光譜法色譜法ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-01-14 07:39本頁(yè)面
【正文】 管柱分離 ， 體積約為 102~103μL； 體積過(guò)大或進(jìn)樣過(guò)慢 ， 將導(dǎo)致分離變差 （ 拖尾 ） ； 進(jìn)樣針最大容量與進(jìn)樣量要匹配 。 汽化室要求：體積?。粺崛萘看?；對(duì)樣品無(wú)催化作用 包括：填充柱和毛細(xì)管柱（或開(kāi)管柱） 分離系統(tǒng) 填充柱： 多為 U形或螺旋形；內(nèi)徑 2~6mm； 長(zhǎng) 1~3m；內(nèi)填固定相 。 毛細(xì)管柱： 分為涂壁 、 多孔層和涂載體開(kāi) 管柱 ， 內(nèi)徑 ~， 長(zhǎng)達(dá)幾十至 100m， 通常彎成直徑 10~30cm的螺旋狀；其特點(diǎn) 為滲透性好 、 傳質(zhì)快 ， 分離效率高 （ n可達(dá) 106） 、 分析速度快 、 樣品量小 。 作用對(duì)象： 氣化室 、 柱箱 、 檢測(cè)器 控溫方式： 恒溫和程序升溫 溫控系統(tǒng) 作用 ： 將經(jīng)色譜柱分離后順序流出的化學(xué)組分的信息轉(zhuǎn)變?yōu)楸阌诩o(jì)錄的電信號(hào)，然后對(duì)被分離物質(zhì)的組成和含量進(jìn)行鑒定和測(cè)量。 常用的檢測(cè)器： 氫火焰離子化檢測(cè)器 (Flame ionized detector， FID) 熱導(dǎo)檢測(cè)器 (Thermal conductivity detector， TCD) 電子捕獲檢測(cè)器 (Electron capture detector ， ECD) 質(zhì)譜檢測(cè)器 (MSD)即 氣相 — 質(zhì)譜聯(lián)用儀 (GCMS) 檢測(cè)系統(tǒng) 主要用于可在 H2Air火焰中燃燒的有機(jī)化合物（如烴類(lèi)物質(zhì)）的檢測(cè)。 通用型檢測(cè)器 主要對(duì)含有較大電負(fù)性原子的化合物響應(yīng)。它特別適合于環(huán)境樣品中鹵代農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯等微量污染物的分析。 質(zhì)譜是唯一可以給出分子量 , 確定分子式的方法 , 而分子式的確定對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)鑒定 是至關(guān)重要的 四、高效液相液相色譜法 (HPLC) (high performance liquid chromatography ) HPLC的概念、分類(lèi)、特點(diǎn)及應(yīng)用 HPLC系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。 根據(jù)分離機(jī)制不同，分為 液固吸附 色譜、 液液分配 色譜、 化學(xué)鍵合 色譜、 離子交換 色譜、 分 子排阻 色譜等 概念 分類(lèi) 利用保留值作為定性參數(shù)； 利用在樣品中加入對(duì)照品 ， 通過(guò)峰值增高來(lái)確認(rèn)； 利用 LCMS聯(lián)用儀 ， 通過(guò)被分離物的質(zhì)譜圖與譜 庫(kù)的譜圖對(duì)比來(lái)定性； 利用二極管陣列檢測(cè)器給出 UV光譜與對(duì)照品相比較 ， 結(jié)合保留時(shí)間來(lái)確認(rèn) 。 應(yīng)用 高速 、 高效 、 高靈敏度 、 應(yīng)用廣泛 （ GC分析只占 有機(jī) 物的 20%， HPLC分析可占 80%） 特點(diǎn) 高效液相色譜儀 輸液系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng) 檢測(cè)系統(tǒng) 其 工作過(guò)程 如下：首先高 壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng) 過(guò)進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從 控制器的出口流出。當(dāng)注入欲 分離樣品 時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液 器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色 譜柱進(jìn)行分離，然后依先后順 序進(jìn)入檢測(cè)器，記錄儀將檢測(cè) 器送出的信號(hào)記錄下來(lái)，由此 得到液相色譜圖。 輸液系統(tǒng) 高壓輸液泵：壓力： 150～ 350 105 Pa 為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相 （ 10μm） ， 液體的流動(dòng)相高速通過(guò)時(shí) ， 將產(chǎn)生很高的壓力， 因此高壓 、 高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一 。 常用的輸液泵分為 恒流泵 和 恒壓泵 兩種。 六通閥進(jìn)樣 進(jìn)樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng) 分離系統(tǒng)的主要元件是色譜柱，它是色譜分 離過(guò)程中存放固定相的場(chǎng)所 。 常用檢測(cè)器： 紫外 可見(jiàn)檢測(cè)器 (Ultraviolet and Visible Detector, UVD) 熒光檢測(cè)器 (Fluorescence Detector, DFD) 折光指數(shù)檢測(cè)器 (Refractive Index Detector, RID) 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 (Evaporative Light Scattering Detector, ELSD) 質(zhì)譜檢測(cè)器 (Mass Detector, MSD) 檢測(cè)系統(tǒng) 應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng) 主要用于氨基酸、多環(huán)芳烴等生物制品及環(huán)境監(jiān)測(cè)及 體內(nèi)藥物分析 適合于無(wú)紫外吸收、無(wú)電 活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測(cè) 通用型檢測(cè)器 固定相與裝柱方法的選擇： 選粒徑小的、分布均勻的球形固定相 （ dp≤10 μ m） 首選化學(xué)鍵合相，勻漿法裝柱 流動(dòng)相及其流速的選擇： 選粘度小、低流速的流動(dòng)相 — 甲醇， 約 1ml/min 柱溫的選擇：選室溫 250C左右 HPLC法中分離條件的選擇 ★ ★ ★ 第八章 藥品生物檢測(cè)技術(shù)
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