【導(dǎo)讀】度上決定著銀杏葉的利用價(jià)值。以十二烷基硫酸鈉一正丁醇一正。微乳系統(tǒng)的極性，較好地分離出十幾種銀杏葉黃酮。系統(tǒng)—有機(jī)溶液系統(tǒng)相比，微乳系統(tǒng)顯示出較強(qiáng)的分離優(yōu)勢(shì)。含量隨生長(zhǎng)期的變化規(guī)律，揭示出大齡銀杏樹采摘葉片的最佳時(shí)期。中黃酮含量出現(xiàn)2次峰值，8月份出現(xiàn)第1個(gè)峰值，黃酮含量為%,以后下降較快,10月葉色發(fā)黃后又上升到最高值%。我國銀杏資源擁有量占世界總量的75％左右，占世界首位[1,2]。很高的觀賞價(jià)值外，銀杏的果實(shí)和葉片也有很高的藥用價(jià)值。利用銀杏果葉的有效化學(xué)成分和特殊醫(yī)藥保健作用加工生產(chǎn)保。銀杏葉能夠抗衰老，消除人體自由基，改善血流量，增加腦供血。目前，以腦梗死為代表的腦缺血性疾病已上升為人類第三大致死原因，其中，對(duì)銀杏葉提取物，在臨床也取得了肯定療效。因此，銀杏葉提取物具有調(diào)節(jié)血脂，抑制血小板聚集，擴(kuò)張腦血管，急性心肌梗死在歐美國家已成為嚴(yán)重的健。研究發(fā)現(xiàn)，銀杏提取物具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加缺血心肌的

　　

【正文】 %硼砂溶液，煮沸后加入槐米，并在攪拌下加入石灰乳至PH8，煮沸后 20～ 30 分鐘，濾過，共煎煮兩次 浸出液 60～ 70℃下用鹽酸調(diào)至 PH3～ 4，靜置，抽濾，水洗至中性， 60℃以下干燥 粗蘆丁 水或乙醇重結(jié)晶（必要時(shí)用活性炭除雜質(zhì)）蘆丁純品（ 1）蘆丁分子中含鄰二酚羥基易被氧化，堿性條件下更易分解，加硼砂與鄰二酚羥基結(jié)合，起保護(hù)作用 。（ 2）堿性太強(qiáng)，提取過程中易破壞黃酮母核 。（ 3）酸性太強(qiáng)，黃酮易生成烊鹽，溶解度增大，降低產(chǎn)品收率 。（ 4）提取堿液多用石灰水，因?yàn)殁}離子能使含多羥基的鞣質(zhì)果膠，粘液質(zhì)等水溶性雜質(zhì)生成沉淀，但浸出效果不如氫氧化鈉溶液，且有些黃酮也可生成不溶物 . 碳粉吸附法 :適于苷類精制 甲醇提取液加入活性炭至上清液無黃酮反應(yīng)，吸附了黃酮苷的碳粉依次用沸甲醇、沸水、 7%酚 水、 15%酚 醇洗， 7%酚 水洗下的基本為黃酮苷類。 （三）分離方法 依據(jù)：極性不同 —— 硅膠、氧化鋁分離（極性吸附），酚羥基數(shù)目、位置不同 —— 聚酰胺分離（氫鍵吸附），酸性不同 —— PH 梯度萃取，分子量不同 —— 凝膠層析， 特殊結(jié)構(gòu) —— 化學(xué)分離。 硅膠色譜法（吸附色譜法）：適用于苷元的分離（ 1）用途：主要用于分離異黃酮、二氫黃酮、二氫黃酮醇和高度甲基化，或乙酰化的黃酮及黃酮醇 （ 2）處理：濃鹽酸除去影響分離效果的金屬離子（ 3）移動(dòng)相：分離苷元（氯仿 —— 甲醇）分離苷類（氯仿 —— 甲醇 —— 水）或者（乙酸乙酯 —— 丙酮 —— 水） 聚酰胺色譜法：適用于分離醌、酚、黃酮。 （ 1）性質(zhì)：聚酰胺為高聚物，常用的為錦綸 6（己內(nèi)酰胺聚合而成）和錦綸 66（己二酸與己二胺聚合而成），不溶于水、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等常用溶劑，對(duì)堿穩(wěn)定，可溶于濃鹽酸、冰醋酸、甲酸。 （ 2）分離原理：聚酰胺分子中具有酰胺羰基，可與酚羥基形成氫鍵，主要依據(jù)與被分離物質(zhì)成氫鍵能力不同進(jìn)行分離。（ 3）洗脫劑：水 —— 乙醇 —— 甲醇 —— 丙酮 —— 氫氧化鈉水溶液（或氨水） —— 甲酰胺—— 二甲基甲酰胺 —— 尿素水溶液（洗脫能力依次增強(qiáng)） 常用洗脫劑為水 —— 乙醇，水可洗下非黃酮體 水溶性成分及少數(shù)黃酮體苷； 10%30%醇可洗下黃酮苷； 5095%乙醇可洗下黃酮苷元。 （ 4）洗脫規(guī)律： ①叁糖苷 雙糖苷 單糖苷 苷元。 ②母核酚羥基數(shù)目越多 ,洗脫越慢 。酚羥基數(shù)目相同 ,易成分子內(nèi)氫鍵者吸附弱。 ③異黃酮 二氫黃酮醇 黃酮 黃酮醇。④芳香核多 ,共軛程度高，難洗脫。 葡聚糖凝膠層析 常用 SephadexG（適用于水溶性成分分離）和 SephadexLH20（可用于親脂性成分分離）。 原理：苷類 — 分子篩；苷元：凝膠非完全惰性，有一定吸附力，這種吸附力來自分子間的氫鍵。 例如：： 5， 7， 4‘ 羥基黃酮， 3， 5， 7， 3’， 4‘ 黃酮， 3， 5， 7， 3’，4‘， 5’ 羥基黃酮洗脫順序?yàn)?5， 7， 4‘ 羥基黃酮 3， 5， 7， 3’， 4‘ 黃酮 3， 5， 7， 3’， 4‘， 5’ 羥基黃酮 梯度萃取法 樣品的乙酸乙酯溶液分別用 5%碳酸氫鈉溶液， 5%碳酸鈉溶液， %氫氧化鈉溶液， 4%氫氧化鈉溶液萃取，依次得到 7， 4‘ 二羥基黃酮， 7或 4‘ 羥基黃酮，一般酚羥基黃酮， 5羥基黃酮。 （ 1）鉛鹽法：可分離含鄰二酚羥基和不含鄰二酚羥基的化合物。 （ 2）硼酸絡(luò)合法： 含鄰二酚羥基的化合物可與硼酸絡(luò)合生成可溶于水的產(chǎn)物，據(jù)此可用于分離。 四 .黃酮類化合物的鑒定與結(jié)構(gòu)測(cè)定 （一）層析在黃酮類鑒定中的應(yīng)用 苷元：分配層析。流動(dòng)相： BAW系統(tǒng)。 苷：雙向紙層析。第一向：醇性溶劑展開，例如 BAW 系統(tǒng)，化合物極性大，吸附強(qiáng)。 第二向：水類溶劑展開，例如 26%醋酸水，化合物極性大，吸附弱。 Rf 與結(jié)構(gòu)的關(guān)系： （ 1）水類溶劑展開時(shí)，平面型分子（黃酮、黃酮醇、查耳酮）幾乎停留原點(diǎn)不動(dòng)，非平面型分子（二氫黃酮、二氫查耳酮） Rf 較大。 （ 2）醇性溶劑展開時(shí)，同一類型苷元，羥基越多， Rf 越小。（ 3）醇性溶劑展開時(shí)，羥基被甲氧基取代， Rf 增大。（ 4）醇性溶劑展開時(shí)，羥基糖苷化，極性增大， Rf 下降。（ 2）（ 3）（ 4）用酸水展開時(shí)，上述順序顛倒。 ：主要指吸附薄層，常用硅膠 TLC，聚酰胺 TLC。硅膠 TLC：鑒定弱極性化合物。聚酰胺 TLC：分離大多數(shù)黃酮及苷類，適用范圍廣，分離效果好。 （二）紫外光譜在黃酮類結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用 苯甲?；鹌；? 主要包含 A 環(huán)的苯甲?；椭饕?B 環(huán)的桂皮?；M成了黃酮類化合物的交叉共軛體系，使黃酮類主要有兩個(gè) 紫外吸收帶，帶Ⅰ（ 300400nm） 由桂皮?；到y(tǒng)引起，主要反應(yīng) B 環(huán)取代情況；帶Ⅱ（ 220280nm） 由苯甲酰基系統(tǒng)引起，主要反應(yīng) A環(huán)取代情況。 通常測(cè)定樣品在甲醇溶液中的紫外光譜后測(cè)定加入診斷試劑后的紫外光譜，以了解樣品的羥基取代情況，常用診斷試劑有：甲醇鈉、醋酸鈉、醋酸鈉 /硼酸、三氯化鋁及三氯化鋁 /鹽酸。 （ 1）黃酮、黃酮醇：在 200400nm 之間出現(xiàn)兩個(gè)主要吸收峰，二者峰形相似，但帶Ⅰ位置不同，可據(jù)此進(jìn)行分類。 在黃酮及黃酮醇母核上，如 7及 4‘位引入羥基、甲氧 基等供電基，將促進(jìn)結(jié)構(gòu)重排，引起相應(yīng)吸收帶紅移，通常，整個(gè)母核上氧取代程度越高，帶Ⅰ越向長(zhǎng)波方向位移。 帶Ⅱ的峰位主要受 A環(huán)氧取代程度的影響， B環(huán)的取代基對(duì)其峰位影響甚微，但可影響它的形狀。當(dāng) B 環(huán)有 3‘， 4‘ 二氧取代時(shí)，帶Ⅱ?qū)殡p峰。 （ 2）查耳酮及橙酮類：共同特征是帶Ⅰ很強(qiáng)，為主峰；帶Ⅱ較弱，為次強(qiáng)峰。 查耳酮中，帶Ⅱ位于 220～ 270nm，帶Ⅰ位于 340～ 390nm；橙酮中，常顯現(xiàn) 3～ 4 個(gè)吸收峰，但主要吸收峰一般位于 370～ 430nm。 （ 3）異黃酮、二氫黃酮及二氫黃酮醇這三類化合物中，除有由 A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)引起的帶Ⅱ吸收外，因 B 環(huán)不與吡喃酮環(huán)上的羰基共軛（或共軛很弱），故帶Ⅰ很弱。 （ 1）甲醇鈉：是一種強(qiáng)堿，使黃酮母核上的所有羥基產(chǎn)生某種程度的離子化，對(duì)黃酮及黃酮醇紫外光譜的影響用來檢查游離的 3 及 4‘ 羥基。如加入甲醇鈉后帶Ⅰ紅移 40～ 60nm，強(qiáng)度不降，示有 4’ 羥基；紅移 50～ 60nm，強(qiáng)度下降，示有 3羥基，但無 4‘ 羥基；若吸收譜隨時(shí)間延長(zhǎng)而衰退，示有對(duì)堿敏感的取代圖式。 （ 2）醋酸鈉：市售醋酸鈉因含微量醋酸，堿性較弱，只能使黃酮母核上酸性較 強(qiáng)的 7羥基離解，并影響峰帶紅移。如加入醋酸鈉（未熔融）后帶Ⅱ紅移 5～ 20nm，示有 7羥基。 （ 3）醋酸鈉 /硼酸：在醋酸鈉的堿性存在下，硼酸可與分子中的鄰二酚羥基絡(luò)合，引起相應(yīng)吸收帶紅移。醋酸鈉 /硼酸譜帶Ⅰ紅移 12～ 30nm，示 B 環(huán)有鄰二酚羥基；帶Ⅱ紅移 5～ 10nm，示 A環(huán)有鄰二酚羥基。 （ 4）三氯化鋁 /鹽酸：分子中有鄰二酚羥基、 3羥基 4酮基或 5羥基 4酮基時(shí)，可與三氯化鋁絡(luò)合，引起相應(yīng)吸收帶紅移；鄰二酚羥基與三氯化鋁形成的絡(luò)合物很不穩(wěn)定，加入少量酸水即可分解。若三氯化鋁 /鹽酸譜 =三氯化鋁譜，示 結(jié)構(gòu)中無鄰二酚羥基；若三氯化鋁 /鹽酸譜≠三氯化鋁譜，示結(jié)構(gòu)中可能有鄰二酚羥基，帶Ⅰ紫移 30～ 40nm，示 B 環(huán)有鄰二酚羥基，紫移 50～ 65nm，示 A、 B環(huán)均可能有鄰二酚羥基；三氯化鋁 /鹽酸譜 =甲醇譜，示無 3 或 5羥基。三氯化鋁 /鹽酸譜較甲醇譜帶Ⅰ紅移 35～ 55nm，示只有 5羥基，紅移Ⅰ紅移 60nm，示只有 3羥基，紅移 50～ 60nm，示可能同時(shí)有 3及 5羥基。 小結(jié)： 一、掌握黃酮類化合物的基本結(jié)構(gòu)分類和黃酮類化合物的理化性質(zhì)。 二、掌握黃酮類化合物酸堿性，酸性強(qiáng)弱與結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系及在提取分離中的應(yīng)用。 三掌握黃酮類化合物梯度 PH 分離法、聚酰胺柱層析法、硅膠柱層析法和凝膠過濾法的原理與應(yīng)用。 課后分析（學(xué)生反映、經(jīng)驗(yàn)教訓(xùn)、改進(jìn)措施）； 本章也是苷類成分的重要內(nèi)容，涉及的知識(shí)面廣，尤其是 UV、 NMR 的波譜知識(shí)是本章的重點(diǎn)和難點(diǎn)，這也是要求學(xué)生掌握的內(nèi)容，所以課堂講解要條理清楚，并且對(duì)于黃酮的顏色反應(yīng)、 UV、 NMR 譜都采取了及時(shí)進(jìn)行小結(jié)的講解方式幫助學(xué)生加強(qiáng)理解。另一措施是加強(qiáng)習(xí)題課的輔導(dǎo)。 思考題： 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)類型有哪些？分類依據(jù)是什么？ 黃酮類化合物的主要鑒別反應(yīng)有哪些？ 聚酰胺層析法分 離黃酮類化合物的原理是什么？常用洗脫劑、洗脫規(guī)律是什么？ 4怎樣應(yīng)用紫外光譜法鑒定黃酮類化合物？ 5黃酮類化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律有哪些？第五章醌類化合物目的要求： 1．掌握醌類化合物的基本結(jié)構(gòu)及分類。 2．掌握醌類化合物的理化性質(zhì)及其衍生物的制備。 3．掌握醌類化合物的提取分離及結(jié)構(gòu)鑒定方法。 4．了解 2DNMR 譜及 MS 在結(jié)構(gòu)鑒定中的應(yīng)用。教學(xué)時(shí)數(shù)： 4學(xué)時(shí)。重點(diǎn)和難點(diǎn)： 重點(diǎn)：苯琨、萘醌、菲醌及蒽醌的結(jié)構(gòu)類型 難點(diǎn)：蒽醌的理化性質(zhì) —— 顏色、升華性、溶解度、及與結(jié)構(gòu)的關(guān)系： 一、醌類化合物的結(jié)構(gòu)類型 （一）苯 醌類 對(duì)苯醌鄰苯醌 （二）萘醌類 α （ 1， 4）萘醌β （ 1， 2）萘醌 amphi(2,6)萘醌 （三）菲醌類 鄰菲醌對(duì)菲醌 （四）蒽醌類 包括蒽醌衍生物及其不同程度的還原產(chǎn)物，如氧化蒽酚、蒽酚、蒽酮及蒽酮的二聚體。的二聚體。 蒽醌氧化蒽酚蒽酮蒽酚蒽酚 蒽醌衍生物 蒽醌母核上有羥基、羥甲基、甲氧基和羧基取代。根據(jù)羥基在蒽醌母核上的分布情況，可將羥基蒽醌衍生物分為兩類。（ 1）大黃素型羥基分布在兩側(cè)的苯環(huán)上，多數(shù)化合物呈黃色。 （ 2）茜草素型羥基分布在一側(cè)的苯環(huán)上，顏色較深，多為橙黃至橙紅。 蒽酚或蒽酮衍生物 存在于新鮮植物中，該類成分可慢慢氧化成蒽醌類成分。 二蒽酮類衍生物 二、醌類化合物的理化性質(zhì) （一）物理性質(zhì)： 性狀 多數(shù)為有色結(jié)晶，多數(shù)蒽醌成苷后難以得到完好結(jié)晶。醌類化合物母核無酚羥基取代時(shí)，無色，引入酚羥基等助色團(tuán)，表現(xiàn)一定的顏色，取代越多，顏色越深。 升華性 游離的醌類化合物具升華性。 溶解度 游離醌類極性較小，一般溶于乙醇、乙醚、苯、氯仿。成苷后極性增大，易溶于乙醇、甲醇。 （二）化學(xué)性質(zhì) 酸性 醌類化合物具有酸性，因分子中酚羥基的數(shù)目及位置不同，酸性表現(xiàn)顯 因結(jié)構(gòu)上多具酚羥基，所以具有一定的酸性，易溶于堿性水液，但加酸后又可重新析出。酸性強(qiáng)弱與分子中是否存在酚羥基、酚羥基的數(shù)目及位置有關(guān)。（ 1）帶有羧基的醌類化合物酸性較強(qiáng)，α 羥基苯醌或萘醌的醌核上有羥基時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)類似羰基的酸性，這類化合物可溶在 NaHCO3水溶液中； （ 2） 萘醌及蒽醌苯環(huán)上β 羥基酸性次之，α 羥基酸性最弱，因β 羥基受羰基吸電子影響，電子云偏移，質(zhì)子解離度增高，酸性較強(qiáng)，α 羥基與與相鄰的羰基形成分子內(nèi)氫鍵，故酸性很弱； （ 3） 酚羥基數(shù)目增多則酸性相應(yīng)增強(qiáng)綜上所述，酸性強(qiáng)弱排列順序如下 含 1 個(gè) COOH含 2 個(gè)以上β OH含 1個(gè)β OH含 2個(gè)α OH含 1 個(gè)αOH 根據(jù)蒽醌衍生物酸性強(qiáng)弱不同，可通過用不同的堿性堿化后進(jìn)行梯度萃取法進(jìn)行提取分離 顏色反應(yīng) （ 1）菲格爾（ Feigl）反應(yīng)：醌類衍生物在堿性條件下經(jīng)加熱能迅速與醛類及鄰二硝基苯反應(yīng)生成紫色化合物 （ 2）堿性條件下的呈色反應(yīng)：羥基蒽醌類在堿性溶液中發(fā)生顏色改變，會(huì)使顏色加深，多呈橙、紅、紫紅及蘭色。 顯色反應(yīng)與形成共軛體系的酚羥基及羰基有關(guān)，該有色物質(zhì)不溶于 有機(jī)溶劑。相應(yīng)的蒽酚、蒽酮、二蒽酮類化合物與堿液不顯紅色液，只能呈黃色。 本反法應(yīng)是檢產(chǎn)物中識(shí)天然羥基蒽醌類成分存在的最常用方法之一，對(duì)原有輔助羥基蒽醌結(jié)構(gòu)的判定同樣有幫助。（ 3）無色亞甲藍(lán)顯色實(shí)驗(yàn)：用于 PPC和 TLC噴霧劑，是檢出苯醌和萘醌的專用顯色劑。 （ 4）與活性次甲基試劑的反應(yīng)：苯醌及萘醌類化合物當(dāng)其醌環(huán)上有未被取代的位置時(shí)，可在氨堿性條件下與一些含有活性次甲基試劑的醇溶液反應(yīng)，生成藍(lán)綠色或藍(lán)紫色。 （ 5）與金屬離子的反應(yīng)：在醌類化合物中，如果有α 酚羥基或鄰位二酚羥基結(jié)構(gòu)時(shí)，則可與 Pb2+、 Mg2+等金屬離子形成絡(luò)合物。 三、醌類化合物的提取分離 （一）游離醌類的提取 有機(jī)溶劑提取法 堿提取 酸沉淀法：帶游離酚羥基的醌類 水蒸氣蒸餾法 （二）游離羥基蒽醌的分離 PH 梯度萃取法 : 吸附硅膠層析 （三）蒽醌苷類與蒽醌衍生物苷元的分離極性不同，在有機(jī)溶劑中的溶解度不同。 （四）蒽醌苷類的分離 主要應(yīng)用層析法，一般用溶劑法或鉛鹽法處理粗提物，除去大部分雜質(zhì)。 鉛鹽法：醋酸鉛與蒽醌苷成沉淀溶劑法：正丁醇萃取 層析法：硅膠、葡聚糖凝膠 LH反相硅膠 . 四、醌類化合物的結(jié)構(gòu)鑒定 （一）醌類化合物的紫外光譜 苯醌和萘醌的紫外光譜