? 此法是將食用菌孢子保藏于干燥的無菌沙土中,保藏期為2~ 10年。具體方法如下: ? 第一、取河沙過篩( 60~ 80目篩子),除去大沙粒,用10%的鹽酸浸泡以除去有機(jī)質(zhì)。鹽酸用量以淹沒沙面為宜。浸泡 2~ 4小時(shí)后,倒去鹽酸,用清水沖洗幾次,直到接近中性,置 60℃ ~ 80℃ 烘箱中烘干。 ? 第二、沙土比例為 2:1或 4:1,裝于小試管中,裝入量以~ 1厘米高為宜,洗凈試管,塞好棉塞,在 壓力下滅菌 30分鐘,需重復(fù)進(jìn)行 3次。如采用干熱滅菌在165℃ 下保持 2~ 3小時(shí), 1次即可。滅菌后取少許干沙土放入牛肉湯培養(yǎng)液中無菌培養(yǎng),檢查無菌,證明沙土管滅菌徹底合格后,方可使用。 ? 第三、用接種環(huán)將收集的孢子接于沙土管中拌勻即可?;?qū)㈡咦咏佑?5毫升無菌水的試管中,充分搖勻成孢子懸浮液,然后用 1毫升無菌吸管吸取孢子懸浮液加入沙土管中(每管加 )即可。 ? 第四、將接種后的沙土管置于盛有干燥劑(生石灰、氯化鈣或硅膠)的容器內(nèi),接上 8小時(shí),使沙土基本干燥。 ? 第五、經(jīng)抽樣檢查,證明無雜菌生長,即可封口進(jìn)行保藏。 ? 濾紙片保藏法 此法適用于蘑菇、金針菇、香菇、黑木耳和猴頭,用濾紙片保藏孢子,可存活。 ? ( 1)、濾紙片準(zhǔn)備 將白色或黑色濾紙片剪成寬~ ,長 ~ 8厘米 ,整齊地平鋪在大培養(yǎng)皿底 (直徑 15厘米 ),蓋上皿蓋 ,并用牛皮紙包好 ,在 30分鐘,然后在烘箱中稍加烘干。 ? ( 2)、孢子收集 將滅過菌的濾紙片培養(yǎng)皿移入接種箱孢子采集罩內(nèi),接受孢子。 ? ( 3)、貯藏方法 待孢子彈射上濾紙片后,在無菌條件下,用鑷子將紙片一一移入無菌空試管中,然后將試管封熔保藏在 0℃ ~ 1℃ 冰箱內(nèi)。 七、懸液保藏法 ? 生理鹽水保藏法 將保藏的食用菌菌種,在無菌條件下接入馬鈴薯汁蔗糖培養(yǎng)液中,振蕩培養(yǎng)5~ 7天,然后將形成的菌絲球吸入裝有 5毫升無菌生理鹽水的試管中,每管移入 4~ 5個(gè)菌絲球,塞好試管,并蠟封,置于常溫或 4℃ 溫度下保藏。一般可保藏 1~ 3年。 ? 菌絲體液體保藏法 將保藏的菌種在無菌條件下,取菌塊放入馬鈴薯培養(yǎng)液中,在常溫下靜置培養(yǎng),其成活率達(dá) 33個(gè)月為 %, 42個(gè)月為%。
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