光譜法色譜法ppt課件-資料下載頁
2025-01-14 07:39本頁面
【正文】 管柱分離 ， 體積約為 102~103μL； 體積過大或進樣過慢 ， 將導致分離變差 （ 拖尾 ） ； 進樣針最大容量與進樣量要匹配 。 汽化室要求：體積小；熱容量大；對樣品無催化作用 包括：填充柱和毛細管柱（或開管柱） 分離系統(tǒng) 填充柱： 多為 U形或螺旋形；內徑 2~6mm； 長 1~3m；內填固定相 。 毛細管柱： 分為涂壁 、 多孔層和涂載體開 管柱 ， 內徑 ~， 長達幾十至 100m， 通常彎成直徑 10~30cm的螺旋狀；其特點 為滲透性好 、 傳質快 ， 分離效率高 （ n可達 106） 、 分析速度快 、 樣品量小 。 作用對象： 氣化室 、 柱箱 、 檢測器 控溫方式： 恒溫和程序升溫 溫控系統(tǒng) 作用 ： 將經(jīng)色譜柱分離后順序流出的化學組分的信息轉變?yōu)楸阌诩o錄的電信號，然后對被分離物質的組成和含量進行鑒定和測量。 常用的檢測器： 氫火焰離子化檢測器 (Flame ionized detector， FID) 熱導檢測器 (Thermal conductivity detector， TCD) 電子捕獲檢測器 (Electron capture detector ， ECD) 質譜檢測器 (MSD)即 氣相 — 質譜聯(lián)用儀 (GCMS) 檢測系統(tǒng) 主要用于可在 H2Air火焰中燃燒的有機化合物（如烴類物質）的檢測。 通用型檢測器 主要對含有較大電負性原子的化合物響應。它特別適合于環(huán)境樣品中鹵代農藥和多氯聯(lián)苯等微量污染物的分析。 質譜是唯一可以給出分子量 , 確定分子式的方法 , 而分子式的確定對化合物的結構鑒定 是至關重要的 四、高效液相液相色譜法 (HPLC) (high performance liquid chromatography ) HPLC的概念、分類、特點及應用 HPLC系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。 根據(jù)分離機制不同，分為 液固吸附 色譜、 液液分配 色譜、 化學鍵合 色譜、 離子交換 色譜、 分 子排阻 色譜等 概念 分類 利用保留值作為定性參數(shù)； 利用在樣品中加入對照品 ， 通過峰值增高來確認； 利用 LCMS聯(lián)用儀 ， 通過被分離物的質譜圖與譜 庫的譜圖對比來定性； 利用二極管陣列檢測器給出 UV光譜與對照品相比較 ， 結合保留時間來確認 。 應用 高速 、 高效 、 高靈敏度 、 應用廣泛 （ GC分析只占 有機 物的 20%， HPLC分析可占 80%） 特點 高效液相色譜儀 輸液系統(tǒng) 進樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng) 檢測系統(tǒng) 其 工作過程 如下：首先高 壓泵將貯液器中流動相溶劑經(jīng) 過進樣器送入色譜柱，然后從 控制器的出口流出。當注入欲 分離樣品 時，流經(jīng)進樣器貯液 器的流動相將樣品同時帶入色 譜柱進行分離，然后依先后順 序進入檢測器，記錄儀將檢測 器送出的信號記錄下來，由此 得到液相色譜圖。 輸液系統(tǒng) 高壓輸液泵：壓力： 150～ 350 105 Pa 為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相 （ 10μm） ， 液體的流動相高速通過時 ， 將產(chǎn)生很高的壓力， 因此高壓 、 高速是高效液相色譜的特點之一 。 常用的輸液泵分為 恒流泵 和 恒壓泵 兩種。 六通閥進樣 進樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng) 分離系統(tǒng)的主要元件是色譜柱，它是色譜分 離過程中存放固定相的場所 。 常用檢測器： 紫外 可見檢測器 (Ultraviolet and Visible Detector, UVD) 熒光檢測器 (Fluorescence Detector, DFD) 折光指數(shù)檢測器 (Refractive Index Detector, RID) 蒸發(fā)光散射檢測器 (Evaporative Light Scattering Detector, ELSD) 質譜檢測器 (Mass Detector, MSD) 檢測系統(tǒng) 應用最廣，對大部分有機化合物有響應 主要用于氨基酸、多環(huán)芳烴等生物制品及環(huán)境監(jiān)測及 體內藥物分析 適合于無紫外吸收、無電 活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測 通用型檢測器 固定相與裝柱方法的選擇： 選粒徑小的、分布均勻的球形固定相 （ dp≤10 μ m） 首選化學鍵合相，勻漿法裝柱 流動相及其流速的選擇： 選粘度小、低流速的流動相 — 甲醇， 約 1ml/min 柱溫的選擇：選室溫 250C左右 HPLC法中分離條件的選擇 ★ ★ ★ 第八章 藥品生物檢測技術
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