蛋白質和氨基酸的測定(1)-資料下載頁
2025-05-13 06:27本頁面
【正文】 10 cm，且分離效果好。 ② 層析后得到的斑點小而清晰。 ③ 能夠使用多種顯色劑。 ④ 點樣量少，靈敏度高。（比紙層析高 10— 100倍） 精確到 。 ⑤ 也可用于大量分離＞ 500 mg，作為樣品制備層析。 ? 缺點： Rf值重現性比紙上層析差 。 ? 分類：按層析的原理可分為：吸附 、 分配 、離子交換 、 凝膠等 。 （三）操作方法： ① 薄層板制備 ② 樣品液制備 ③ 點樣：距薄板底端 2cm處，用針畫一標記作為 原點。再以點樣距扳子寬窄可點幾個點同時 展開，點與點之間間隔 1～ 2cm。 、微量吸管或微量注射器。注 意要等一個點干了再點另一個點。 ф3 mm 濾紙片，浸入樣液，埋到 板子上先挖好一個小洞穴。 ④ 展開：點樣完了 ， 放入密閉容器中 （ 展開槽 ） ， 傾斜一定角度 10～ 30176。 ， 下端浸入展開劑 1cm， 千萬別讓溶劑浸過了樣點 。 到離頂端一部分 ， 取出樣板 、 晾干 、 顯色 。 ：主要是低沸點的 2～ 3種有機溶劑組成的溶劑系統 ， 分離效果主要決定于展開劑的選擇 ， 因為吸附劑在一定情況下是恒定的 ，吸附劑的選擇余地遠遠小于展開劑的選擇 。 ： Ⅰ .微量圓環(huán)法 。 Ⅱ .用小載波片試驗 ， 微量展開劑展開 5cm。 Ⅲ .圖解法： 樣品極性小 ， 選吸附劑活性高 ， 展開劑極性低的 。 樣品極性大 ， 選吸附劑活性低 ， 展開劑極性高 。 ? 有機溶劑極性由小到大為： 石油醚 、 環(huán)己烷 、 四氯化碳 、 三氯乙烷 、 甲苯 、苯 、 二氯甲烷 、 氯仿 、 乙醚 、 乙酸乙酯 、 丙酮 、正丙醇 、 乙醇 、 甲醇 、 水 、 吡啶 、 有機酸類等 。 ： 上行法 、 下行法 、 雙向展開 、 單向多次展開 、 雙向多次展開 。 雙向展開： ⑤ 顯色： ，使斑點顯色，即噴霧顯色。 ，在紫外光下觀察斑點。 。 （涂板時把 熒光指示劑加入到固體吸附劑中） 定性：在同一塊板上 ， 同等條件下操作 ， 被測樣與標準樣同時展開 、 顯色 ， 同 Rf 值即是； 查手冊找相同的 Rf 值 。 定量： ：以標準斑點對照 ， 相當于樣品斑點中含量 ug數 。 。 ， 定容 ， 離心 ， 比色 。 ： 例：日本島津 CS—— 910 型雙波長薄 層色譜掃描儀 介紹離心薄層色譜儀： 1. LBG — 1型離心薄層色譜儀 北京產 2. 7924型離心薄層色譜儀 美國 Harrison 公司研制 3. CLC — 5型離心制備液體色譜儀（日本日立公司，帶紫外檢測器、記錄器和自動收集器，制備量可達 10g 。 二 ． 氨基酸自動分析儀法 三 ． 氣相色譜法 四 ． 高效液相色譜法 103 第十章的重點 1. 凱氏定氮法原理、分步、測定方法。 2. 雙縮脲法測定原理。 3. 氨基酸總量的測定方法（甲醛滴定法）。 4. TLC法原理、方法， Rf值的作用及計算方法。
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