高溫菌的分離純化與分子鑒定畢業(yè)論-資料下載頁
2025-06-07 12:57本頁面
【正文】 析可得出， 3hao 菌與 Geobacillus stearothermophilusKJ722527 Geobacillus stearothermophilus 同源率最高，相似性高達 100%，即該實驗分離出的菌株 3hao為嗜熱脂肪芽胞桿菌。 8 圖 4 3hao 菌株的驗證試驗 Figure 4 the Verification test of 3hao bacteria 將獲得的純種菌株在以乳糖為唯一碳源， xgal作為顯 色劑的培養(yǎng)基中進行生長，由圖可知，菌體產(chǎn)生了藍色的菌落，這說明該菌株能產(chǎn)生耐高溫的 β 半乳糖苷酶，即證明該菌株是嗜熱脂肪芽胞桿菌。 3 討論 細菌菌株的鑒定 本實驗先用傳統(tǒng)的方法：菌落形態(tài)觀察，革蘭氏染色， 在以乳糖為唯一碳源， xgal作為顯色劑的培養(yǎng)基中進行生長驗證 等一系列生化實驗，但這并不能準確得出該菌種屬；然后提取該菌株的全基因組 DNA，再以細菌 16SrDNA通用引物進行 PCR擴增，采用國際上常用的16SrDNA直接測序法，通過與國際上收錄的序列做同源比對，系統(tǒng)進化樹分析，可準確且快速地得出該 菌與嗜熱脂肪芽胞桿菌具有最高同源性。結合這兩種方法，可確定該菌為嗜熱脂肪芽胞桿菌。 從 16S rRNA 的系統(tǒng)進化分析可準確地鑒定出，菌 51為嗜熱脂肪芽胞桿菌屬，是典型的該屬菌種，但為了進一步提供充足的證據(jù)，對該菌又進行了一定的生理驗證試驗。在以乳糖為唯一碳源， xgal 作為顯色劑的培養(yǎng)基中進行生長，該菌株能產(chǎn)生藍色的菌落，即可得出該菌能產(chǎn)生耐高溫的 β 半乳糖苷酶，從而確定該菌是嗜熱脂肪芽胞桿菌。 3． 3高溫菌的研究意義 本實驗建立了分離和鑒定嗜熱高溫菌的方法，篩選出嗜熱脂肪芽胞桿菌 ，這為進一步開發(fā)利用高溫嗜熱菌的耐熱酶等寶貴資源，奠定了良好的基礎。同時本試驗篩選出的嗜熱脂肪芽胞桿菌具有很好的應用前景，該菌株能夠產(chǎn)生耐高溫的β 半乳糖苷酶。β 半乳糖苷酶 ,又稱乳糖酶 ,主要催化水解乳糖生成半乳糖和葡萄糖。它可用于生產(chǎn)低乳糖食品 ,改善乳制品 9 的風味和營養(yǎng) ,解除乳糖不耐受患者因食用乳制品而引起的腹瀉、腹脹等多種不良反應 ,除了具有水解能力外 ,該酶在水解糖過程中還會發(fā)生轉糖苷反應 ,生成具有多種生理功能的低聚半乳糖 (GOS)。 [8]因而 ,近年來有關β 半乳糖苷酶的研究與開發(fā)受到廣泛的重視因而本試驗為 進一步有關β 半乳糖苷酶的研究提供了優(yōu)良的菌種資源。 4 結論 通過該實驗所建的 16SrRNA 進化樹可知： 菌 3ｈａｏ 分離株與 Geobacillus stearothermophilus 在同一個分支上，為嗜熱脂肪芽胞桿屬與 Geobacillus stearothermophilusKJ722527 和 Geobacillus stearothermophilus 同源率最高，相似性高達 100%。結合傳統(tǒng)方法及 16SrRNA 進化樹的分析，可準確的得出，該菌為嗜熱脂肪芽胞桿菌。該菌在以乳糖為 唯一碳源， xgal作為顯色劑的培養(yǎng)基中進行生長時，能產(chǎn)生藍色的菌落，進而說明該菌株能產(chǎn)生耐高溫的 β 半乳糖苷酶，因而為該菌種屬的鑒定結果進一步提供了證據(jù)。 5 參考文獻 [1] 賈文祥 , 楊宏偉 . 川藏溫泉嗜熱菌的篩選與鑒定 . 華西醫(yī)大學報 JWCUMS1995。26(3).319一 321 [2] Harmsen D ,Karch H. 16S rDNA for diagnosing pat hogens :ali2 ving t ree [J ] . ASM News, 2021, 70:19224. [3] 劉毅 , 韓金祥 . 16S rRNA 基因在腦脊液細菌鑒定中的應用 [J ]. 臨床檢驗雜志 , 2021(4) [4] Olsen, ., , , , and D. A. [5] 郜虹 , 姚成 , 歐陽平凱 . DNA序列分析 [J]. 南京化工大學學報 (自然科學版 ). 2021(01) [6] 劉曉俠 , 林建平 , 岑沛霖 . 微生物基因組 DNA提取方法的比較與改進 [J]. 嘉興學院學報 . 2021 (03) [7] 國外醫(yī)學 (微生物學分冊 ) Foreign Medicine(Microbiology Section ISSN： 10011129 CN： 311370/R [8] 魏東芝 ,陳少欣 ,王筱蘭 ,袁勤生 .俞俊棠嗜熱脂肪芽孢桿菌 B半乳糖苷酶的性質 [J].微生物學報 2021,28（ 1） [9] Division of Bacterial and Mycotic Diseases, National Center for Infectious Diseases, Centers for Disease Control and Prevention, 1600 Clifton Rd NE, Mail Stop C02, Atlanta, GA 30333,USA ‘ 10 6 致謝 真 心感謝劉秀花老師及梁峰老師對我的畢業(yè)論文的精心指導與幫助，同時特別感謝梁峰老師給了我進入生物工程中心實驗室的機會，讓我有這樣的平臺來鍛煉自己不斷提高自己，因而順利的完成畢業(yè)論文。同時還要感謝宋兆齊老師等實驗室的老師們對我的畢業(yè)論文的完成的鼓勵與指導，真心謝謝您們。 11 [3] [5] [6] [7] [8]
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