trizol法提取rna實(shí)驗(yàn)步驟-資料下載頁
2025-04-16 12:35本頁面
【正文】 反應(yīng)按照TaKaRa公司的PrimeScript174。 RT reagent Kit With gDNA Eraser（Perfect Real Time) 反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進(jìn)行，合成cDNA模板。①基因組DNA的除去反應(yīng)，在PCR管中配置如下緩沖液。 試劑用量5gDNA Eraser Buffer μlgDNA Eraser μlTotal RNAX* ulRNase Free dH2Oup to 10 μl X*：根據(jù)檢測到的RNA濃度來配置；混合均勻后，室溫放置2030min②反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，在PCR管中配置如下緩沖液（20ul system），反應(yīng)液配制在冰上進(jìn)行。為了保證反應(yīng)液配制的準(zhǔn)確性，進(jìn)行各項(xiàng)反應(yīng)時，先按反應(yīng)數(shù)+1的量配制Master Mix ，然后再分裝到每個反應(yīng)管中。 試劑使用量5PrimeScript174。 Buffer 2（for Real Time） ulPrimeScript174。 RT Enzyme Mix I μlRT Primer Mix μl①的反應(yīng)液 ulRNase Free dH2Oup to 20 μl ③混合均勻后，在PCR儀上進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，反應(yīng)條件為：37℃ 15 min85℃ 5 sec然后將得到的cDNA存放于20℃冰箱保存待用。
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