【正文】 向試管內(nèi)輕輕地加大概一滴管的 濃硫酸，最后加數(shù)滴配好的苯酚溶液，輕輕振蕩。將過柱的液體每管取 200uL加入到酶標(biāo)儀的上樣板中，調(diào)節(jié)紫外光的波長，將其設(shè)置為 490nm。測定其中多糖的含量。 再濃縮 將分離后檢測有多糖的同一濃度梯度洗脫液洗脫出多糖的錐形瓶收集在一起進(jìn)行濃縮，以備后用。 透析 為除低聚糖、氨基酸等小分子物質(zhì)，把硫黃菌粗多糖濃縮液裝入透析設(shè)備的透析袋中，用去離子水透析兩天，用半透膜逆向流水透析可除去低聚糖、單糖、氨基酸、鹽類離子等小分子雜質(zhì)。透析處理完畢后，取出透析內(nèi)液，待用。 紅外光譜 測定 取硫黃菌多糖樣品 2mg左右， KBr壓片，紅外分光光度計調(diào)至4000cm1400cm1來對其進(jìn)行測定。 3 結(jié)果與討論 硫黃菌粗多糖的制備 采用醇沉法，用無水乙醇沉淀蛋白質(zhì)和多糖，乙醇溶液中仍有少量游離多糖，將乙醇液體進(jìn)行濃縮可以得到比較純的硫黃菌多糖，將濃縮后的粗多糖液靜置過夜，出現(xiàn)塊狀晶體。 硫酸 苯酚法檢測硫黃菌多糖 用硫酸 苯酚法檢測硫黃菌多糖，并與對照組比較，呈較明顯的陽性顯色反應(yīng)，證明確實為多糖成分。其顏色的變化與含量呈正相關(guān)，一般顏色越深表明其濃度越大。 采用 DEAE纖維素交換柱純化硫黃菌多糖 將過柱的液體每管取 200uL加入到酶標(biāo)儀的上樣板中，調(diào)節(jié)紫外光的波長，將其設(shè)置為 490nm；測定其中多糖的含量。結(jié)果如圖 1所示，在多糖的柱層析純化過程中，可以清楚地看到：不同濃度梯度的 NaCl 溶液洗脫后的溶液顏色對比相當(dāng)強(qiáng)，由此可以看出不同濃度洗脫后的硫黃菌多糖濃度不同。同時；圖 4亦顯示硫黃菌多糖的含量主要集中在前 9管中，后面幾乎沒有多糖洗脫下來，說明多糖采用低離子濃度的洗脫劑時即可分離洗脫下來，不宜采用高離子濃度的洗脫劑，需控制洗脫劑的離子濃度，以免離子濃度太大，達(dá) 不到分離的目的。 圖 1 多糖的含 量變化曲線 稱取 5mg硫黃菌多糖后，研磨成粉末，在與先前準(zhǔn)備好的 KBr 粉末充分研磨混合，得到 KBr 的薄板。在傅里葉交換紅外色譜儀中 4000cm1至 400cm1的范圍內(nèi)掃描測定。如圖 2 所示，硫黃菌多糖在紅外譜中顯示 和 的寬吸收峰指定為 OH、 NH 伸縮振動峰； 的吸收峰為不飽和的 CH的伸縮振動區(qū)； cm1， cm1處的吸收峰為 C=O的伸縮振動峰； cm1 的吸收峰為 CH 的彎曲振動峰； cm1, cm1, cm1的三處吸收峰表明為吡喃糖環(huán)；這一系列的吸收峰都為多糖的特征吸收峰。 圖 4 結(jié)論 本研究以硫黃菌子實體為材料，采用水浸提多糖，醇沉浸提濃縮液，乙醇除蛋白， DEAE52離子交換純化多糖，再濃縮、透析的方法，獲得了硫黃菌多糖，并經(jīng)硫酸 苯酚法檢測，且與對照組比較，呈較明顯的多糖陽性顯色反應(yīng)，其顏色的變化與含量呈正相關(guān)。硫黃菌多糖在掃描電 鏡下顯示為針狀結(jié)晶，晶體規(guī)整，透明度高。紅外譜顯示其在 cm cm1等處有明顯多糖特征峰出現(xiàn)，且成分單一，無其他結(jié)構(gòu)特征峰，表明該多糖為一種純品多糖，該研究結(jié)果為其結(jié)構(gòu)的進(jìn)一步確定和活性的研究奠定了基礎(chǔ)。 參考文獻(xiàn)： [1] 陳書明，鄭衛(wèi)紅 趙保東，花菇成因的機(jī)理和發(fā)生過程 .河南農(nóng)業(yè) ,2021（ 11） . [2] 楊德，周明，程薇，李露，高虹，史德芳，杜欣，陳明利，靈芝多糖提取純化及抗氧化研究 .湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)， ， . [3]李珺 ,鐘耀廣 ,劉長江 .香菇多糖的純化及電鏡分析 .山西農(nóng)業(yè)科學(xué) ,2021（ 3） 6～ 9. [4] 楊靜文 ,鄭潔虹 ,馬乃良 .靈芝多糖檢測鑒定方法 .現(xiàn)代食品科技 ,2021,. [5] 葉振南 ,邵家坪等 .粗多糖的提取、分離與結(jié)構(gòu)研究 [J].中國藥事 ,2021,14(5):329 332. [6]劉銳 .多糖類物質(zhì)的研究進(jìn)展 .安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) ,2021,33(9):1722一 [7]朱欣婷 ,郁建平 .植物多糖的生物活性研究進(jìn)展 .安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) ,2021,36(28):1207612077. [8] 沈萍萍，付庭治，曹幼琴 . 紅栓菌多糖的分離純化與分析 .生物化學(xué)， 1996,12（ 6）； 740743 [9] 許燕萍，笪遠(yuǎn)峰，楊偉珠等鳳尾側(cè)耳多糖的分離純化及其抗氧化作用 .中國生化藥物，1993,8(2):5962 [10] 曾凱宏，真菌多糖的結(jié)構(gòu)與功能 .食品科技， 2021（ 4） .2628 [11]曾凱宏 ,明建 ,曾凱芳 .真菌多糖的結(jié)構(gòu)與功能 [J].食品科技 ,2021(4):65～ 67. [12] 黃年來 .俄羅斯神秘的民間藥用真菌 —樺褐孔菌 [J].中國食用菌 ,2021,21(4):7～ 8. [13]朱 九軍 ,賀同聚 ,李臣民 .花菇形成機(jī)理與生產(chǎn)技術(shù)林業(yè)實用技術(shù) [J].林業(yè)實用技 術(shù) ,2021(11):35～ 36. [14]郭振楚 .糖類化學(xué) [M].北京 :化學(xué)工業(yè)出版社 , 一 胡雪瓊 ,吳紅棉 ,郝志明 ,等 .平菌多糖的提取工藝 [J].湛江海洋大學(xué)學(xué)報 ,2021,24(3):65一 69. [15]趙博 ,高文義 ,馮乾沖 ,等 .多糖類藥物提取分離研究概況 [J].長春中醫(yī)學(xué)院學(xué)報 ,2021,22(一 ):85~86. [16]高小榮 ,劉培勤 .多糖構(gòu)效關(guān)系研究進(jìn)展 [J].中草藥 ,2021,35(2):229一 231 [17]高學(xué)軍 ,孫亞榮 ,李艷波 .獲等多糖體的抗腫瘤作用及藥理研究 [J].中國藥學(xué)報 ,1996,(01):45. [18]唐小俊 ,張名位 ,池建偉等 .灰樹花多糖提取工藝優(yōu)化及多糖沖劑的研制 [J].食用菌 .2021,(6):58一 60. .[19]了吳梧桐 ,高美鳳 ,吳文俊 .多糖的抗腫瘤作用研究進(jìn)展 [J].中國天然藥物 ,2021,l(3):182 一186. [20]黃志江 ,季暉 ,李萍等 .人工蟲草多糖降血糖作用及其機(jī)制研究 [J].中國藥科大學(xué)學(xué)報 ,2021,33(1):51一 54. [21]董群 ,方積年 .多糖在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用 [J].中國藥學(xué)雜志 ,2021,36(10):649一 652. [22]曾先富 ,廖志勇 ,張軍 .野生朱紅硫磺菌馴化栽培研究 [J].中國食用菌 ,2021,24(6):18一 20. [23]減金平 ,袁生 ,連賓 .蜜環(huán)菌的研究進(jìn)展 [J].微量元素與健康研究 ,2021,21(3):47一 50. [24]潘冉 .香菇多糖臨床應(yīng)用研究進(jìn)展及香菇的藥用價值 [J].海峽藥學(xué) ,2021,(4):124一 125. 致謝 本文是在我尊敬的侯怡玲老師的指導(dǎo)下完成的，從論文選題、研究計劃的制定、實驗設(shè)計與實施到論 文的撰寫和修改，都凝聚著導(dǎo)師的心血。從他身上我學(xué)到了很多做人做事的道理，他淵博的知識、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度。敏銳的科學(xué)洞察力、踏實的工作作風(fēng)，以及大膽的創(chuàng)新精神都是我需要學(xué)習(xí)的地方。在此，謹(jǐn)向恩師表示我崇高的敬意和最真摯的感謝！ 回顧大學(xué)時光，我過的很充實。在這里，還要感謝我的班主任以及各科任課老師，感謝你們對我的幫助，更感謝你們對我的諄諄教誨；你們不只是讓我學(xué)到了知識，更學(xué)會做人的道理。 “低調(diào)做人，高調(diào)做事 ”，將成為我邁向職場的座右銘。此外，我還要感謝劉露師姐對我實驗的耐心指導(dǎo)；師姐認(rèn)真求實的科研精神給我留下了 非常深刻的印象。還有我的同學(xué)，謝謝你們對我的幫助，是你們陪我渡過了快樂的校園時光。 再次感謝母校對我的培養(yǎng)，我一定會努力工作！