綠色熒光蛋白(gfp)基因的克隆、表達和粗提取-資料下載頁
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【正文】 . Science, 1994, 263(5148) : 802[5] ChalfieM. Green fluorescent p rotein. Photochem Photobiol, 1995, 62 (4) : 651[6] Larrick JW, Balint RF, Youvan DC. Green fluorescent protein: untapped potential in immunotechnology. Immunotechnology, 1995, 1 (2) : 83[7] 薩姆布魯克 J，弗里奇 E F，曼尼阿蒂斯 T. 分子克隆實驗指南[M]. 金冬雁，黎孟楓，譯. 2版. 北京：科學出版，1995. [8] 杜禎, 馬海利, 中國畜牧獸醫(yī),2007 年第34卷第5期[9] Nuc P. Nuc K. Rebinant protein production in Escherichia coli[J].Postepy Biochem,2006,52 (4):448456.[10] Dong X,Tang B,Li J,et and Purification of Intact and Functional Soybean (Glycine max)Seed Ferritin Complex in Escherichia coli [J].J Microbiol Biotechnol,2008,18 (2):299307.[11] 呂素芳，劉崢，郭廣君，蔡永萍，邱德文 大腸桿菌中表達外源重組蛋白的研究 [12] 魏春紅，李毅主編 原核細胞中外源基因的表達和初步純化，現(xiàn)代分子生物學技術，高等教育出版社，:9597附 錄1 LB培養(yǎng)基的配制：組成液體固體蛋白胨（Trypton）10g10g酵母提取物（Yeast Extract）5g5gNaCl10g10g瓊脂（Agar）15g蒸餾水定容至1000ml定容至1000ml2. 溶液Ⅰ： 50mM 葡萄糖 25mM TrisHCl（） 10mM EDTA3. 溶液Ⅱ（現(xiàn)用現(xiàn)配）： NaOH 1% SDS （先加水，再加NaOH和SDS）4. 溶液Ⅲ（100ml）：5M KAc 60ml 冰醋酸 5. DNasefree RNase A：溶解RNase A于TE緩沖液中，濃度為10mg/ml，煮沸1030min，除去DNase活性，20℃貯存。（）[10mM TrisHCl；1mM EDTA]的配制：藥品名稱1M TrisHCl（）10ml1ml EDTA2mlddH2O定容至1000ml定容至100ml7. 20TBE：216g Tris堿，110g硼酸，80ml EDTA（），定容至1000ml。8. GeneFinder溴酚藍上樣緩沖液6loading buffer：%溴酚蘭，%二甲苯青FF，40%（w/v）蔗糖水溶液。配制好后可以按50：1的比例稀釋GeneFinder。9．PEGFPN3質(zhì)粒全圖譜實驗使用的EGFP蛋白取自原核真核穿梭質(zhì)粒pEGFPNB3B的蛋白質(zhì)編碼序列。此質(zhì)粒原本被設計于在原核系統(tǒng)中進行擴增，并可在真核哺乳動物細胞中進行表達。本質(zhì)粒主要包括位于PCMV真核啟動子與SV40 真核多聚腺苷酸尾部之間的EGFP編碼序列與位于EGFP上游的多克隆位點；一個由SV40 早期啟動子啟動的卡那霉素/新霉素抗性基因，以及上游的細菌啟動子可啟動在原核系統(tǒng)中的復制與卡那抗性。在EGFP編碼序列上下游，存在特異的BamH I及Not I限制性內(nèi)切酶位點，可切下整段EGFP編碼序列。10．pET28a質(zhì)粒全圖譜表達EGFP 蛋白使用的pET28 原核載體包含有在多克隆位點兩側(cè)的Histag polyHis 編碼序列；用于表達蛋白的T7 啟動子，T7 轉(zhuǎn)錄起始物以及T7 終止子；選擇性篩選使用的lacI 編碼序列及卡那霉素抗性序列，pBR322 啟動子，以及為產(chǎn)生單鏈DNA 產(chǎn)物的f1 啟動子。19
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