【文章內容簡介】 ) =25:75；磷酸溶液 濃度 為 %。流動相中只包含甲醇和磷酸溶液。將配置好的流動相加熱至 70 度左右，根據需要選擇 m 的濾膜，然后對流動相進行抽濾。抽濾后對流動相進行超聲脫氣 10至20分鐘， 備用 [10,11]。 發(fā)酵 結束后得到的發(fā)酵液用 5ml 移液管移取 3ml 于 3ml 離心管中，每次移取發(fā)酵液時要 用 待移發(fā)酵液潤洗 2至 3次。 離心管 在 5000轉 每分鐘下離心 15分鐘 。離心 結束后 取 上 層 清液，再經 m針式 慮頭 過濾后待測。 的配制 精密稱取 cAMP 標準品 1000mg， 用去離子水 溶解 并定容至 100ml 容量 瓶 中，即得到 環(huán)腺苷酸 標準品溶液 ， 濃度為 10mg/ml。 精密 稱量次黃嘌呤標準品 54mg，用去離子水溶解定容與 100ml容量瓶中，得到次黃嘌呤標準溶液 ,濃度為。 [3,11] 的線性關系 精密 吸取 cAMP 標準 液 1ml、 2ml、 4ml、 8ml、 16ml、 32ml 分別 定溶于 50ml容量瓶 中 配制成 ， ， ， ， ， ，在上述色譜5 條件下進樣 20μ l[4,5]， 記錄 色譜峰面積。 環(huán) 磷酸 腺苷 和次黃嘌呤的高效液相掃描圖譜 如 中 圖 4， 圖 5 所示 。在 ，色譜 峰面積 與樣品 中環(huán)磷酸腺苷含 量線性關系 良好 ，線性關系圖如 中 圖 3 所示 。 準曲線繪制 照 色譜條件，將處理好的樣品溶液與標準品溶液放入自動進樣器 分別進行 掃描測定 其 峰面積 。 以峰面積為 橫坐標，濃度（ mg/mL） 縱 坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程， y = ， R178。 = 。 標準 曲線見圖 3，樣品 掃描結果見 。 與分析 實驗結果 搖 瓶發(fā)酵各參數測定 發(fā)酵結束 后， 按 編號排好發(fā)酵瓶 進行 參數測定 。 第一步 ： 用 50ml 量筒 量取各個發(fā)酵瓶中發(fā)酵液體積，做好記錄 。 第二 步： 用 玻璃 棒 蘸去適量發(fā)酵液，滴在 至 量程 的 ph試紙 上 30秒 內與標準比色卡對比測定 ph， 做好記錄。 第三步 ： 用 5ml移液管 移取 3ml 發(fā)酵液于 3ml 離心管中 5000 轉 每 分鐘 ，離心 15 分鐘 。 用 移液管移取發(fā)酵液 前 ，先用待移發(fā)酵液潤洗 2 到 3 次 。 第四步 ： 取 上層清液適量 按 上述色譜測定條件 進樣 做高效液相 測定 。 第五步 ： 取 上層清液適量于還原糖自動測定儀中測定發(fā)酵液中剩余還原糖的殘?zhí)橇?， 做 好記錄。 結果如表 1。 01234567 標樣濃度（mg/ml）波峰面積圖 3 環(huán)腺苷酸 標準曲線 6 表 1 搖瓶 發(fā)酵體積、 pH、殘?zhí)?結果 編號 發(fā)酵液 體積（ ml） Ph 殘?zhí)橇? 11 27 12 26 0 13 21 27 22 29 23 28 31 27 32 24 33 27 0 41 27 42 43 28 51 29 52 29 53 27 61 29 62 28 63 25 高效 液相 測定 發(fā)酵 液中環(huán)磷酸腺苷的含量 環(huán)磷酸腺苷標準品高效液相圖如圖 4 ，次黃嘌呤 標 準 品 的 高效液相圖 如 圖 5 7 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0 . 02 . 5mV ( x 1 0 0)D e t e ct o r A : 25 4 nm 3.2923.5573.9254.2424.4904.8525.1736.1607.6367.8858.31310.86711.105 圖 4 環(huán)腺苷酸 標準 品的 高效液相圖0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0 . 00 . 51 . 0mV ( x 1 , 00 0 )D e t e ct o r A : 25 4 nm 3.5254.7506.114 圖 5 次黃嘌呤 標 準 品的高效液相圖 不同菌落 發(fā)酵 液樣品高效液相圖譜如圖 6 至圖 23所示。 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0 . 000 . 250 . 500 . 751 . 00mV ( x 1 , 00 0 )D e t e ct o r A : 25 4 nm 1.511 3.1323.2703.4984.3694.5595.4816.0798.0229.69010.006 圖 6 菌落 11高效液相圖 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0 . 00 . 51 . 0mV ( x 1 , 00 0 )D e t e ct o r A : 25 4 nm 1.5233.2823.5114.4255.4836.1138.0089.3429.683 圖 7 菌落 12高效 液相圖 8 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0 . 00 . 51 . 01 . 52 . 0mV ( x 1 , 00 0 )D e t e ct o r A : 25 4 nm 1.508 53.4824.3714.5085.432 6.0387.9479.613 圖 8 菌落 13高效液相圖 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0 . 00 . 51 . 01 . 52 . 0mV ( x 1 , 00 0 )D e t e ct o r A : 25 4 nm 1.5203.1313.2723.4974.3955.3716.0197.8879.509 圖 9 菌落 21高效液相圖 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0 . 00 . 51 . 0mV ( x 1 , 00 0 )D e t e ct o r A : 25 4 nm 1.5063.2473.4704.3365.3635.9957.9109.539 圖 10 菌落 22高效液相 圖 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 1 0. 0 m i n0