【正文】 明子 黃酮提取工藝條件的研究。所選取的工藝條件：浸提液乙醇濃度、浸提溫度、料液比 (g:mL)、浸提時(shí)間 。通過單因素 實(shí)驗(yàn)和 正交試驗(yàn)得出最佳提取工藝條件。 黃酮含量的測(cè)定應(yīng)用可見 分光光度計(jì)測(cè)得吸光度。 再 蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)， 繪制其吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，以此標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算決明子中黃酮含量 。 試驗(yàn)結(jié)果表明： (1). 以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，測(cè)定了 0~6μg/mL濃度范圍內(nèi)的吸光度。 用最小二乘法作線性回歸，得蘆丁濃度 C與吸光度 A的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程式： C=，相關(guān)系數(shù) R2= (2). 應(yīng)用索氏提取器測(cè)定的決明子中黃酮總含量，三次實(shí)驗(yàn)得到平均吸光度為 ，黃酮濃度 ，黃酮含量為 %。 (3). 單因素實(shí)驗(yàn)中，浸提劑 乙醇濃度為 75％提取率最高；浸提溫度為 80℃ 時(shí)提取效率最高； 料液比、浸提時(shí)間實(shí)驗(yàn)中，綜合考慮成本 等因素選取料液比為 1:30，提取時(shí)間。 (4). 正交實(shí)驗(yàn)選取四因素三水平方案，結(jié)果 表明決明子中黃酮的提取實(shí)驗(yàn)中，黃酮提取率最高的實(shí)驗(yàn)方案為 A2B2C3D3， 即以 75％乙醇為提取劑， 80℃ 下提取，提取時(shí)間 ，料液比 1:30； 各因素提取效果的影響程度依次為 C(料液比 )D(提取時(shí)間 )A(乙醇濃度 )B(固液比 ) (5). 在最佳提取工藝條件下， 得提取液吸光度為 ，黃酮濃度為 ，提取率為 %。 31 參 考 文 獻(xiàn) [1]. 呂翠婷 , 黎海彬 , 李續(xù)娥 , 郭寶江 . 中藥決明子的研究進(jìn)展 [J]. 食品科技 , 2021, 8: 295298. 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Methods, 200,3:90– 97 32 致 謝 本文的研究工作是在我的導(dǎo)師郭潔老師的悉心指導(dǎo)下完成的。感謝導(dǎo)師郭潔老在繁忙的工作之中給予的指導(dǎo)、關(guān)心與教誨，感謝有機(jī)實(shí)驗(yàn)室的藺巖對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的所給予的支持與幫助，您們寬廣的學(xué)識(shí)、治學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度、崇高的人格和對(duì)他人無微不至的關(guān)懷使我學(xué)會(huì)了做人和做事的道理，對(duì)我今后的生活與學(xué)習(xí)產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。 同 時(shí)，要感謝在 實(shí)驗(yàn)開展的過程中，給予了大力幫助的周艷軍老師、王利卿老師、 王歡 、趙永華老師和唐克老師，感謝實(shí)驗(yàn)室的各位學(xué)哥、學(xué)姐的關(guān)懷，感謝這一學(xué)期中，給予支持與幫助的同學(xué)、朋友。 再次感謝您們 !!! 最后要感謝在家鄉(xiāng)辛勤耕耘的父母，給予了無私的關(guān)懷與厚愛，您們對(duì)我的啟蒙與教導(dǎo)是我有生以來最大的財(cái)富。 33 附 錄 A 英文 譯 文 研究不同提取方法提取馬齒莧中的黃酮類化合物及應(yīng)用紫外 — 可見分光光度計(jì)對(duì)其進(jìn)行測(cè)定 朱洪斌，王玉枝，劉宇軒，夏亞林，唐天 收到： :： 施普林格 +商業(yè)媒體科學(xué) ,LLC 2021 年 摘要 在中國(guó) 馬齒莧是一種傳統(tǒng)的食用和藥用植物。黃酮類是它的一種主要活性成分。對(duì)比研究五種提取方法馬齒莧中黃酮類黃酮類化合物，包括：微波萃取法、超聲波法、索氏提取法、回流提取法提取、和鹵制提取。結(jié)果表明：微波輔助提取法為最適合的提取馬齒莧中黃酮類化合物，因?yàn)槠涓咝А⑻崛r(shí)間短。最佳提取條為 70%乙醇濃度 (v/v)、固液比 1:50、提取溫度 50℃ 和輻照時(shí)間是 9 分鐘 。 含 量 測(cè) 定 應(yīng) 用 紫 外 — 可 見 分 光 光 度 法 進(jìn) 行 測(cè) 定 ， 并 使 用NaNO2Al(NO3)3NaOH 顯色體 系。在最佳工藝條件下 , 分析物的校準(zhǔn)曲線線性相關(guān)系數(shù)大于與 。平均回收率為 %，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為 %（ n=5）。八種不同產(chǎn)地的馬齒莧進(jìn)行調(diào)查分析，黃酮類化合物的總含量 ,是 、 、 、 、 、 、 、 。 關(guān)鍵詞： 食品分析，馬齒莧，黃酮類化合物，微波提取，紫外 —可見分光光度法 簡(jiǎn)介 馬齒莧是一種常見的、肉質(zhì)一年生草本植物，其廣泛分布在溫帶和熱帶地區(qū)(Radhakrishnan et al. 2021。 Garti et al. 1999)。在的中國(guó)，馬齒莧作為一種食品和藥用植物被使用了數(shù)千年，它含有豐富的營(yíng)養(yǎng)與蛋白質(zhì)、碳水化合物、 Ca, K, Zn, and Na (Aberoumand 2021)。作為一種中藥，馬齒莧是很重要的，因?yàn)槠涮厥獾尼t(yī)療功能，傳統(tǒng)上它一直被用作用于治療痢疾和血便和外部為起泡、潰瘍、濕疹、丹毒、昆蟲和蛇咬傷 (Chen et al. 2021。 Zhang et al. 2021。 Yazici et al. 2021。 Palaniswamya et al. 2021)。 在中藥材的許多有效成分中， 黃酮類化合物是其中一種最受關(guān)注的化合物。黃酮類化合物有獲得了高度的關(guān)注，因?yàn)槠浜控S富，具有降低血脂、抗氧化、降低膽固醇、抑制血栓、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈等功效 (Deng et al. 2021。 De Souza et al. 2021。 34 Su et al. 2021。 Shao et al. 2021。 Volpi and Bergonzini 2021。 Zhang et al. 2021。 Keith et al. 2021)。 最近，黃酮類化合物在醫(yī)學(xué)的發(fā)展和食品領(lǐng)域成為一個(gè)非常熱門的研究方向。在馬齒莧中， 黃酮和多糖是含量最豐富的有效成分。據(jù)報(bào)道，在馬齒莧中發(fā)現(xiàn)了 7種黃酮類化合物，包括：槲皮素、山奈酚、木犀草素、楊梅酮、木犀草素、染料木黃酮 (Chen et al. 2021。 Zhang et al. 2021)。在醫(yī)學(xué)和食品工業(yè)上，提取和分離具有高生物活性、高含量的黃酮類化合物是至關(guān)重要。因此，研究提取和測(cè)定技術(shù)的黃酮類化合物是很有意義的。 傳統(tǒng)上，馬齒莧中黃酮的提取通常應(yīng)用鹵制提取和回流提取。作為一個(gè)新興的提取方法，超聲提取法已經(jīng)被用作提取黃酮類化合物。 (Jin et al. 2021。 Chen et al. 2021a)。不幸的是，應(yīng)用這種方法，黃酮不能被充分的提取，是由于提取的雜質(zhì)很多，提取時(shí)間長(zhǎng)，這些因素限制這種提取方法。因此，這需要去發(fā)展更有效的和可靠的提取方法。微波萃取似乎有希望達(dá)到目的。微波萃取的優(yōu)勢(shì)是具有強(qiáng)烈的滲透性的力量，高選擇性、高加熱能力，更少的有機(jī)溶劑用量、較短的提取時(shí)間、高提取率 (Ganzler et al. 1990)，作為一種新的提取工藝，它適合提取熱敏感物質(zhì)和天然活性成分 (Chen et al. 2021b)。本文中應(yīng)用壓力自控系統(tǒng)微波分解方法提取黃酮類化合物。系統(tǒng)的溫度能被 控制在一定范圍內(nèi)，因此，能夠避免熱分解。在目前的研究中，微波萃取法，這種簡(jiǎn)單、有效的方法已被發(fā)展出來，與此同時(shí)，微波萃取法優(yōu)勢(shì)顯示了出來。 根據(jù)報(bào)道，黃酮類化合物有多種檢測(cè)方法，包括：薄層色譜法、高效液相色譜法、毛細(xì)管電泳和分光光度法。在這些方法中，只有分光光度法能測(cè)定總黃酮的總量。紫外 — 可見分光光度法是應(yīng)用最廣泛測(cè)定黃酮含量的方法。在這種方法中，直接測(cè)量和顯色法是常用的方法。但是顯色法比直接測(cè)量個(gè)好，因?yàn)轱@色法不會(huì)被其它成分影響，如多糖和皂苷。在研究中，介紹一種簡(jiǎn)單顯色方法。應(yīng)用紫外 — 可見分光光度法 ，以 NaNO2–Al(NO3)3–NaOH顯色來測(cè)定馬齒莧中黃酮類化合物的含量。 材料和方法 采集的樣本 為了研究馬齒莧中黃酮含量，采集不同月份的三種馬齒莧作為實(shí)驗(yàn)材料。三個(gè)樣品中兩種是作為中藥材從中國(guó)中醫(yī)藥有限公司購(gòu)買 (湖南 ,中國(guó) )。中醫(yī)的樣品被收集于 2021年 8月 ,另一種中藥樣品被收集是在 2021年 7月。我們也在 2021年 6月，從湖南長(zhǎng)沙郊區(qū) (中國(guó) )收集了三個(gè)樣品的野生馬齒莧。 樣品制備 新鮮的樣品用水清洗 ,一些樣分為根、莖、葉進(jìn)行研究。所有的樣品壓碎磨成粉末，然后在 50℃干燥，干燥后粉末樣本的放置在干燥皿中 。 35 藥品和儀器 ：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)蘆丁 (97%)購(gòu)買至國(guó)藥化學(xué)試劑的有限公司 (中國(guó) )。 所有的試劑和藥品均為分析純。整個(gè)研究過程中要使用蒸餾水。 ： 微波分解系統(tǒng) (MDS2021AT、上海、中國(guó) )， AS2060B超聲波清潔 器(中國(guó)天津 )，提取時(shí)使用索氏提取器 (250mL、長(zhǎng)沙、中國(guó) )。高速離心機(jī) (TGL16C、上海 、 中國(guó) )，其是在相分離中使用的。多功能植物粉碎機(jī) (FW100、北京、中國(guó) )，用于樣品分碎。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (RE52CS、上海、中國(guó) )，被用來濃縮提取液。紫外 —可見分光光度計(jì) JASCO V530(日本 )，用于檢測(cè)含量。 黃酮類化合物的提取 提取之前，馬齒莧用多功能植物粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎。應(yīng)用索氏提取器，以石油醚為溶解進(jìn)行脫脂， 直到顏色 消失。馬齒莧中黃酮提取的五種方法如下： 準(zhǔn)確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，密封后至于微波分解系統(tǒng)中提取。提取溫 度為 50℃ ，輻射時(shí)間為 。微波提取后，提取液在 11000rpm下離心分離 30min。上層清夜至于 25mL容量瓶中，用 70%乙醇標(biāo)定。 準(zhǔn)確地稱量 ，至于錐形瓶中， 加入 25mL70%乙醇，密封后至于超聲波清潔 器，在室溫 25℃ 超聲提取 。 然后 按照上述所作 (按照 對(duì)微波萃取 的描述 )。 準(zhǔn)確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，裝上回流提取裝置，隨后提取 ， 然后 按照上述所作 (按照 對(duì)微波萃取 的 描述 )。 準(zhǔn)確地稱量 ，至于索氏提取器中，加入 80mL70%乙醇，隨后提取 ，濃縮提取液，然后按照上述所作 (按照 對(duì)微波萃取 的 描述 )。 準(zhǔn)確地稱量 ，至于錐形瓶中，加入 25mL70%乙醇，然后在室溫25℃ 提取 48h，然后按照上述所作 (按照 對(duì)微波萃取 的 描述 )。 黃酮含量檢測(cè) 首先，取 2mL提取液至于 10mL容量瓶中， 加入 5%NaNO2液 ，搖勻，放置 6min后加入 10%Al(N03)3溶液 ，搖勻，放置 6min后加入 4%NaOH溶液，再用 30%乙醇定容，搖勻，以 30%乙醇為空白參比 ， l5min后用 lcm比色皿于