【正文】 ）都具有較高相似性，為 91%。 通過(guò)對(duì)藥材甲 HSP90 基因的氨基酸序列與其他昆蟲(chóng) HSP90氨基酸序列進(jìn)行多重對(duì)比分析，結(jié)果表明，它們均具有保守的結(jié)構(gòu)域，且具有較高的同源性。 貴陽(yáng)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 14 圖 SpHsp90 基因核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列 (Hsp90 家族的 5 個(gè)保守基序用下劃線(xiàn)標(biāo)出，細(xì)胞質(zhì)型 Hsp90 C端基序（ MEEVD）用雙下劃線(xiàn)標(biāo)注，可能的加尾信號(hào)用灰色盒子標(biāo)注，星號(hào) *表示終止密碼子的位置；加粗阿拉伯?dāng)?shù)字表示氨基酸殘基位置，非加粗阿拉伯?dāng)?shù)字表示核苷酸位置 貴陽(yáng)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 15 藥材甲 HSP90 和 HSP70 基因系統(tǒng)發(fā)育分析 HSP70 為了理解 HSP70 之間的進(jìn)化關(guān)系，從 NCBI 站點(diǎn)的 GenBank 中下載了其他物種的HSP70 氨基酸序列，與本研究中的 1 個(gè) HSP70 推導(dǎo)的氨基酸序列共同構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。采用鄰接法所使用軟件為 MEGA 。該系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分為 6 支，分別來(lái)自 sHSP、 HSP70、HSP HSP60、 HSP HSP90。與赤擬谷盜 Tribolium castaneum()， 斜紋夜蛾 Spodoptera litura（ ）以及家蠶 Bombyx mori（ ）均在同一支上，這 與 Blast 同源性分析的結(jié)果大致上吻合 (圖 )。 HSP90 為了理解 HSP90 之間的進(jìn)化關(guān)系，從 NCBI 站點(diǎn)的 GenBank 中下載了來(lái)自其他物種的 HSP90 氨基酸序列，與本研究中的 1 個(gè) HSP90 推導(dǎo)的氨基酸序列共同構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。 結(jié)果表明 SpHSP90 與同為鞘翅目的 赤擬谷盜 Tribolium castaneum()的TcHSP90 親緣關(guān)系最近，最先聚為一支。然后再與黃粉蟲(chóng) Tenebrio molitor（ ）的 TmHSP90 和馬鈴薯葉甲 Leptinotarsa decemlineata（ ），而與雙翅目的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。這與 Blast 同源性 分析的結(jié)果基本吻合 (圖 )。 圖 采用鄰接法 (Neighbor joining method, NJ 法 )所使用 MEGA 軟件構(gòu)建的藥材甲 HSP70 和HSP90 與其他昆蟲(chóng) HSP 的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù) 貴陽(yáng)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 16 第三章 小結(jié)與討論 藥材甲是我國(guó)各地區(qū)重要的儲(chǔ)藏物害蟲(chóng)，近幾年來(lái)該蟲(chóng)仍在大部分地區(qū)對(duì)各種儲(chǔ)藏物造成嚴(yán)重危害。因?yàn)闅夂蜃兓挠绊?，極端氣候出現(xiàn)的頻率逐漸增加。藥材甲對(duì)于溫度的適應(yīng)能力逐漸增強(qiáng)，但對(duì)其適應(yīng)性的分子機(jī)制還鮮有報(bào)道。而熱激蛋白是一大類(lèi)應(yīng)對(duì)環(huán)境脅迫的重要的蛋白。本研究使用 RTPCR 技術(shù)成功克隆了藥材甲 HSP70 和 HSP90 基因cDNA 全長(zhǎng)序列，分別命名為 SpHSP70 和 SpHSP90。 在線(xiàn) Blastp 比對(duì)結(jié)果中， SpHSP70 推導(dǎo)的氨基酸序列與其他物種的 Hsp70 家族氨基酸序列高度同源。其氨基酸序列具有 3 個(gè)典型的 HSP70 家族保守基序，一個(gè) ATPGTP 綁定基序、雙組份核定位信號(hào)、非細(xì)胞器 HSP70 特征序列、細(xì)胞質(zhì)型 HSP70 C端基序、典型的四肽重復(fù)序列。這些都是 HSP70 家族的典型特征。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的分析中，與 赤擬谷盜Tribolium castaneum,斜紋夜蛾 Spodoptera litura 以及家蠶 Bombyx mori 均在同一支上 ，而B(niǎo)last 同源性分析的結(jié)果中，與三者的相似度都高達(dá) 92%。 SpHSP90 推導(dǎo)的氨基酸序列也與其他物種的 Hsp70 家族氨基酸序列高度同源。其氨基 序列具有 5 個(gè)典型的 HSP90 家族保守基序和一個(gè) 細(xì)胞質(zhì)型 Hsp90 C端基序 。系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的分析中， SpHSP90 與 赤擬谷盜Tribolium castaneum 的 TcHSP90 親緣關(guān)系最近，最先聚為一支。然后再與黃粉蟲(chóng) Tenebrio molitor 的 TmHSP90 和馬鈴薯葉甲 Leptinotarsa decemlineata，而與雙翅目的親緣關(guān)系較遠(yuǎn)，在 Blast 同源性分析中， SpHSP90 與黃粉蟲(chóng)的相似性高達(dá) 92%，與另兩種的相似性也達(dá)到了 91%。 在楊麗紅博士關(guān)于柑橘全爪螨 HSP70 基因的研究結(jié)果中，得到的柑橘全爪螨的 HSP70基因推導(dǎo)的氨基酸序列同樣具有三個(gè)典型的 HSP70 家族保守基序， ATPGTP 綁定基序、雙組份核定位信號(hào)、非細(xì)胞器 HSP70 特征序列與典型的四肽重復(fù)序列。柑橘全爪螨 HSP90基因 cDNA 全長(zhǎng)推導(dǎo)的氨基酸序列具有 5 個(gè)典型的 HSP90 家族特征基序以及細(xì)胞質(zhì)型HSP90 C端基序 [6] 。在 余昊，萬(wàn)方浩關(guān)于 B型煙粉虱和溫室白粉虱熱激蛋白 90基因 (HSP90)的研究中也得出了類(lèi)似的結(jié)論 [7]。這些都充分說(shuō)明了本研究所得到的藥材甲 HSP70 與HSP90 基因都分別屬于 HSP70 和 HSP90 這兩個(gè)大家族。 當(dāng)然，藥材甲體內(nèi)還有其他熱激蛋白，為了進(jìn)一步深入探討藥材甲的環(huán)境適應(yīng)機(jī)制，有必要對(duì)其他的熱激蛋白進(jìn)行進(jìn)一步的研究，通過(guò)系統(tǒng)地闡明熱激蛋白家族在藥材甲環(huán)境適應(yīng)中的作用機(jī) 制，將會(huì)給該蟲(chóng)的發(fā)生及暴發(fā)成災(zāi)機(jī)制提供新的理論 基礎(chǔ)， 并為開(kāi)展 藥材甲 綜合治理提供新的思路 。 貴陽(yáng)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 17 致 謝 歷時(shí)近 2個(gè)月時(shí)間終于將這篇論文完成，在論文的寫(xiě)作過(guò)程中我遇到了很多的困難和障礙，但都在老師和同學(xué)的幫助下度過(guò)了。尤其要強(qiáng)烈感謝我的論文指導(dǎo)老師 — 楊文佳老師，他對(duì)我無(wú)私地指導(dǎo)和幫助，不厭其煩幫助我進(jìn)行論文的修改和改進(jìn)。在此向幫助和指導(dǎo)過(guò)我的各位老師表示最由衷的感謝！ 感謝這篇論文所涉及到的所有學(xué)者。本文引用了數(shù)十位學(xué)者的研究文獻(xiàn)，如果沒(méi)有各位學(xué)者的研究成果的幫助和啟迪，我將很難完成本篇論文的寫(xiě)作。 感謝我的朋友和同學(xué)，在我寫(xiě)作論文的過(guò)程中給予了我很多的素材，還在論文的撰寫(xiě)和排版過(guò)程中向我提供熱情的幫助。 由于我的學(xué) 術(shù)水平有限，所寫(xiě)的論文難免有不足之處，懇請(qǐng)各位老師批評(píng)和指正！ 貴陽(yáng)學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)） 18 參考文獻(xiàn) [1] 王建義 . 熱激蛋白的研究進(jìn)展 [J]. 山西林業(yè)科技 , 2021,（ 1） : 2628. [2]Ritossa F. A new puffing pattern induced by temperature shock and DNP in Drosophila[J]. Experientia, 1962, 18: 571573. [3]唐嘯塵 . 熱激蛋白極其分子伴侶功能 [J]. 廣東蠶業(yè) , 1998, 32（ 2） : 5962. [4]王歡 . 蝶蛹金小蜂熱激蛋白家族基因表達(dá)與熱保護(hù)功能 [J]. 昆蟲(chóng)學(xué)報(bào) , 2021, 55（ 8） : 903905. [5]Lurie S, Klein J D, Fallik E. biochemical and cellular mechanisms of stress tolerance of plants[G]. Berlin: NATO ASI Series, Springer Vedag, 1994. 201212. [6]楊麗紅 . 柑橘全爪螨 Panonychus citri(McGregor)對(duì)熱脅迫的響應(yīng)機(jī)制研究 [D]. 重慶 : 西南大學(xué) , 2021: 1012. [7]余昊 , 萬(wàn)方浩 . B型煙粉虱和溫室白粉虱熱激蛋白 90基因 (HSP90)的全長(zhǎng) cDNA克隆與系統(tǒng)發(fā)育分析 [J]. 昆蟲(chóng)學(xué)報(bào) , 2021, 52（ 4） : 364366. [8]Feder M E, Krebs R A. Ecological and evolutionary physiology of heat shock proteins and the stress response in Drosophila: plementary insights from geic engineering and natural variation(M). Basel: Environmental Stress, 1997: 155173. [9]王萌長(zhǎng) . 昆蟲(chóng)生物化學(xué) [M]. 北京 : 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社 , 2021. [10]Solomon J M, Rossi J M, Golic K, et al. Changes in HSP70 alter thermotolerance and heat shock regulation in Drosophila [J]. New Biologist, 1991, 3: 11061120. [11]Feder M E, Cartafio N V, Milos L, et al. Effect of engineering HSP70 copy number on HSP70 expression and tolerance of ecologically relevant heat shock in larvae and pupae of Drosophila melanogaster[J]. The Journal of Experimental Biology, 1996, 199 (8): 18371844. [12]Welte M A, Tetrault J M, Dellavalle R P, et al.. A new method for manipulating transgenes: Engineering heat tolerance in a plex multicellular anism[J]. Current Biology, 1993, 3: 842853. [13]Huang L H, Kang L. Cloning and interspecific expression of heat shock protein genes in two leafminer species in response to thermal stress[J]. Insect Molecular Biology, 2021, 16(4): 491500. [14]崔旭紅 , 謝明 , 萬(wàn)方浩 . 高溫脅 迫下 B型煙粉虱熱激蛋白基因 HSP70表達(dá)量的變化 [J]. 昆蟲(chóng)學(xué)報(bào) , 2021, 50(11): 10871091. [15]張珂 . 昆蟲(chóng)熱激蛋白 90的研究進(jìn)展 [J]. 生物技術(shù)通報(bào) , 2021（ 2） :1718． [16]李燦 . 中藥材儲(chǔ)藏物害蟲(chóng)優(yōu)勢(shì)種藥材甲形態(tài)及生活史 [J]. 植物保護(hù) , 2021, 33: 123124. [17]顧忠盈 . 藥材甲的生物學(xué)特性及防治 [J]. 鄭州糧食學(xué)院學(xué)報(bào) , 1993, （ 3） : 9596. [18]曹 宇 , 李 燦 . 重要儲(chǔ)藏害蟲(chóng)藥材甲的生物防治研究進(jìn)展 [J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) , 2021, 42（ 4） : 913. [19]韓政 . 熱激蛋白與昆蟲(chóng)的耐熱性關(guān)系研究進(jìn)展 [J]. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué) , 2021, 38（ 8） : 9294. [20]黃惠芳 , 熱激蛋白的分子進(jìn)化研究 [J]. 廈門(mén)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版） , 2021, 43（ S） : 167168.