【導讀】相色譜法測定不同菌落發(fā)酵液中環(huán)磷酸腺苷的含量篩選出cAMP高產菌落。高為，其次為4號菌落，環(huán)磷酸腺苷含量為mg/ml。是否規(guī)范、能否避免染菌是我們實驗成敗的關鍵。和心肌梗死,尤其適用于對洋地黃類強心藥中毒或不敏感的患者[1]。

　　

【正文】 53 61 62 63 菌落 1 至 6 發(fā)酵 液 環(huán)磷酸腺苷的 平均 含量 如表 3 所示 表 3 環(huán)磷酸腺苷平均含量 菌落編號 環(huán)磷酸腺苷平均含量 (mg/ml) 菌落 1 13 菌落 2 菌落 3 菌落 4 菌落 5 菌落 6 結果 分析 及 討論 由 中 不同菌落 發(fā)酵 液樣品高效液相 圖 6 至圖 23分別 與 圖 4 環(huán)磷酸腺苷、圖 5 次黃嘌呤的 標樣 圖進行對比 可以看出 , 發(fā)酵液中產生的兩個 吸收峰 與標樣圖的吸收峰 幾乎在同一位置 ，說明 發(fā)酵液中 由微生物合成了一定量的環(huán)磷 酸腺苷，同時也說明了發(fā)酵液中 有 一定量的 次黃嘌呤殘余 。在發(fā)酵培養(yǎng)基的配制中添加了 %的次黃嘌呤， 由于微生物是將次黃嘌呤作為中間物進行代謝利用，而不是作為碳源、氮源，所以需求量少。因此在發(fā)酵液中有一定量的次黃嘌呤殘余是正常情況。將各發(fā)酵液的高效液相圖中 cAMP 的波峰面積算出，再利用 中的標準曲線求得發(fā)酵樣品中環(huán)磷酸腺苷的含量。 最后得到的各發(fā)酵樣品中cAMP 含量如 中表 1所示。 由表 1 測定 結果可以看出 編號 12 和 編號 33的 發(fā)酵瓶 有些異常 ， ph和 還原糖 的殘?zhí)橇?都 異于其他編號 。 這兩瓶發(fā)酵液中還原糖 的 殘余量 為零 ， 涂片 后 顯微鏡觀察 發(fā)現(xiàn) 有其他 非 棒狀桿菌和少量棒狀桿菌 ， 由此斷定 染菌 ， 認定 這兩瓶發(fā)酵失敗。 在計算菌落環(huán)磷酸腺苷的平均值時，編號 12 和編號 23 的 cAMP 含量值不計算在內。 其他 各瓶 發(fā)酵液 ph基本一致，均含有 少量 還原糖 ， 發(fā)酵狀況 認為 正常 。 由 表 2 所得 各瓶 發(fā)酵液 中環(huán)腺苷酸 的 含量 對比發(fā)現(xiàn) 還原糖的 殘?zhí)橇吭降?，則 發(fā)酵液中環(huán)腺苷酸 cAMP 的含量越高。 根據 表 3 不同菌落 發(fā)酵液中 cAMP 平均 含量 的 計算結果 ， 發(fā)現(xiàn)編號為 6 的菌落的發(fā)酵液 中 cAMP 的平均 含量最高 為 ，其次為菌落 4環(huán)磷酸腺苷的平 均 含量 為 mg/ml，平均含量 最低 的是菌落 3 含量為 。不同的菌落生產環(huán)磷酸腺苷的能力 差別較大， 同一菌落的不同發(fā)酵樣瓶中環(huán)磷酸腺苷的含量也不盡相同。初步分析主要原因有兩個，一是 用于實驗的菌落可能只達到菌落純，未達到菌株純；二是 可能 由于實驗過程中偶然的外界因素對單個發(fā)酵瓶產生了影響。 若 對菌落 6 進一步進行純種分離純化 實驗 ，規(guī)范實驗操作 定能 篩選出 環(huán) 磷酸 腺苷 高產菌株 。 14 染菌分析： 由于各發(fā)酵培養(yǎng)基是一起進行高壓真氣滅菌，只有 兩瓶 發(fā)酵失敗，推斷 培養(yǎng)基 滅菌是 徹底的，染菌可能是在 進行發(fā)酵接種 時污染雜菌。 在 今后的無菌操作時，要特別加以小心注意。 微生物 發(fā)酵染菌是發(fā)酵過程中比較 重要 的問題，如何避免染菌是發(fā)酵 成敗 的關鍵。 可從以下 幾方面給 于 避免：一、確定種子不帶雜菌，從而可從源頭上 避免雜菌污染 ； 二、培養(yǎng)基 滅菌 要 徹底 ，一般采用高壓蒸汽 121℃， 15 分鐘 到 20分鐘 ；三、在種子液進行移種和接種時的無菌操作 要 規(guī)范，通常在 超凈 工作臺中進行 ， 發(fā)酵瓶瓶口要靠近酒精燈火焰 ； 四、 接種過程瓶口不要對著風屏，盡可能是與風向平行 ， 超凈工作臺中鼓風機的 采風口 要保持清潔衛(wèi)生，避免鼓入空氣帶菌。 4 結論 國內外 目前生產 cAMP 多數(shù)是用 腺苷和 5′ 腺苷酸作為起始原料合成環(huán)磷腺苷。以化學合成為主， 操作復雜，溶劑損耗量大，收率低成本高，產量小 ， 而且含有致癌致畸的化學殘留物，不適于臨床應用?，F(xiàn) 也 有人研究 從大棗中提取 環(huán)腺苷酸 ， 但 限于 原料質量要求高，處理過程繁雜 且 cAMP 回收 率較低 不易 推廣 。通過 本次試驗，初步說明環(huán)腺苷酸的生產除了通過 化學合成 和從生物細胞中提取外，還可以 利用 微生物發(fā)酵 進行 生產。 通過初篩獲得高產菌落 6 和菌落 4，若能進一步對菌落進行分離純化定能篩選出高產穩(wěn)定的純菌株。 將 環(huán)腺苷酸的生產與生物技術相結合，從而可以使環(huán)腺苷酸的生產 周期短 ，分離提純容 易， 產品具有無化學殘留污染的優(yōu)點， 具有廣闊 的發(fā)展前景。 15 參考文獻 [1] 王麗，蔣宗勇，林映才 .環(huán)腺苷酸（ cAMP）及其抗病生物學作用 .飼料工業(yè)， 2021 [2] 牟德華，朱艷麗 . 大棗環(huán)腺苷酸及其生物學功能 .食品科技 .2021, 河北科技大學生物科學與工程學院 [3] 張明娟，李薇，龐曉明 . 棗果中環(huán)磷酸腺苷 (cAMP)的提取工藝及含量測定 .食品與發(fā)酵工業(yè) .2021，北京林業(yè)大學生物科學與技術學院 [4] 李學貴 , 蔣文強 , 王傳芬 .HPLC 法測定大棗提取液中環(huán)腺苷酸含量的研究 . 山東化工 .山東輕工業(yè)學院食品與生物工程學院 [5] 崔志強 ,孟憲軍 ,王傳杰 . HPLC 法測定冬棗環(huán)磷酸腺苷含量 . 食品研究與開發(fā) . 沈陽農業(yè)大學食品學院 [6] 趙晉，田茂奎，唐巍 .環(huán)磷腺苷合成工藝研究概述 .理工科研， 2021，西南大學化學化工學院 [7] 張克旭 .環(huán)腺昔酸 (cAMP)發(fā)酵的菌種選育與調節(jié)機制 .發(fā)酵科技通訊，1980，天津輕工學院 [8] 應漢杰 .一種微生物生產環(huán)腺苷酸的方法 . 南京工業(yè)大學 .專利申請 [9] CHEN, X. C. ET AL.: 39。Medium optimization for the production of cyclic adenosine 339。,539。monophosphate by Microbacterium sp. using response surface Methodology39。 BIORESOURCE TECHNOLOGY vol. 100, no. 2, 2021, pages 919 924 [10] 蒲云峰，萬英，侯旭杰 . HPLC 法測定不同品種紅棗中 cAMP 含量 .食品研究與開發(fā) . 新疆生產建設兵團塔里木盆地生物資源保護利用 重點實驗室 [11] 王 荔，亓樹艷，莫曉燕 .大棗環(huán)磷酸腺苷提取純化工藝的初步研究 .食品科技 .提取物與應用 .2021, 西安交通大學生命科學與技術學院 16 致謝 : 經過近兩個月的實驗和整理論文，畢業(yè)設計即將結束，同時也標志著我的大學生活即將接近尾聲。 大學四年來在老師和同學們的幫助下，我努力學習掌握各種專業(yè)知識以及培養(yǎng)自己各方面的能力，盡自己的能力完成了我的學業(yè)。這次的畢業(yè)設計是一次交流和學習的機會，整個實驗和論文整理過程是一個不斷學習、不斷提高自己、積累自己經驗的過程，我從中學到了很多新知識，更 培養(yǎng)了自己的信心和毅力。在今后的工作和學習中，我會繼續(xù)發(fā)揚這段時間各項好的習慣和作風，努力做好以后的每一項工作。 本文是在 —— 師的悉心指導下完成的， 在跟隨 常老師做實驗期間 從她 身上我學到的不僅僅是知識 和 實驗技能 的 操作 ,更多的是做人 為 事 的道理 。 常 老師治學嚴謹 ,要求 嚴格 ， 為人 和藹 ,對 我今后的學習工作 都 有很大幫助， 同時 在 完成本實驗時 也得到 了 康老師和實驗室其他老師 在 實驗試劑 、 實驗藥品 、 實驗儀器 和 實驗操作等方面 提供 的幫助和指導， 及 試驗組全體同學的協(xié)助，在此一并表示衷心的感謝！