王惠敏-藥包材微生物檢驗-資料下載頁
2025-01-08 02:16本頁面
【正文】 典（ USP）中規(guī)定： “將微生物接種至一新鮮培養(yǎng)基上 /內，每萌發(fā)一次即稱為一代，”并規(guī)定“菌種的傳代次數(shù)（自原始菌種凍干粉起）不得超過 5代”。 ? 我國的 GMP認證中也如此要求，并且中國藥典2022年版藥典也已做出 “菌種的傳代次數(shù)（自原始菌種凍干粉起）不得超過 5代 ”這個明確的規(guī)定。 常用的傳代方法 斜面接種 劃線接種 液體接種 穿刺接種 菌種的傳代 斜面接種時的無菌操作 ?微生物的環(huán)境器皿及培養(yǎng)基的無菌 ?操作者的外界環(huán)境及操作過程的無菌（環(huán)境及操作的無菌） 劃線接種 平板劃線法（ streak plate method） 菌種的使用 菌液的制備： 取銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置 35～ 37℃ 細菌培養(yǎng)箱培養(yǎng) 18 ～ 24h。 取 上述 液體培養(yǎng)物 1ml，加入 9ml %無菌氯化鈉溶液中，分別 10倍稀釋至 105～ 109，制成含菌數(shù)小 100cfu/ml的溶液，備用。 菌懸液制備后應在 2小時內使用，若保存在 2～ 8℃ 的菌懸液可以在 24小時內使用。 菌種的使用 銅綠假單胞菌相關： 因銅綠假單胞菌有運動性，因此在半固體培養(yǎng)基中穿刺培養(yǎng)后無法形成穿刺線。接種時，將半固體取出直接在培養(yǎng)基上涂布即可。 斜面保藏的菌種在冰箱中放置應注意控制溫度，一般不宜低于 4℃ ，也可以放置在室溫中，但應控制溫度不超過 25 ℃ 。菌種保存過程中，會存在色素退化 的情況，此時對菌種進行傳代培養(yǎng)，即可重新表現(xiàn)出色素，仍可使用。 菌種的保藏 保藏的方法： 1 斜面低溫保藏法 2 甘油冷凍管保藏法 3 試管熔封（密封）保藏法 4 石蠟油封藏法 5 砂土管保藏法 6 麩皮保藏法 7 冷凍真空干燥保藏法 8 液氮超低溫保藏法 菌種的保藏 甘油冷凍管保藏法－常用保藏法： 將待保藏菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基 （或液體培養(yǎng)基） 上，適宜溫度下培養(yǎng)適宜時間后，用無菌接種環(huán)輕輕刮取菌苔，通過接種環(huán)與試管壁之間的輕輕摩擦使細菌充分擴散到預先裝于試管中的無菌蒸餾水中，調整菌液濃度，向已制備好的菌懸液中 （或培養(yǎng)后的培養(yǎng)液中） 加入等體積、濃度為 20%的無菌甘油，得到 10%甘油菌懸液。輕輕振搖小管，使內容物充分混合，分裝無菌小管，最好在 70℃ 以下的條件下儲存，一般可保存 2年。 菌種的保藏 菌種凍存管 菌種的傳代、使用、保藏 ?菌種的銷毀 ?過期菌種應及時銷毀，銷毀時應經(jīng) 121℃ 20分鐘的生物滅活處理。
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1