[理學(xué)]第三章蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)測(cè)定-資料下載頁
2025-01-19 15:06本頁面
【正文】 1H N N H C H COR 2SNHCN H OCR 1C HN H 2 C H COR 2NCO C HN HSCR 1Edman 測(cè)序 法 Edman降解與 DNSCl法的結(jié)合 164。 164。 164。 DNS— Edman法 用 DNS法鑒定 N末端氨基酸， 用 Edman法降解提供依次減 少一個(gè)氨基酸殘基的多肽。 （ 2） 其他序列測(cè)定法 （了解） ? 酶降解 法 序列 ABCDEFGHIJK 酶解 AB， CD， EF， GH， IJ， K－ Edman循環(huán)后再酶解 BC， DE， FG， HI， JK， ? 質(zhì)譜法 其它測(cè)定方法 利用外切蛋白水解酶 (exopeptidase) 將肽鏈的氨基酸從 N端 (aminopeptidase)或C端 (carboxypeptidase)一個(gè)接一個(gè)游離出來，在不同時(shí)間取樣進(jìn)行分析，根據(jù)所游離的氨基酸的摩爾數(shù)的多少來判斷氨基酸的排列順序 。 酶解法肽小片段測(cè)序 酶解法末端測(cè)序 質(zhì)譜法 Edman循環(huán)后看分子量的變化 質(zhì)譜法 一般測(cè)定步驟 確定肽段在多肽鏈中的次序。 利用兩套或多套肽段的氨基酸順序彼此間的交錯(cuò)重疊，拼湊出整條多肽鏈的氨基酸順序。 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定 一般測(cè)定步驟 二硫鍵位置的確定。 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定 為防止 Cys跟 CysCys發(fā)生交換反應(yīng)，先將自由 SH基封閉。 進(jìn)行專一性部分水解 紙層析分離水解產(chǎn)物 氣相過甲酸法切斷 SS鍵，作第二相紙層 析 。 將遷移率發(fā)生變化的多肽進(jìn)行測(cè)序 經(jīng)典的二硫鍵位置的確定法 二硫鍵位置確定 ? 一般采用胃蛋白酶處理沒有斷開二硫鍵的多肽鏈， ? 再利用雙向電泳技術(shù)分離出各個(gè)肽段，用過甲酸處理后，將每個(gè)肽段進(jìn)行組成及順序分析， ? 然后同其它方法分析的肽段進(jìn)行比較，確定二硫鍵的位置。 二硫鍵位置的確定
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