【正文】 取上清液 10181。l，點(diǎn)于濾紙上，以 45%乙醇展開，取出，晾干，放置 10分鐘，置紫外燈（ 365nm）下檢視，不得顯持久的亮紫色熒光。 C H C HO HO C H 3OH Og lu第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法 3. 阿膠膏劑揮發(fā)性堿性物質(zhì)的檢查 ①揮發(fā)性堿性物質(zhì)包括游離氮和揮發(fā)性低鏈胺、芳香胺類。如三甲胺、尸胺、吲哚等； ②利用凱氏定氮法可確定樣品中揮發(fā)性堿性物質(zhì)（以氮 N計）的的含量。 第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法 烏頭酯型生物堿的檢查 （ 1）制川烏中酯型生物堿的檢查 — 比色法 雙酯型生物堿在堿性條件下與鹽酸羥胺反應(yīng)，生成 異羥肟酸 ，再與三價鐵離子反應(yīng)，生成紅色的異羥肟酸鐵，在 520nm波長處有特征吸收，因此在此波長處測定其吸收，從而算出濃度而控制制川烏的毒性成分含量。 （ 2）附子理中丸中烏頭堿的檢查 — 薄層層析法 以烏頭堿為對照品，采用薄層層析法對含烏頭制劑進(jìn)行薄層層析，通過比較樣品中與烏頭堿對照品色譜相應(yīng)位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)大小及有無進(jìn)行檢查。 難點(diǎn)提示： 應(yīng)注意特殊雜質(zhì)和一般雜質(zhì)的區(qū)別。 《 中國藥典 》 所列出的特殊雜質(zhì)的檢查較為有限，在進(jìn)行新藥研制時根據(jù)所用藥材的性質(zhì)及其制劑工藝特點(diǎn)，在確認(rèn)有可能引入某種特殊雜質(zhì)時應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的檢查。 第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查方法 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 一、對中藥材及中藥制劑進(jìn)行農(nóng)藥殘留量檢查的必要性 中藥材有相當(dāng)數(shù)量為人工栽培，為提高藥材產(chǎn)量，減少昆蟲、真菌和霉菌的危害，在生產(chǎn)過程中常噴灑農(nóng)藥。此外，土壤中殘留的農(nóng)藥也可能引入藥材中，致使中藥材農(nóng)藥殘留問題較為嚴(yán)重，而農(nóng)藥對人體危害極大，所以需對中藥材及中藥制劑進(jìn)行農(nóng)藥殘留量檢查。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 二、常見農(nóng)藥的種類 按化學(xué)結(jié)構(gòu)分類： ? 有機(jī)氯類： DDT、六六六等； ? 有機(jī)磷類：敵敵畏、樂果等； ? 苯氧羧酸類除草劑： 2， 4— D； 2， 4， 5— T等； ? 氨基甲酸酯類：西維因（甲萘威）等； ? 二硫代氨基甲酸酯類：福美鐵、福美鋅等； ? 無機(jī)農(nóng)藥：磷化鋁、砷酸鈣等； ? 植物性農(nóng)藥：煙葉和尼古丁等； ? 其他：溴螨酯、氯化苦等。 其中有機(jī)氯和有機(jī)磷類農(nóng)藥是長期殘留的，故應(yīng)測定其含量。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 三、農(nóng)藥殘留量的測定 殘留農(nóng)藥的提取 ?提取溶劑： ? 有機(jī)氯類農(nóng)藥：常用正已烷（或石油醚）、乙腈、丙酮、苯等，混合溶劑常用正已烷（或石油醚） — 丙酮、乙腈 — 水等。 ? 有機(jī)磷類農(nóng)藥：根據(jù)其極性采用相應(yīng)極性的溶劑進(jìn)行提取。 ?提取方法： ? 索氏提取法； ? 振蕩提取法。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 三、農(nóng)藥殘留量的測定 樣品純化： ? 液 — 液分配（ LLP）：常用溶劑體系有二氯甲烷 — 丙酮 /水、二氯甲烷 — 甲醇 /水、乙腈 — 石油醚、乙腈 — 石油醚 /水、二氯甲烷 — 乙腈 /水等。 ? 柱層析分離：常用吸附劑有弗羅里硅土（ Florisil）、 CeliteNuchar、硅膠、氧化鋁、活性炭等。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 三、農(nóng)藥殘留量的測定 檢測方法：以色譜分離方法為主，常用薄層色譜法、氣相色譜法。 （ 1）薄層色譜法： ①層析系統(tǒng)： 有機(jī)氯農(nóng)藥 吸附劑：硅膠 G、氧化鋁、 GF254等； 展開劑：已烷、庚烷等。 有機(jī)磷農(nóng)藥：吸附劑：硅膠 G、氧化鋁、硅藻土、 纖維素 和聚酰胺等。 展開劑：丙酮、氯仿、乙腈、環(huán)已烷等。 ②顯色劑：有機(jī)氯農(nóng)藥：硝酸銀； 有機(jī)磷農(nóng)藥：剛果紅、 4（對硝基芐基）吡啶 （ NBP）等。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 三、農(nóng)藥殘留量的測定 檢測方法：以色譜分離方法為主，常用薄層色譜法、氣相色譜法。 （ 2）氣相色譜法： ①層析柱：常用玻璃柱（柱長以 12m為宜）或彈性毛細(xì)管柱。 ②檢測器：常用電子捕獲檢測器。 ③固定液及其配比 有機(jī)氯農(nóng)藥：常用 DC200、 OV1 QF SE OV210等， 配比一般為 %10%. 有機(jī)磷農(nóng)藥：常用 10%DC200、 10%200+15%QF 2%DEGS等。 ④擔(dān)體： chromosorb WAW DMCS，目數(shù)一般用 80~100目。 ⑤柱溫：有機(jī)氯農(nóng)藥：一般使用 180℃ 220℃ ，視農(nóng)藥而異，其中以 200℃ 最常用； 有機(jī)磷農(nóng)藥：測定對象不同，柱溫變化較大。 ⑥載氣：常以高純氮（含氮 %）為載氣，流速 50150ml/min。 難點(diǎn)提示： ? 對中藥制劑進(jìn)行農(nóng)藥殘留量檢查已成為必然，尤其是出口中藥材及中藥制劑必須進(jìn)行該項(xiàng)檢查。 ? 農(nóng)藥殘留量分析屬微量分析，在對樣品進(jìn)行前處理時需特別注意待測成分的損失。 第四節(jié) 農(nóng)藥殘留量的檢查 第五節(jié) 黃曲霉素的檢查 一、對中藥材及中藥制劑中黃曲霉素含量進(jìn)行控制的必要性 中藥材采集后干燥或貯存不當(dāng)，或在制備和加工過程中處理不善，可能污染在自然界普遍存在的黃曲霉而產(chǎn)生黃曲霉毒素，黃曲霉毒素具有極強(qiáng)的毒性和致癌性，故需對中藥材及中藥制劑中黃曲霉毒素含量進(jìn)行控制。 黃曲霉的基本結(jié)構(gòu)： 黃曲霉毒素是一類結(jié)構(gòu)相似的化合物，其基本結(jié)構(gòu)都有二呋喃和香豆素。黃曲霉毒素在紫外線照射下，都能了出熒光，根據(jù)熒光顏色、 Rf值及結(jié)構(gòu)等不同，分別命名為 B B G G M M PQ等。 第五節(jié) 黃曲霉素的檢查 二、黃曲霉素的理化性質(zhì) ? 水中溶解度低； ? 易溶于油及一些有機(jī)溶劑，如氯仿、丙酮、甲醇等； ? 不溶于乙醚、石油醚和已烷中； ? 耐熱，一般在制藥加工的溫度下很少破壞，在 280℃ 時發(fā)生裂解。 第五節(jié) 黃曲霉素的檢查 三、黃曲霉的檢測方法 微柱色譜法： 將樣品提取液通過氧化鋁 硅鎂型吸附劑填充的微柱，樣品的雜質(zhì)被氧化鋁吸附，黃曲霉毒素則被硅鎂型吸附劑吸附，在紫外光下觀察熒光環(huán)，與標(biāo)準(zhǔn)柱比較進(jìn)行定量。 薄層色譜法： （ 1）單向展開法：樣品中的黃曲霉毒素 B1經(jīng)提取、濃縮和用單向展開法在薄層上分離后，在 365nm紫外線照射下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光。根據(jù)其在薄層上顯示熒光的最低檢出量定量。 （ 2）又向展開法：樣品中的黃曲霉毒素 B1被提取、濃縮后在薄層板上點(diǎn)樣。先用無水乙醚對薄層做橫向展開，將干擾的雜質(zhì)推到樣品點(diǎn)的一側(cè)而黃曲霉毒素 B1留在點(diǎn)樣處。然后再用丙酮氯仿混合液做縱向展開，黃曲霉毒素 B1所在位置的雜質(zhì)底色大大減少，因而有利于觀察。 第五節(jié) 黃曲霉素的檢查 三、黃曲霉的檢測方法 熒光分析法 根據(jù)黃曲霉毒素 B1有熒光的性質(zhì)，利用微柱色譜法將樣品分離后，用熒光法測定；或者利用堿將黃曲霉毒素分離后用熒光法測品。 HPLC法 樣品中的黃曲霉毒素 B1用三氯甲烷提取，提取液經(jīng)弗羅里硅土柱凈化，濃縮，定容。溶液用柱后衍 液相色譜熒光檢測法測定，外標(biāo)法定量。 免疫化學(xué)法 樣品中的黃曲霉毒素 B1經(jīng)提取、脫指、濃縮后與定量特異性抗體反應(yīng)，多余的游離抗體則與酶標(biāo)板內(nèi)的包被抗原結(jié)合，加入酶標(biāo)記物和底物后顯色，與標(biāo)準(zhǔn)物產(chǎn)生的顏色比較測定含量。