食品安全現(xiàn)代生物檢測技術(2)-資料下載頁
2025-01-08 13:08本頁面
【正文】 法、定量競爭PCR(Quantitative petitive PCR)和 Real—time PCR(實時定量 PCR)法等三種。 ? （ 1）半定量 PCR法 ? ①樣品 DNA的提取和定量。 ? 按常規(guī)方法提取 DNA后，取部分樣品 DNA在 ％瓊脂糖凝膠中電泳，與已知古量的 Marker比較，用計算機凝腔成像分析系統(tǒng)處理結果，以確定所提取的 DNA量。例如，一般700mg的玉米粉可提取 lμg DNA。 ? ② PCR反應。 ? DNA的質量分析 ? ? CaMV35S啟動子的定量 PCR反應 ? （ 2）定量競爭 PCR法 PCR反應實質是對特定模板 DNA的指數(shù)擴增放大，而在相同的條件下，獲得 DNA的量與最初模板DNA的濃度成正相關，競爭定量 PCR就是依據(jù)這種擴增 DNA與模板 DNA之間的濃度相關性設計的?；驹硎窍葮嫿ê行揎椷^的內(nèi)部標準 DNA片段 (競爭 DNA)，競爭 DNA由質粒組成，帶有一個改造 PCR擴增子，改造部分可以是 DNA插人序列、缺失序列或者點突變，競爭 DNA與待測目標 DNA在同一反應管中進行 PCR共擴增，因競爭 DNA片段和待測 DNA的大小不同，經(jīng)瓊脂糖凝膠可將兩者分開，通過比較兩種條帶的量可進行定量分析。 ? （ 三）生物芯片與轉基因產(chǎn)品檢測 ? 就目前轉基因食品檢測中常用的 ELISA和 PCR技術而言，最大的缺點是檢測范圍窄，效率低，無法高通量大規(guī)模地同時檢測多種樣品，尤其是對轉基因背景一無所知的情況下。對各種候選待檢基因序列或蛋白的逐一篩查幾乎是不可能的。而目前正在研究的轉基因產(chǎn)品所涉及的基因數(shù)量有上萬種，今后都有可能進入商品化生產(chǎn)，顯而易見對進出口產(chǎn)品的檢測，需要有更有效的、快速、特別是高通量的檢測方法，最近幾年出現(xiàn)的生物芯片技術能較好地解決這一問題。生物芯片根據(jù)所載探針種類分為基因芯片和蛋白質芯片兩大類：基因芯片以 DNA為探針。依據(jù)核酸雜交的原理檢測樣品中的特定基因序列；蛋白質芯片以蛋白質為探針，依據(jù)抗原抗體反應的免疫學原理檢測樣品中的特定蛋白質。
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