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hiv實驗室生物安全手冊(參考版)

2024-10-16 19:46本頁面
  

【正文】 4. 支持性文件 全國艾滋病監(jiān)測工作規(guī)范 艾滋病實驗室安全操作及防護措施 。 27 標本留存轉送 陰性標本收集血清冷凍保存一年。 結果登記和報告 將試驗結果登記在級路標和 標本試劑表上,將 OD 值打印結果貼在原始記錄表上,檢查原始記錄表是否填寫完整,操作者,復核者簽字。 10%的標本為灰色帶反應。 以上兩個條件俊被接受后,根據(jù)試劑盒要求計算 cutoff 值。 結果判斷計算 根據(jù)試劑盒說明書要求的陰陽對照 OD 值范圍判斷實驗的準確性,陰陽性對照 OD 值在范圍之內,試驗方可成立,超出范圍,試驗失敗,整個實驗重做。 酶標儀讀物 按照試劑盒的要求選擇濾光片,確定空白孔位置,選擇合適達的打印報告格式,讀數(shù)并打印結果。 加底物洗好板后應立即加底物,需加自配的底物應現(xiàn)配現(xiàn)用。按照試劑盒的要求,選擇、修改洗扳方式、洗滌次數(shù)和浸泡 時間,根據(jù)所用酶標板的條數(shù)確定洗板道數(shù),根據(jù)酶標板的位置調節(jié)洗頭的位置,然后開始洗板,洗板結束后用蒸餾水沖洗管道。 溫育 貼好封板膜,按照試劑盒要求的溫度和時間進行溫育,最好選擇濕育方法。加樣要準確,小心不要使吸頭碰著酶標板空上是包被抗原。 加樣和稀釋 根據(jù)樣品數(shù)量將合適數(shù)量的酶標板條固定在板架上,為了不損壞洗扳機,每道上的酶標板條必須保持完整 {不足部分可用廢棄的微孔添充 },檢查加樣器加樣刻度是否與試劑盒要求的加樣量相符 ,按照原始記錄表表明的位置加入各種質控品和檢測樣品,注意:空白只加標本稀釋液。 按照試劑盒要求準備實驗原始記錄表,標明空白、陰性對照、陽性對照、外部質控血清以及檢測樣本的位置:登記日期和實驗起止時間,記錄環(huán)境條件及試劑盒廠家、批號、效期:整個實驗過程中每一步操作都要在原始記錄表上詳細登記。 實驗準備 將試劑從冰箱中取出,按試劑盒要求時間恢復 室溫。檢查并記錄樣品的質量有無嚴重溶血、細菌污染、血脂過多以及黃疸等情況。 對從其他實驗室送來的樣品,檢查并注明送檢單與標本記錄的符合、樣品管破損、溢漏等情況。這樣同時附送檢單。試管上標明姓名、時間、編號,將試管放入專門帶蓋的容器內,容器的材料要易于消毒處理,在所放試管周圍上下墊有軟性物質,以免碰碎,容器外標有HIV 檢測專用字樣和生物危害標志。同時做好記錄。采血時注意安全,用一次性注射器謹慎操作,防止發(fā)生刺傷和造成外界污染。 艾滋病病毒抗體 ELISA 實驗。 劇毒試劑必須由科主任和負責科室保衛(wèi)的同志負責保存,放保險箱內,使用時應有兩人在場,并做好登記。 倉管人應對試劑庫存定期檢查,不使用過期變質的試劑。 (四)、出庫管理 各室提出試劑申領,倉管人填寫出庫單據(jù),認領人簽名后出庫。 (三)、貯存 冷藏試劑統(tǒng)一存放在 HIV 實驗室 專用的冰箱內,冷箱保管及溫度控制由倉管負責人負責。滅菌應保持在 121℃ 30 分鐘,時間和溫度不得超過設定值,否則滅菌袋會融化,清理困難。 當高壓鍋消毒滅菌盜時間后,取出物品放在廢物收集處。 實驗產生的所有廢物應該及時就地滅菌處理。 定期檢查高壓鍋,以確保其正常工作,防止意外事故發(fā)生,保證消毒滅局效果。 高壓鍋的物品不得放的過滿,否則影響滅菌效果。 高壓鍋操作人員在使用高壓鍋時不得離開崗位;在日常使用過程中,必須嚴格按照操作規(guī)程執(zhí)行,并按照規(guī)定進行設備的維護。 當滅菌程序執(zhí)行完成,滅菌程序自動停止運行。 設定滅菌時間,先按“編集”鍵,然后按上下鍵調節(jié)到滅菌所需時間,然后按“實行”鍵,把所設時間存進程序。 注入加熱用水,注水至加熱器罩的水位水準器配件尖端浸入水中為止。 23 十二 .實驗室高壓消毒安全操作 使用前應了解并掌握高壓鍋的原理及操作規(guī)則,以及不正確使用而導致的災難性后果。 地面消 毒:工作結束,應用含有有效 2020mg/L 的消毒液噴灑拖地。 空氣消毒:每次實驗前后用紫外燈照射消毒,每次不少于 1 小時,每立方米空間安裝紫外燈瓦數(shù)≥ ,距紫外燈 1 米處照射強度≥ 70W/㎡。防護鏡浸泡在 75%乙醇或有效氯為 1000mg/L 的含氯消毒劑中,作用 3060 分鐘。 22 工作臺等物體表面消毒:工作完畢,用含有效氯 2020mg/L 的消毒液或 75%乙醇溶液擦拭消 毒,作用 20 分鐘以上。其他器材方入有效氯為 2020mg/L 的含氯消毒液內浸泡 1 小時以上。 消毒方法 儀器等表面消毒:工作結束后,用含有效氯 1000 的消毒液或 75%乙醇溶液擦拭消毒,作用 20 分鐘以上。 實驗完畢,先消毒物體表面,再按規(guī)定程序脫下個人防護用品放入包裝袋 內就地高壓消毒,并進行空氣消毒。 實驗過程中使用的器材、實驗廢棄物均應按廢棄物處理程序進行消毒處理。 血清學試驗、樣品的處理和分裝應在 BSL2 安全柜內進行。實驗過程中注意自身防護,并防止操縱過程中的交叉污染。 實驗室內所有物品應專用,須帶出時必須嚴格消毒。 實驗室基本要求 實驗室相對獨立,實驗室核心區(qū)包括實驗間及緩沖間,明確劃分清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū),并有明顯標識。 微生物實驗室和生物安全二級實驗室。 所有實驗產生的廢棄物,必須經(jīng)嚴格高壓消毒后方能運出實驗區(qū),并送至 指定地點集中焚燒處理。 以上所有盛裝廢棄物的容器,在每次實驗結束后,就地高壓消毒。 實驗過程中產生的污染性液體物質、廢棄的液體標本等放在盛有消毒液的嚴格防滲漏的專用容器中,并及時加蓋。 廢棄物的處理 實驗后的廢棄物如不及時處置則會污染環(huán)境,從而對人造成危害,因此有關人員必須嚴格按照規(guī)定執(zhí)行。 打碎的玻璃器具,禁止用手直接清理,必須使用其他工具,如掃把、簸箕、夾子或鑷子等。非一次性銳器必須放置在堅壁容器中,進行高壓消毒處理。用過的針頭禁止折段、剪段、折段、重新蓋帽或從注射器上取下,禁止用手直接操作。 : 尖銳器具的處理 尖銳器具,如針、注射器等,除特殊情況外,禁止在實驗室使用,盡可能用塑料器材代替玻璃器材。 本 室檢出的 HIV 初篩陽性標本 應及時上 送 ,因工作需要暫時保 存 的 標本要雙人雙鎖管理 未經(jīng)上級批準,任何單位及個人不得以工作之便,進行國際間各類菌(毒)種交流,做好菌(毒)種安全防范工作。必須在 生物安全柜 內進行,并做好有關記錄。每一個得到信息的機構或個人均應做好保密工作 。結果填寫在報來的“艾滋病職業(yè)暴露人員個案登記表”內。如果職業(yè)暴露者以前已有 HIV 抗體的化驗結果,則應加以記錄。如果暴露源有急性 HIV 綜合征的癥狀,應同時檢測病毒載量。( 3)與自治區(qū)疾控中心有關專家聯(lián)系根據(jù)情況共同進行風險的評估,確定用藥的必要性、確定預防藥物和用藥程序,并將處 理情況向主管行政部門報告。( 2)寫明事故發(fā)生的詳細報告:包括發(fā)生時間、地點、經(jīng)過、暴露方式、損傷的具體部位、程度、接觸物的種類(血液或其他液體)、傷口的處理方法 及經(jīng)過。 、刺傷的傷口經(jīng)處理后,立即與新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生防疫站艾滋病預防與控制中心確認實驗室聯(lián)系,在 24 小時內(越早越好)趕到艾控中心,在專家的指導下,根據(jù)暴露情況進行預防性治療。 暴露級別的評估,分為 3 級。 暴 露 的 類 型 粘膜或可能有損傷的皮膚 只沾染完整的皮膚 刺、割傷皮膚 暴露量 不需 PEP 危險度 量小暴露時間短 量大 暴露時間 低危 如:表皮 擦傷、針刺等 高危 如:傷口較深、儀器上可見血液等 其它潛在傳染性物質 血液或含血液體
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