酶組織化學ppt課件-資料下載頁
2025-01-05 20:14本頁面
【正文】 四唑鹽法 用于顯示氧化酶和脫氫酶 原理 : 四唑鹽或雙四唑鹽 氫離子 與 與 底物混合液 無色四唑鹽結(jié)合 紅色或蘭色的沉淀 脫氫酶 +2H 被還原 常用四唑鹽種類 三苯四唑氯化物 TTC 藍四唑鹽 BT 新四唑鹽 NT ? 硝基藍四唑 NBT ? 四硝基藍四唑 TNBT ? 噻唑藍 MTT 以 琥珀酸（鈉鹽） 為底物，在酶的作用下脫氫，人工合成的 硝基藍四唑 （ NBT）為受 H體，其接受 H后被還原成紫色不溶物以代表琥珀酸脫氫酶的活性。 四唑鹽法顯示琥珀酸脫氫酶 ※ 琥珀酸脫氫酶是線粒體的標志酶之一。 SDH存在于所有有氧呼吸的細胞，以心肌、腎曲管上皮細胞、肝細胞含量最豐富△ 抑制物： 丙二酸鹽（競爭抑制） —— 對照 【 孵育液 】 琥珀酸鈉 , 磷酸鹽緩沖液 NBT(硝基藍四唑 ) 【 步驟 】 1. 新鮮組織低溫冰凍切片 2. 孵育液 1535 分鐘 3. 生理鹽水洗 4. Fca(氯化鈣 Formalin)固定 10分鐘 5. 入 80%乙醇 5分鐘 6. 甘油明膠封固 【 結(jié)果 】 酶活性處為藍紫色沉淀 小鼠心肌冰凍切片 琥珀酸脫氫酶 X400 ? 思考題： 在細胞培養(yǎng)中，常用的 MTT法 測定細胞活性，用的是什么原理？檢測的是什么酶？ 顯示酶的組織化學方法 （二）聯(lián)苯胺色素法 ? 檢測 過氧化物酶 ? 酶作用釋放的 氧 使無色的聯(lián)苯胺 脫氫 而形成有色的 聯(lián)苯胺藍 ，再形成聯(lián)苯胺褐。 ? 【 結(jié)果 】 酶活性處呈棕色 過氧化物酶 ? 催化各種物質(zhì)被過氧化氫（ H2O2）所氧化 ? 見于乳腺、甲狀腺、唾液腺、肥大細胞等 ? 髓過氧化物酶 見于中性和嗜酸性白細胞及其前體細胞中，對造血系統(tǒng)疾病的鑒別診斷極為重要 ? 免疫組化中常用 辣根過氧化物酶 （ HRP）作為大分子示蹤劑 ? 【 顯示方法 】 二氨基聯(lián)苯胺法 示過氧化物酶 ? 【 基本原理 】 過氧化物酶作用于底物（ 3，3二氨基聯(lián)苯胺， DAB），催化底物被 H2O2氧化，生成棕色的沉淀 ? 【 作用液 】 DAB， TrisHcl緩沖液， H2O2 ? 【 結(jié)果 】 酶活性處呈棕色 小鼠腹腔巨噬細胞 過氧化物酶 *400 白血病涂片 過氧化物酶 X400 顯示酶的組織化學方法 （三）靛酚藍法（吲哚酚法） ? 用于檢測 氧化酶 ，也可用于細胞色素氧化酶和過氧化物酶等。 ? 把 二甲基－對－苯二胺 和 α －萘酚 加入底物混合液中，由酶作用而釋放的 氧 與此二者發(fā)生結(jié)合，形成 靛酚藍 ，而顯示出酶的定位。 如細胞色素氧化酶 顯示酶的組織化學的其他方法 ? 色素底物法 —— 是將有的色素鹽類作為酶的底物，它本身不染組織細胞，但在酶的作用下分解出來的色素卻能沉著于酶所在部位。 ? 底物標記法 —— 是指用同位素、色素、金屬標記酶的底物，在酶的作用下，底物分解后沉著于酶所在部位，通過各種方法對此進行檢測。 酶組織化學的應用 1. 了解組織、細胞的代謝活動 2. 細胞類型的判斷 3. 了解細胞定位 4. 用于腫瘤的研究 5. 用于免疫組化和雜交組化的顯示手段 要求掌握的酶 ? 堿性磷酸酶 ? 酸性磷酸酶 ? 葡萄糖－ 6－磷酸酶 ? 三磷酸腺苷酶 ? 乳酸脫氫酶 ? 琥珀酸脫氫酶 ? 過氧化物酶法
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