【導(dǎo)讀】進(jìn)入生物安全二級實驗室從事檢測工作的所有人員嚴(yán)格按照本規(guī)定執(zhí)行。在實驗室內(nèi)的一切活動，必須遵照生物安全手冊的規(guī)定進(jìn)行。實驗室內(nèi)產(chǎn)生的污水，必須經(jīng)過消毒后方可進(jìn)入公共污水系統(tǒng)。實驗室的所有廢棄品，必須通過高壓滅菌后才能處理。材料、更換維修的儀器設(shè)備、也只有在確保無病原微生物污染的條件下，才能攜出實驗室。的實驗操作，置其內(nèi)進(jìn)行，以保證實驗室內(nèi)空間的安全。數(shù)據(jù)，必須準(zhǔn)確可靠：實驗室出具的檢驗報告，必須明確完整。開啟實驗室主電源，使實驗室及生物安全柜投入運行。污染材料飛濺的操作時，需加戴防護(hù)眼鏡。洗滌時避免液體材料飛濺。75%乙醇，保持20分鐘，然后以紙巾擦干。放置污染物品的容器裝滿時，應(yīng)更換新的容器。放入高壓消毒袋內(nèi)，再次浸泡手套后除去手套，用75%酒精棉球擦面部裸露部位。并注明更改原因。在需要出具正式實驗報告的場合，報告由實驗者填寫署名，交實驗室負(fù)責(zé)人記錄核對后簽字，毒，方可處理或重新投入使用。

　　

【正文】 爾馬林，密閉熏蒸消毒 6 小時后方可帶出。 地面消 毒：工作結(jié)束，應(yīng)用含有有效 2020mg/L 的消毒液噴灑拖地。 廢棄物的處理：實驗的廢棄物應(yīng)放入適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，就地 121℃高壓消毒 30 分鐘，消毒后的廢棄物集中收集、焚燒處理。 23 十二 .實驗室高壓消毒安全操作 使用前應(yīng)了解并掌握高壓鍋的原理及操作規(guī)則，以及不正確使用而導(dǎo)致的災(zāi)難性后果。 按照操作規(guī)程使用高壓鍋 接通電源，合上高壓滅菌器左側(cè)總電源開關(guān)。 注入加熱用水，注水至加熱器罩的水位水準(zhǔn)器配件尖端浸入水中為止。 設(shè)定滅菌溫度，先 按“編集”鍵，然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需溫度，然后按“實行”鍵，把所設(shè)溫度存進(jìn)程序。 設(shè)定滅菌時間，先按“編集”鍵，然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需時間，然后按“實行”鍵，把所設(shè)時間存進(jìn)程序。 按“實行”鍵執(zhí)行滅菌程序，此時“滅菌”燈閃爍。 當(dāng)滅菌程序執(zhí)行完成，滅菌程序自動停止運行。 在確認(rèn)壓力表的顯示壓力降到 0 刻度時，打開高壓滅菌器頂蓋，取出滅菌樣品。 高壓鍋操作人員在使用高壓鍋時不得離開崗位；在日常使用過程中，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，并按照規(guī)定進(jìn)行設(shè)備的維護(hù)。每 1 年保養(yǎng)一次，每月檢測一次消毒效果。 高壓鍋的物品不得放的過滿，否則影響滅菌效果。放好被消毒滅菌的物品后，高壓鍋的蓋子或門必須擰緊。 定期檢查高壓鍋，以確保其正常工作，防止意外事故發(fā)生，保證消毒滅局效果。 高壓滅菌安全操作步驟 在滅菌前將雙層的高壓滅菌帶包好，廢物在滅菌袋中的體積不能超過袋子體積的 3/4，滅菌袋用橡皮帶捆好，但不能扎得太死，否則蒸汽不能進(jìn)入所料袋內(nèi)影響滅菌效果。 實驗產(chǎn)生的所有廢物應(yīng)該及時就地滅菌處理。如果滅菌器正在使用或優(yōu)于其它原因不能馬上使用，則廢物 必須放在滅菌袋內(nèi)捆好并放在實驗室內(nèi)，在存放期間確保袋子無損壞。 當(dāng)高壓鍋消毒滅菌盜時間后，取出物品放在廢物收集處。 當(dāng)開始滅菌時必須確信滅菌國內(nèi)水量合適，高壓溫度和時間設(shè)置正確。滅菌應(yīng)保持在 121℃ 30 分鐘，時間和溫度不得超過設(shè)定值，否則滅菌袋會融化，清理困難。 24 十三、 HIV 初篩實驗室試劑管理制度 （一）、采購與審批 實驗室負(fù)責(zé)人根據(jù)需要定期擬定采購計劃，交由中心主任審批，批核后由單位辦公室統(tǒng)一招標(biāo)采購 （二）、驗收與登記 倉管負(fù)責(zé)人根據(jù)供應(yīng)商提供的試劑及清單對數(shù)量、品種、品 牌、包裝等進(jìn)行驗收，并將入庫數(shù)據(jù)登記。 （三）、貯存 冷藏試劑統(tǒng)一存放在 HIV 實驗室 專用的冰箱內(nèi)，冷箱保管及溫度控制由倉管負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)。 HIV 試劑一般應(yīng) 2～ 8℃避光保存，在有效期內(nèi)使用。 （四）、出庫管理 各室提出試劑申領(lǐng)，倉管人填寫出庫單據(jù)，認(rèn)領(lǐng)人簽名后出庫。 （五）、其它 試劑的保存應(yīng)嚴(yán)格按照要求存放，以保證有效期內(nèi)能有效地使用，杜絕 浪費現(xiàn)象。 倉管人應(yīng)對試劑庫存定期檢查，不使用過期變質(zhì)的試劑。 易燃，易爆試劑應(yīng)分開存放遠(yuǎn)離火源和電源。 劇毒試劑必須由科主任和負(fù)責(zé)科室保衛(wèi)的同志負(fù)責(zé)保存，放保險箱內(nèi)，使用時應(yīng)有兩人在場，并做好登記。 25 十 四 、 艾滋病初篩檢測實驗操作規(guī)程 保證艾滋病病毒抗體 ELISA 實驗的準(zhǔn)確性。 艾滋病病毒抗體 ELISA 實驗。 樣品采集 樣品采集安試劑盒要求采集。采血時注意安全，用一次性注射器謹(jǐn)慎操作，防止發(fā)生刺傷和造成外界污染。血樣如即時用 可存于普通冰箱，如要長期保存，分離血清置于 20℃及以下。同時做好記錄。 樣品運送 樣品轉(zhuǎn)送，除特殊需要外，必須是血清或血漿，置于帶有蓋帽的試管內(nèi)，或?qū)⑺芰显嚬苡镁凭珶舴馑?，防止樣品流出。試管上?biāo)明姓名、時間、編號，將試管放入專門帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理，在所放試管周圍上下墊有軟性物質(zhì)，以免碰碎，容器外標(biāo)有HIV 檢測專用字樣和生物危害標(biāo)志。路途較遠(yuǎn)或氣候炎熱時，容器應(yīng)置于 4℃以下運送。這樣同時附送檢單。 樣品登記和處理 收到樣品后，及時填寫標(biāo)本登記記錄表，送樣人、收樣人簽 字，如已進(jìn)行過初檢，登記初檢結(jié)果和實驗方法及所用試劑情況。 對從其他實驗室送來的樣品，檢查并注明送檢單與標(biāo)本記錄的符合、樣品管破損、溢漏等情況。如有溢漏應(yīng)立即將尚存的血樣移出，并對管壁和盛器消毒。檢查并記錄樣品的質(zhì)量有無嚴(yán)重溶血、細(xì)菌污染、血脂過多以及黃疸等情況。 對實驗室自采的樣品，最好將血液先放置 12 個小時，再用 3000 離心 15 分鐘，吸出上清液備用，如在幾天內(nèi)檢測可放在 28℃冰箱中，如要貯存，置于 20℃冰箱。 實驗準(zhǔn)備 將試劑從冰箱中取出，按試劑盒要求時間恢復(fù) 室溫。 檢查并記錄冰箱、溫箱溫度。 按照試劑盒要求準(zhǔn)備實驗原始記錄表，標(biāo)明空白、陰性對照、陽性對照、外部質(zhì)控血清以及檢測樣本的位置：登記日期和實驗起止時間，記錄環(huán)境條件及試劑盒廠家、批號、效期：整個實驗過程中每一步操作都要在原始記錄表上詳細(xì)登記。 26 按照試劑盒的要求配置洗液及其他所需要的試劑。 加樣和稀釋 根據(jù)樣品數(shù)量將合適數(shù)量的酶標(biāo)板條固定在板架上，為了不損壞洗扳機(jī)，每道上的酶標(biāo)板條必須保持完整 {不足部分可用廢棄的微孔添充 }，檢查加樣器加樣刻度是否與試劑盒要求的加樣量相符 ，按照原始記錄表表明的位置加入各種質(zhì)控品和檢測樣品，注意：空白只加標(biāo)本稀釋液。加樣量和稀釋度嚴(yán)格按照試劑盒說明書規(guī)定的操作，一般先加樣品稀釋液后再加入樣品。加樣要準(zhǔn)確，小心不要使吸頭碰著酶標(biāo)板空上是包被抗原。為保證加樣的準(zhǔn)確，最好使用多孔道加樣器，使用時注意防止吸頭間的交叉污染。 溫育 貼好封板膜，按照試劑盒要求的溫度和時間進(jìn)行溫育，最好選擇濕育方法。 洗板 開啟洗板機(jī)前，先檢查洗板機(jī)廢液瓶是否已排空，開啟后先用蒸餾水沖洗管道，再換上洗液瓶。按照試劑盒的要求，選擇、修改洗扳方式、洗滌次數(shù)和浸泡 時間，根據(jù)所用酶標(biāo)板的條數(shù)確定洗板道數(shù)，根據(jù)酶標(biāo)板的位置調(diào)節(jié)洗頭的位置，然后開始洗板，洗板結(jié)束后用蒸餾水沖洗管道。 加酶結(jié)合物對于二步法 ELISA 實驗需加酶結(jié)合物，按試劑盒要求完成。 加底物洗好板后應(yīng)立即加底物，需加自配的底物應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。 終止反應(yīng) 在規(guī)定的時間內(nèi)用試劑盒中的或根據(jù)要求自行配置的終止液終止反應(yīng)。 酶標(biāo)儀讀物 按照試劑盒的要求選擇濾光片，確定空白孔位置，選擇合適達(dá)的打印報告格式，讀數(shù)并打印結(jié)果。 所用儀器在使用后及時填寫使用記錄。 結(jié)果判斷計算 根據(jù)試劑盒說明書要求的陰陽對照 OD 值范圍判斷實驗的準(zhǔn)確性，陰陽性對照 OD 值在范圍之內(nèi)，試驗方可成立，超出范圍，試驗失敗，整個實驗重做。 在指控圖上標(biāo)出外部指控血清的 S/CO 值，判斷實驗結(jié)果是否被接受。 以上兩個條件俊被接受后，根據(jù)試劑盒要求計算 cutoff 值。小于 cutoff 值的標(biāo)本為陰性，大于或等于 cutoff 值得標(biāo)本為陽性，在 cutoff177。 10%的標(biāo)本為灰色帶反應(yīng)。陽性及灰色反應(yīng)區(qū)標(biāo)本，用原有的試劑盒另一種試劑重復(fù)試驗。 結(jié)果登記和報告 將試驗結(jié)果登記在級路標(biāo)和 標(biāo)本試劑表上，將 OD 值打印結(jié)果貼在原始記錄表上，檢查原始記錄表是否填寫完整，操作者，復(fù)核者簽字。陰性結(jié)果出具 HIV 抗體篩查報考，陰性結(jié)果填寫 HIV 抗體篩查陽性送檢單。 27 標(biāo)本留存轉(zhuǎn)送 陰性標(biāo)本收集血清冷凍保存一年。并填寫陰性血清保存記錄表，陽性標(biāo)本收集血清封口包好，冷藏運送送確認(rèn)實驗室。 4. 支持性文件 全國艾滋病監(jiān)測工作規(guī)范 艾滋病實驗室安全操作及防護(hù)措施