【正文】 剪接位點也與 3’剪接位點結(jié)合。 參加剪接反應(yīng)的蛋白質(zhì)因子有兩種類型： 一類結(jié)合在 UsnRNA上形成 snRNP復(fù)合物 ， 例如 Sm蛋白，共同地與 U U U5 snRNA緊密結(jié)合； U1 snRNP中有 3種而 U5snRNP有 7種蛋白緊密地與之特異結(jié)合。 另外， 還有一些蛋白暫時地與 snRNP組分相互作用并起著特殊的作用，它們是一些 RNA依賴的ATPase和螺旋酶 ， 如酵母的 PRP24促進 U4— U6復(fù)合物的形成， PRP4通過蛋白 — 蛋白相互作用結(jié)合 U4— U6snRNP和U5snRNP形成上述的三元 snRNP復(fù)合物； PRP8與 U5snRNP結(jié)合并和 3’ 剪接位點相互作用。這些蛋白的一部分基序結(jié)合到 RNA上，另一部分結(jié)合到蛋白質(zhì)上形成蛋白 “ 橋 ” ，介導(dǎo) RNARNA相互作用，以及剪接體構(gòu)象改變，通過決定構(gòu)象改變的計時來影響剪接。 另一類是一些結(jié)構(gòu)相關(guān)進化上保守的蛋白質(zhì)因子，稱之為SR(SRP)家族 。 已 發(fā)現(xiàn)此家族的成員有 SRP SRP30a、 (SF2／ ASF)、SRP30b(PR264／ SC35)、 SRP SRP5 SRP70～ 75(數(shù)字表示分子質(zhì)量， kDa)， 這些蛋白的 N端有一個共同的基序 (RRM或RBD)識別和結(jié)合 RNA； 其 C端長度變化， 由交替的絲氨酸和精氨酸殘基組成的結(jié)構(gòu)域可能和結(jié)合特異性有關(guān) 。 這些蛋白在剪接過程早期起著幫助前 mRNA投入剪接，后期護送snRNP加入剪接體，在剪接的兩步反應(yīng)中一直與剪接體締合。由于這些蛋白因子的表達量是組織特異的，而它們存在的量和剪接位點的選擇又相關(guān)，因而不同的 SRP蛋白對不同的剪接位點的優(yōu)先利用表現(xiàn)為一種組織特異性。 SRP蛋白在離體剪接中都表現(xiàn)出活性的互補，但不同的 SRP蛋白有其保守性， 又說明每種 SRP蛋白應(yīng)有其不同的功能。 反式剪接 (trans— splicing) 前面討論的剪接過程都是發(fā)生在一個 RNA分子內(nèi)部，即通過剪接將一個 RNA分子內(nèi)的內(nèi)含子剪掉，使外顯子連接在一起 ——順式剪接 (cissplicing) 。 但也有另外一種情況，即不同基因的外顯子剪接后相互連接，此稱為 反式剪接（ transsplicing） 已發(fā)現(xiàn)，在錐蟲、線蟲以及植物的葉綠體中發(fā)生兩個RNA分子之間的剪接，即 反式剪接 。 反式剪接是以兩種不同來源的 RNA前體分子作為底物。反式剪接的 5’端外顯子 稱為剪接前導(dǎo) RNA(spliced leader RNA， SL RNA)。 經(jīng)過剪接在成熟的 mRNA非翻譯部分 5’端剪接上一小段稱為“剪接前導(dǎo)序列 (spliced leader， SL)”或“小外顯子 (miniexon)”的 RNA片段。 這些片段本來并不存在于相應(yīng)的編碼基因前面，而是由其他 DNA鏈轉(zhuǎn)錄而來。已發(fā)現(xiàn)的各種 SL RNA有一些共同的特點：都折疊成一種相同的二級結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)有 3個莖 —環(huán) (stemloop)和一個單鏈區(qū)，此單鏈區(qū)類似于 U1的 Sm結(jié)合位點。因此， SL RNAs存在和 snRNPs相似的形式。 4 RNA的編輯和修飾 RNA編輯（ RNA editing） 某些 RNA，特別是 mRNA的一種加工方式，它導(dǎo)致了 DNA所編碼的遺傳信息的改變，因為經(jīng)過編輯的mRNA序列發(fā)生了不同于模板 DNA的變化。 單堿基突變 尿苷酸的缺失和添加 載脂蛋白 B基因有 29個外顯子 第 2153位密碼子 CAA 編碼谷氨酰胺 CAA UAA 肝中剪切的 mRNA編碼 4563個氨基酸殘基的蛋白質(zhì) 腸 mRNA因 UAA密碼子在 2153位密碼子終止合成 RNA修飾 某些 RNA，特別是前體 rRNA和 tRNA還可能有異性化學(xué)修飾。 本次內(nèi)容 轉(zhuǎn)錄后加工 RNA剪切 真核生物與原核生物 mRNA比較 1. 半衰期短。 原核生物中， mRNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯是在同一個細胞空間里同步進行的，蛋白質(zhì)合成往往在 mRNA剛開始轉(zhuǎn)錄時就被引發(fā)了 。 也即轉(zhuǎn)錄和翻譯相偶聯(lián) 。 原核生物 mRNA的特征 mRNA（包括病毒）有時可以編碼幾個多肽，而真核細胞的 mRNA最多只能編碼一個多肽。 我們把只編碼一個蛋白質(zhì)的 mRNA稱為單順反子 mRNA（ monocistronic mRNA），把編碼多個蛋白質(zhì)的 mRNA稱為多順反子mRNA（ polycistronic mRNA）。 幾乎所有 mRNA都可以被分成 3部分：編碼區(qū)和位于 AUG之前的 5’端上游非編碼區(qū)以及位于終止密碼子之后不翻譯的 3’端下游非編碼區(qū)。 5’ 3’ AUG UAA mRNA的次級結(jié)構(gòu)可能控制翻譯的起始 一個順反子的翻譯有時完全取決于它前面順反子的翻譯，因為只有第一個翻譯起始位點是暴露的，在這個順反子翻譯產(chǎn)生多肽的過程中，核糖體的運動破壞了后續(xù)順反子的二級結(jié)構(gòu)，使起始位點較容易與核糖體相結(jié)合形成起復(fù)合物 3. 原核生物 mRNA的 5’端無帽子結(jié)構(gòu)， 3’端沒有或只有較短的多聚（ A）結(jié)構(gòu)。 原核生物起始密碼子 AUG上游 712個核苷酸處有一被稱為 SD序列 （ Shine –Dalgarno sequence）的保守區(qū)，因為該序列與 16SrRNA 3’端反向互補，所以被認為在核糖體 mRNA的結(jié)合過程中起作用。 4. 原核生物常以 AUG（有時 GUG，甚至UUG）作為起始密碼子，而真核生物幾乎永遠以 AUG作為起始密碼子。 真核生物 mRNA的特征 編碼功能蛋白的真核基因都通過 RNA聚合酶 II進行轉(zhuǎn)錄，幾乎都是 單順反子， 其長度在幾百到幾千個核苷酸之間。 一個完整的基因，不但包括編碼區(qū)（ coding region），還包括 539。 和 339。 端長度不等的特異性序列，它們雖然不編碼氨基酸，卻在基因表達的過程中起著重要作用。 “ 基因 ” 的分子生物學(xué)定義是：產(chǎn)生一條多肽鏈或功能 RNA所必需的 全部核苷酸序列 ！ A gene can be defined as following: The entire nucleic acid sequence that is necessary for the synthesis of a functional polypeptide or RNA molecule. 1. 真核生物 mRNA的 5’端存在 “ 帽子 ”結(jié)構(gòu) 。真核生物基因轉(zhuǎn)錄一般從嘌呤（主要是 A，也可能是 G）起始，其 5’端大都經(jīng)過修飾，第一個核苷酸保留了 5’端的三磷酸基團。 2. 絕大多數(shù)真核生物 mRNA具有 多聚(A)尾巴 。除組蛋白基因外，真核生物mRNA的 3’末端都有多聚（ A）序列，其長度因 mRNA種類不同而變化，一般為40200個左右。 真核基因的 339。 末端轉(zhuǎn)錄終止位點上游 15～ 30bp處的保守序列AAUAAA對于初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的準(zhǔn)確切割及加多聚（ A）是必需的。 多聚 (A)是 mRNA由細胞核進入細胞質(zhì)所必需的形式，它大大提高了 mRNA在細胞質(zhì)中的穩(wěn)定性。 mRNA剛從細胞核進入細胞質(zhì)時，其多聚 (A)尾巴一般比較長，隨著 mRNA在細胞質(zhì)內(nèi)逗留時間延長，多聚 (A)逐漸變短消失， mRNA進入降解過程。 播放動畫 : transcription prokaryotic amp。 eukaryotic 課后復(fù)習(xí)題 一、名詞解釋 1. 核酶 2. RNA剪接 3. 順式剪接 4. 反式剪接 5. 組成型剪接 6. 可變剪接 7. RNA編輯 二、簡答題 1. 真核生物和原核生物 mRNA之間的異同。 2. 簡述真核 hnRNA、 mRNA的加工成熟過程 . 謝謝大家。