王惠敏-藥包材微生物檢驗(yàn)-資料下載頁(yè)
2025-01-08 02:16本頁(yè)面
【正文】 典（ USP）中規(guī)定： “將微生物接種至一新鮮培養(yǎng)基上 /內(nèi)，每萌發(fā)一次即稱為一代，”并規(guī)定“菌種的傳代次數(shù)（自原始菌種凍干粉起）不得超過(guò) 5代”。 ? 我國(guó)的 GMP認(rèn)證中也如此要求，并且中國(guó)藥典2022年版藥典也已做出 “菌種的傳代次數(shù)（自原始菌種凍干粉起）不得超過(guò) 5代 ”這個(gè)明確的規(guī)定。 常用的傳代方法 斜面接種 劃線接種 液體接種 穿刺接種 菌種的傳代 斜面接種時(shí)的無(wú)菌操作 ?微生物的環(huán)境器皿及培養(yǎng)基的無(wú)菌 ?操作者的外界環(huán)境及操作過(guò)程的無(wú)菌（環(huán)境及操作的無(wú)菌） 劃線接種 平板劃線法（ streak plate method） 菌種的使用 菌液的制備： 取銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物少許接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置 35～ 37℃ 細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng) 18 ～ 24h。 取 上述 液體培養(yǎng)物 1ml，加入 9ml %無(wú)菌氯化鈉溶液中，分別 10倍稀釋至 105～ 109，制成含菌數(shù)小 100cfu/ml的溶液，備用。 菌懸液制備后應(yīng)在 2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在 2～ 8℃ 的菌懸液可以在 24小時(shí)內(nèi)使用。 菌種的使用 銅綠假單胞菌相關(guān)： 因銅綠假單胞菌有運(yùn)動(dòng)性，因此在半固體培養(yǎng)基中穿刺培養(yǎng)后無(wú)法形成穿刺線。接種時(shí)，將半固體取出直接在培養(yǎng)基上涂布即可。 斜面保藏的菌種在冰箱中放置應(yīng)注意控制溫度，一般不宜低于 4℃ ，也可以放置在室溫中，但應(yīng)控制溫度不超過(guò) 25 ℃ 。菌種保存過(guò)程中，會(huì)存在色素退化 的情況，此時(shí)對(duì)菌種進(jìn)行傳代培養(yǎng)，即可重新表現(xiàn)出色素，仍可使用。 菌種的保藏 保藏的方法： 1 斜面低溫保藏法 2 甘油冷凍管保藏法 3 試管熔封（密封）保藏法 4 石蠟油封藏法 5 砂土管保藏法 6 麩皮保藏法 7 冷凍真空干燥保藏法 8 液氮超低溫保藏法 菌種的保藏 甘油冷凍管保藏法－常用保藏法： 將待保藏菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基 （或液體培養(yǎng)基） 上，適宜溫度下培養(yǎng)適宜時(shí)間后，用無(wú)菌接種環(huán)輕輕刮取菌苔，通過(guò)接種環(huán)與試管壁之間的輕輕摩擦使細(xì)菌充分?jǐn)U散到預(yù)先裝于試管中的無(wú)菌蒸餾水中，調(diào)整菌液濃度，向已制備好的菌懸液中 （或培養(yǎng)后的培養(yǎng)液中） 加入等體積、濃度為 20%的無(wú)菌甘油，得到 10%甘油菌懸液。輕輕振搖小管，使內(nèi)容物充分混合，分裝無(wú)菌小管，最好在 70℃ 以下的條件下儲(chǔ)存，一般可保存 2年。 菌種的保藏 菌種凍存管 菌種的傳代、使用、保藏 ?菌種的銷毀 ?過(guò)期菌種應(yīng)及時(shí)銷毀，銷毀時(shí)應(yīng)經(jīng) 121℃ 20分鐘的生物滅活處理。
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