【正文】 的混合種，也只能采用基內(nèi)菌絲分離法，歸納起來有以下兩種： 耳（菇）木分離法 ? 此法必須是在出耳（菇）季節(jié)進(jìn)行。為防止細(xì)菌污染，可在培養(yǎng)基里加入抑菌的青霉素或其它抗生素，使用濃度為。 ? 菌索組織分離法 蜜環(huán)菌、假蜜環(huán)菌、安洛小皮傘等在培養(yǎng)基內(nèi)產(chǎn)生菌索。利用菌核分離，同樣能得到該菌的菌種。也可將耳片用 75％酒精浸泡 1分鐘，再用無菌水漂洗 3次，并用無菌紙吸干后，剪成7 4mm小塊，置于加 25％乳酸 3滴的 PDA培養(yǎng)基平板上，每皿 5塊，適溫培養(yǎng)。 ? 膠質(zhì)菌類的組織分離 黑木耳、毛木耳等膠質(zhì)菌，因子實(shí)體組織層較薄，質(zhì)地較韌，且菌絲數(shù)量極少，故進(jìn)行組織分離的難度較大。其方法是：選尚未開傘的菇蕾，在無菌箱內(nèi)以 ％的升汞液浸 1— 2分鐘，再用無菌水沖洗、揩干，或用 75％酒精棉球擦菌蓋 2次，進(jìn)行表面消毒。用無菌水沖洗幾次，并用無菌紙吸干，然后以 75％乙醇進(jìn)行表面消毒，用消過毒的解剖刀在菌柄或菌蓋中部縱切一刀，掰開菌傘，挑取菌蓋與菌柄交界處的一小塊組織，接到 PDA斜面培養(yǎng)基上，置 25℃ 左右溫箱內(nèi)培養(yǎng) 3— 5天，組織塊上即可長出白色絨毛狀菌絲，說明分離成功。根據(jù)分離材料的不同，大體可分為以下幾種： ? 傘菌類的組織分離 ? 從優(yōu)良品系中選取優(yōu)良的個(gè)體作種菇，以單菇、朵大、蓋厚、無病蟲危害的菌蕾作為分離材料。也是野外采種常用的方法之一。食用菌子實(shí)體組織，實(shí)際上就是菌絲體的扭結(jié)物，具有很強(qiáng)的再生和保持種性能力，切取一小塊組織移植到培養(yǎng)基上便能進(jìn)入營養(yǎng)生長階段，從而獲得純菌絲體。有性孢子具有雙親的遺傳性，生活力強(qiáng)、數(shù)量多的特點(diǎn)，因此采用孢子分離法，從中選擇優(yōu)良菌株的機(jī)會較多，所得的菌種菌齡小，生活力旺盛。 ? 一、孢子分離法 孢子是食用菌的基本繁殖單位。 ? （ 9）整個(gè)操作過程動作必須迅速無誤，時(shí)時(shí)刻刻樹立無菌觀念。 ? （ 7）操作人員最好換消毒的工作服，戴口罩，雙手要用 70%75%的酒精消毒。 ? （ 5）棉塞塞入管口或瓶口的部分，拔出后不要與未經(jīng)滅菌的物體接觸。 ? （ 3）菌種管口、瓶口的部分必須用酒精燈火焰封閉。雖然各級菌種的接種有所差異，但無菌操作的基本要點(diǎn)是相同的： ? （ 1）接種空間一定要徹底地消毒滅菌。一般是將其添加到培養(yǎng)料中，由于食用菌種類不同，選擇藥物也應(yīng)有不同的種類與濃度。殺菌機(jī)理主要是干擾核酸合成及細(xì)胞分裂，從而達(dá)到殺菌目的。 ? 內(nèi)吸殺菌劑 如：苯來特、多菌靈、涕必靈、麥穗寧、甲基托布津等等。如果熟石灰常時(shí)間暴露在空氣中，它吸收空氣中的二氧化碳而變成無效的碳酸鈣。因此，堿能殺菌。 ? 石灰 它分為生石灰（ CaO）與熟石灰 〔 Ca(OH)2〕 兩種。 ? 新潔爾滅 它是季胺類的表面活性劑。一般乙醇用于皮膚及器械消毒。如果在乙醇中加入稀酸或稀堿則殺菌效力增加。 ? 乙醇 一般用 70％～ 75％濃度，其殺菌效果最好。具體做法是在坩堝（或培養(yǎng)皿）加入甲醛溶液，然后用酒精燈熏蒸或在甲醛內(nèi)加入高猛酸鉀（約 5克 /立方米），任其反應(yīng)揮發(fā)，關(guān)上門窗悶一夜，就能起到消毒滅菌作用。 ? 甲醛 甲醛是氣體，易溶于水，通常使用 37％～40％的甲醛溶液（即福爾馬林），它的殺菌力比石炭酸強(qiáng)。因此，它殺菌力較強(qiáng)，常用作比較殺菌力的標(biāo)準(zhǔn)。有氯化鈉存在時(shí)酚的藥效增加，有乙醇存在時(shí)則藥效大減。石炭酸能溶于水，有特殊氣味，濃石炭酸能使皮膚變白、手指麻痹，并可損壞皮膚與粘膜，因此，它對人畜有毒。食用菌生產(chǎn)當(dāng)中，多在無菌室、無菌箱中安裝紫外線燈，利用紫外線進(jìn)行消毒 。其殺菌力強(qiáng)而穩(wěn)定，由于細(xì)胞中 DNA吸收了這一波長，輕則發(fā)生變異，重則造成死亡。具有殺菌作用。 ? 蒸鍋滅菌法： 食用菌生產(chǎn)中常用大鍋蒸料滅菌，一般采用 100仞大鍋，四周圍用磚水泥砌一圓或方形的鍋圍子，高 1～ ，在大鍋內(nèi)放一簾子，待鍋內(nèi)水沸騰后，在簾上見汽撒料，當(dāng)料全部撒完后，再蓋上蓋或用塑料蓋上并扎緊，蒸 2個(gè)小時(shí)就可以達(dá)到滅菌的目的。如不排盡冷空氣則達(dá)不到滅菌效果，雖然壓力高但達(dá)不到相應(yīng)的溫度，因此滅菌效果不佳。 使用本法滅菌注意升壓前要排盡鍋內(nèi)冷空氣，也就是鍋內(nèi)水沸騰后（蒸汽溫度 100℃ 以上）可繼續(xù)排冷空氣 5分鐘左右，一般可排盡冷空氣。又因?yàn)檎羝麩岽┩噶?qiáng)，故可迅速引起微生物蛋白質(zhì)凝固，因此，高壓蒸汽滅菌方法是一種較好的滅菌方法。另一方法是使烘箱升溫160℃ 以上時(shí)，可關(guān)閉烘箱的通風(fēng)孔，切斷電源，待烘箱內(nèi)溫度降至 50℃ 以下，就能達(dá)到殺菌目的。一是接通電源，徐徐使烘箱升溫至 160～ 180℃ ，并保持兩小時(shí)就能達(dá)到滅菌目的。除液體石蠟外，一切液體均不能用此法滅菌。常用的滅菌方法有： ? 干熱滅菌法：是利用干燥箱中熱空氣造成高溫環(huán)境滅菌。常用的滅菌方法有物理滅菌和化學(xué)滅菌法兩大類。自然界中到處都有微生物存在，為了得到食用菌的純培養(yǎng)物。 第三節(jié) 消毒與滅菌 ? 微生物是形體微小的生物。 ? 第四、拌料、分裝至滅菌鍋溫度達(dá)到 100℃ ，時(shí)間越短越好。米糠和麩皮都要用新鮮的，變質(zhì)結(jié)塊的一律不能用。針葉樹和具有芳香、異味的樹種木屑不宜用。培養(yǎng)基滅菌完畢從鍋中取出后，應(yīng)放在冷卻室內(nèi)冷卻，準(zhǔn)備接種。 ? （ 3）滅菌 原種采用高壓蒸汽滅菌，栽培種塑料袋據(jù)材料可采用高壓或常壓滅菌。裝袋一般用裝袋機(jī)。用清水洗凈瓶口粘著的培養(yǎng)基，并把瓶身也洗抹干凈，蓋好瓶口即可滅菌。 ? （ 2）分裝 ? 裝瓶前必須將空瓶洗干凈，干燥。 制作方法 ? （ 1）配制 按配方稱取原料，先將易溶物質(zhì)溶于適量水中，其它原料進(jìn)行混合，干拌后，加入易溶物質(zhì)的溶液進(jìn)行攪拌，要求充分拌均勻，干濕一致，含水適中，使料的含水量達(dá)到 60％～ 65％。 ? （ 5）谷粒培養(yǎng)基 ? 以小麥、大麥、高粱、玉米、谷子等為主料制作的培養(yǎng)基統(tǒng)稱為谷粒培養(yǎng)基。 ? ② 玉米芯 79％，米糠 10％，玉米粉 8％，石膏粉 1％，復(fù)合肥 2％，料水比 1:。配方主要有： ? ①干稻草 97％，過磷酸鈣 ％，硫酸銨 ％ , 石膏粉 1％，料水比 1:～ ； ? ②干稻草 79％，麩皮或米糠或玉米面 20％，碳酸鈣 1％ , 料水比 1:～ 。配方主要有： ? ①棉籽殼 78％，麩皮或米糠 20％，蔗糖 1％，石膏粉 1％，料水比 1:～ ； ? ②棉籽殼 96％，蔗糖 2％，過磷酸鈣 1％，石膏粉 1％，料水比 1:～ ； ? ③棉籽殼 96％，麩皮或米糠 2％，過磷酸鈣1％，石膏粉 1％，料水比 1:～ 。 ? ③ 闊葉樹木屑 98％，麩皮 1％ , 尿素 ％ ,碳酸鈣 ％ ,磷酸二氫鉀 ％ , 硫酸鎂 ％ , 高錳酸鉀 ％ , 料水比1:。原種和栽培種培養(yǎng)基的種類很多 ? 常用配方 ? （ 1）、木屑培養(yǎng)基 以木屑為主料，主要適用于木腐菌的菌種生產(chǎn)。無菌檢查是將斜面培養(yǎng)基放在 37℃ 恒溫箱中培養(yǎng) 24小時(shí)，培養(yǎng)基表面無任何雜菌長出即為合格的培養(yǎng)基。 第五步：擺斜面、無菌檢查 ? 滅菌鍋壓力降到 0時(shí)，開鍋取出試管，待其溫度降到約 60℃ 時(shí)即可擺斜面，做法是：在桌面平放 2厘米厚的木條，將試管斜放在木條上，培養(yǎng)基冷卻后即凝固成斜面。標(biāo)準(zhǔn)的棉塞應(yīng)是塞頭略大，不易變形，塞入試管口2～ 3厘米，占塞總長的 2/3， 1/3裸露在試管口外，比管口略大。試管裝量，制斜面培養(yǎng)基一般為試管高度的 1/5～ 1/4；制深層培養(yǎng)基一般為試管高度的 1/2～ 1/3。分裝所用的容器要清洗、干燥。 第三步：添加瓊脂和分裝。 ?第二步：測定、調(diào)整酸堿度。文火煮沸 25分鐘左右，用 4層紗布過濾取汁； （ 3）玉米粉