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2025-01-17 15:21本頁面
【正文】 . ? Tm值相差最好不要超過 2c,長度相差最好不要超過 4bp. ? ,盡量避免發(fā)卡結(jié)構(gòu) . 實時熒光定量 PCR在科研和臨床上的應(yīng)用 定量： ?DNA定量 ?RNA定量 定性： ?SNP分析 ?基因型分析 ?RNA變異分析 ?熔解曲線分析 DNA拷貝數(shù)研究（替代 Southern Blot） – DNA或 RNA的轉(zhuǎn)染量與實驗結(jié)果關(guān)系的研究 – 基因整合拷貝數(shù)的研究 (性狀） 基因表達差異分析（替代 Northern Blot)： –特殊刺激因子影響 –時空表達差異 –細胞增殖 –病理進程 研究方面的部分應(yīng)用 ? 分子生物學(xué)方面： ? 研究各種處理對細胞 mRNA含量變化的影響 ? 比較染病組織與正常組織中各種 mRNA含量差異 ? DNA或 RNA的轉(zhuǎn)染量與實驗結(jié)果關(guān)系的研究 ? 基因整合拷貝數(shù)的研究 (轉(zhuǎn)基因技術(shù)） ? 植物學(xué)方面： ? 轉(zhuǎn)基因植物中基因拷貝數(shù)與性狀的關(guān)系 ? 監(jiān)測轉(zhuǎn)基因植物中基因拷貝數(shù)的變化 ? 轉(zhuǎn)基因植株早期的篩選 ? 監(jiān)測農(nóng)作物病蟲害抗藥性變化 ? 研究新的藥物及方法 實時熒光定量 PCR法 TaqMan法舉例 TaqMan法研究 ERBB2 在乳腺腫瘤 組織標本中的表達差異 TaqMan法舉例 標記探針 使用 TaqMan 探針進行雙通道熒光定量 ? Fam標記目標基因探針 ? VIC標記看家基因探針 TaqMan法舉例 材料準備 ?從正常乳腺組織中提取的 總 RNA ?從乳腺癌組織中提取的 總 RNA ?含 ERBB2 and GAPDH 的質(zhì)粒用于生成標準曲線 ?單雙通道同時進行，獨立分析 ? Controls –no RNA：陰性對照 –RNA + no reverse transcriptase：基因組對照 TaqMan法舉例 反應(yīng)程序 RTqPCR 反應(yīng)程序： 50186。C,30min 95186。C,15min 94186。C,15sec 60186。C,1min plate read 10186。C,forever End 35 more times TaqMan法舉例 癌癥標記物表達 Color 2 VIC detection for GAPDH Color 1 – FAM detection for ERBB2 TaqMan法舉例 實驗結(jié)果 定量 Copies ng/ 181。l Total RNA Healthy RNA Tumor RNA Tumor/Healthy ERBB2 1095 1052 2130 2492 X GAPDH 95500 85730 136000 130800 X TaqMan法舉例 實驗結(jié)果 定量分析 ERBB2 copies / GAPDH copies 1095 / 95500 = 1052 / 85730 = 2130/136000 = 2492/130800 = Healthy RNA Tumor RNA Graph Copies ng/ 181。l Total RNA TaqMan法舉例 實驗結(jié)果 表達差異 Healthy Tissue Carc. Tissue Relative Expression ERBB2的 表達差異 TaqMan法舉例 實驗結(jié)果 討論 通過 RTqPCR成功檢測了 ERBB2基因在不同組織的 表達差異；在乳腺癌組織中，ERBB2的表達量是正常水平的 定量 PCR的操作 （天根試劑盒） 謝謝
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