【導(dǎo)讀】目前，人們已經(jīng)通過模型動物發(fā)現(xiàn)了許多。研究開發(fā)新藥和制定防治措施做出了巨大貢獻(xiàn)。重要，其首要的問題就涉及到動物模型的建立。帶走組織的代謝產(chǎn)物。微循環(huán)直接與組織細(xì)胞接。大量的微小血栓，從而誘發(fā)微循環(huán)障礙動物模型。定，新購買的動物飼養(yǎng)數(shù)日，使其適應(yīng)環(huán)境。配制時可適當(dāng)加熱助溶。鼠尾靜脈）緩慢注射5%的HMWD，5ml/kg，物嚴(yán)重貧血、血尿和腎功能衰竭而死亡。由于動物具有自我清除HMWD的作。用，因而血液流變學(xué)改變只能維持24~48h。毛增多，細(xì)胞漿內(nèi)可見眾多吞飲小泡。該動物模型不需要特殊設(shè)備，操作?？捎糜诩毙詫嶒?。器官功能衰竭而死亡。在動物飼料中加入過量的膽固醇和。狀動脈內(nèi)逐漸形成粥樣硬化斑塊。3．大鼠誘發(fā)模型喂服l%~4%膽固醇、10%豬。加5%膽固醇、2%膽酸鈉、30%可可脂，喂養(yǎng)25周，定血脂水平和代謝狀況后，隨機(jī)分組。禁食、不禁水12h，稱量體重，自耳中央動脈采血，另取主動脈根部約1&#215;1mm2大小動脈。以10%的福爾馬林固定，蘇丹Ⅲ染色。Ⅱ級：動脈粥樣硬化病變面積6%~15%（<1/

　　

【正文】 前 1mm， 單側(cè)中線 1mm， 中線兩側(cè) 3mm各鉆 ，此三孔分別旋入直徑 、 長 5mm的平頭螺絲釘接觸硬膜表面，作為腦電記錄電極；⑤電泳完畢立即記錄腦電圖（ EEG） 3h， 為急性期 EEG；⑥ 電泳完畢后 15天及 30天記錄 EEG為慢性 EEG。 ? 2．結(jié)果評價 急性期 EEG癇樣放電率為 75%，電泳后 ，逐漸加劇，電泳后 1h癇波波及對側(cè)，約在 ， 2h左右癇波趨于停止。慢性期觀察所有動物 EEG均可出現(xiàn)癇樣放電。 ? 二 、 部分復(fù)雜性癲癇模型 ? 目前認(rèn)為 ， 研究腦興奮性 、 可塑性及長時程增強(qiáng)最實用的模型為點燃效應(yīng) （ kindling effect） 模型 。 哺乳類動物均可建立該類模型 ， 廣泛用于抗癲癇藥物的藥效研究 ， 但其機(jī)理仍未完全闡明 ?，F(xiàn)以大鼠為例進(jìn)行介紹 。 ? 1． 實驗方法 ? （ 1）成年健康雄性 SD或 Wistar大鼠，體重 150g。麻醉后固定于立體定位儀上，根據(jù)大鼠海馬 CA1區(qū)坐標(biāo)，冠狀縫后 ， 中中線旁 ， 雙側(cè)顱骨鉆孔，用立體定位儀將尖端剝露的直徑 漆包線所制的電極制露雙側(cè)海馬 CA1區(qū)，并用牙科水泥妥善固定，也可選擇雙側(cè)杏仁核團(tuán)。 ? （ 2） 術(shù)后經(jīng)恢復(fù) 7天后 ， 通過所制露的電極每日給予電刺激 ， 參數(shù)為雙相方波 ， 波寬 1ms， 頻率50~60Hz， 強(qiáng)度 ~， 刺激持續(xù) 2~6s； ? （ 3） 刺激數(shù)日后可記錄到對該刺激反應(yīng)的后放電 ， 隨著刺激反應(yīng)的增加 ， 后放電逐漸延長并復(fù)雜化 ， 直至出現(xiàn)癲癇樣放電并伴癲癇發(fā)作；刺激30~50天左右 ， 這種癇樣放電發(fā)作開始穩(wěn)定 ， 說明動物開始點燃 ， 以后不予刺激也有癲癇樣自發(fā)發(fā)作 。 ? 2． 結(jié)果評價 1978年 Racine將其分為五級： Ⅰ級：面部陣攣 ， Ⅱ 級： Ⅰ 級加節(jié)律性點頭 ， Ⅲ 級：Ⅱ 級加前肢陣攣 ， Ⅳ 級： Ⅲ 級加后肢站立 ， Ⅴ 級為 Ⅳ 級加跌倒 。 Ⅵ 、 Ⅴ 級可作為繼發(fā)性全身性癲癇模型 。 ? 三 、 藥物誘發(fā)癲癇模型 ? 馬桑內(nèi)酯可誘發(fā)癲癇模型 ， 根據(jù)出現(xiàn)癥狀的遲緩可分為急性癲癇模型和慢性癲癇模型 。 現(xiàn)已大鼠為例進(jìn)行介紹 。 ? 1． 動物和試劑 成年健康雄性 SD或Wistar大鼠 ， 體重 150g。 馬桑內(nèi)酯 ，5mg/ml。 ? 2． 實驗方法 ? （ 1） 急性癲癇模型：將大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀上 ， 根據(jù)鼠腦立體定位圖譜確定側(cè)腦室的位置 ， 將微量注射器垂直進(jìn)針直至側(cè)腦室 ， 緩慢注射馬桑內(nèi)酯 2ul， 留針5min后撤出 ， 小心處理針孔 ， 將大鼠放回籠養(yǎng) 、 觀察 。 ? （ 2） 慢性癲癇模型：大鼠肌肉 （ 腹腔 ） 注射馬桑內(nèi)酯 ， 1 mg/kg體重 /次 ， 然后觀察150min， 記錄點燃效應(yīng)保留時間 、 自發(fā)性發(fā)作頻率和每次 Ⅴ 級發(fā)作的時間 。 每 一次 ， 直至達(dá)到點燃標(biāo)準(zhǔn) 。 ? ? 3． 檢測指標(biāo) 動物反復(fù)注射馬桑內(nèi)酯后 ， 逐漸出現(xiàn)不同發(fā)作級別的行為和典型癇波 ， 一般癇波出現(xiàn)略早于癲癇行為 ， 尤以海馬明顯 ， 而且振幅較高 。 ? （ 1） 癲癇行為：急性癲癇模型于注射藥物后1h左右 ， 動物即出現(xiàn)流涎 、 胡須抖動 、 動作不協(xié)調(diào)以及發(fā)生全身抽搐 。 慢性癲癇模型發(fā)作時從頭面部肌群短暫性抽搐開始 ， 逐漸頻繁 ， 然后發(fā)展到肢體及全身抽搐 、 陣攣 ， 直至奔跑 、 跳躍 、 倒地及翻滾 ， 持續(xù)時間較短 ， 動物逐漸恢復(fù)到發(fā)作前狀態(tài) 。 多數(shù)動物在注射藥物 9~11次后點燃 ， 表現(xiàn)為注射藥物后動物出現(xiàn)全身陣攣 強(qiáng)直性發(fā)作 ，以陣攣發(fā)作為主 。 ? （ 2） 腦電圖檢測：癲癇大鼠的 ECOG波形為棘波 、 尖波 、 尖慢復(fù)合波 、 棘慢復(fù)合波以及雙尖波等癇性波 ， 大發(fā)作時癇波波幅為 160~460181。V， 比基波高 3~4倍 。 ? 4． 癲癇分級 根據(jù)動物的癲癇行為和腦電圖變化可將癲癇程度分為六級： 0級 ， 無任何發(fā)作跡象；Ⅰ 級 ， 流涎 、 須動 、 身抖等頭面部肌群的短暫發(fā)作 ， 伴有典型癇波； Ⅱ 級 ， 全身驚動 ， 動作不協(xié)調(diào) 、 伴典型癇波； Ⅲ 級 ， 前肢陣攣性發(fā)作 ， 伴典型癇波； Ⅳ 級：后肢站立 ， 頭傾向一側(cè)同時全身陣攣性發(fā)作 ， 連續(xù)高幅癇波； Ⅴ 級 ， Ⅳ 級加跌倒 。 ? 5． 點燃標(biāo)準(zhǔn) 在連續(xù)注射馬桑內(nèi)酯 3~5次期間 ，出現(xiàn) 3次 Ⅳ ~Ⅴ 級發(fā)作即被認(rèn)為達(dá)到點燃標(biāo)準(zhǔn) 。 ? 四 、 藥物誘發(fā)痙攣模型 ? 將致痙攣藥物戊四氮 （ pentylene tetrazol） 和貝美格 （ bemegride） 經(jīng)腹腔或皮下注射入小鼠體內(nèi) ， 或經(jīng)靜脈注射入貓 、 狗 、 猴體內(nèi) ， 均可誘發(fā)強(qiáng)直性間歇性痙攣 。 印防己毒素和荷花牡丹堿作用于突觸后受體阻斷 γ氨基酪酸作用 ， 以此誘發(fā)痙攣 ， 臨床表現(xiàn)與戊四氮引起的痙攣非常相似 ， 但潛伏期較長 。 士的寧在突觸后膜與氨基乙酸競爭受體 ， 主要引起強(qiáng)直性痙攣 ， 常常由感覺刺激誘發(fā) ， 動物呈角弓反張狀態(tài) 。 4去氧吡哆醇和異煙肼類物質(zhì)如磷酸吡哆醛等則依賴酶系抑制劑誘發(fā)痙攣 ， 但多為疾走痙攣 。 胍基化合物是正常機(jī)體的成分 ， 把 γ胍基酪酸 、 N乙酰精氨酸 、 脒基?；撬岬任镔|(zhì)注入動物體內(nèi)也可引起痙攣 。 ? 五 、 電刺激誘發(fā)痙攣模型 ? 在實驗動物頭部通電可引起痙攣發(fā)作 。 痙攣發(fā)作模型依通電電流的強(qiáng)度和刺激的頻率而呈不同表現(xiàn) ， 通常分為最大發(fā)作和閾值發(fā)作 。 為了引起閾值發(fā)作 ， 要給小鼠或大鼠比較強(qiáng)的刺激 。 實驗動物首先出現(xiàn)自失狀態(tài) ， 即自僵癥 。 再稍稍提高刺激電壓 ，會引起間歇性發(fā)作 ， 這種狀態(tài)僅持續(xù) 5秒左右 ， 將其作為最小電刺激 （ EST） 。 EST可以通過觸毛 、顏面和耳朵的間歇性運動捕捉到 。 另一方面 ， 用60Hz、 ， 刺激誘發(fā)最大發(fā)作 。 運動系統(tǒng)的反應(yīng)主要可見自僵 、 間歇性運動 、 強(qiáng)直性屈曲性或強(qiáng)直性伸直性痙攣 。 該模型可以通過對電流的調(diào)節(jié) ， 根據(jù)腦內(nèi)放電狀況進(jìn)行相關(guān)生理學(xué)和藥理學(xué)研究 ， 特別是在抗痙攣藥物療效觀察 ， 多使用這一方法 。 第十節(jié) 神經(jīng)系統(tǒng)外傷模型 ? 中樞神經(jīng)系統(tǒng)外傷是神經(jīng)外科學(xué)常見的急癥 ， 其病情嚴(yán)重 、 發(fā)展迅速 、 變化無常 ， 而且死亡率和致殘率較高 ， 至今尚無有效的治療手段 。 因此 ， 該領(lǐng)域的實驗研究顯得特別重要 。 本節(jié)主要介紹幾種常用的顱腦外傷和脊髓損傷動物模型 。 ? 一 、 顱腦外傷模型 ? 顱腦外傷可因外力的大小 、 方向 、 速度 、著力點 、 武器的性質(zhì) （ 銳性或鈍性 ） 等因素造成不同程度的閉合性或開放性顱腦損傷 ， 病情的嚴(yán)重程度受傷時病人的體位 、精神狀態(tài)和身體素質(zhì)等因素也有重要的關(guān)系 。 因此 ， 要建立一種完全符合人類顱腦外傷的動物模型是非常困難的 。 目前 ， 有關(guān)顱腦外傷模型很多 ， 缺乏統(tǒng)一的分型 ，此處只介紹本實驗室開展的顱腦背側(cè)外傷模型 。 ? 利用自由墜落的物體撞擊顱骨背側(cè) ， 建立顱腦外傷模型 。 可根據(jù)實驗的要求 ， 人為地控制損傷的部位 、 損傷區(qū)域的大小 ，并通過更換不同重量的物體控制損傷的程度 。 該模型與人類顱腦外傷相近；創(chuàng)傷位置可以通過手術(shù)限定 ， 打擊量可以計算；由于不撕破硬腦膜 ， 可以防止結(jié)締組織或其他外來成份侵入損傷腦組織 ， 可用于顱腦損傷的病理生理機(jī)制和實驗性治療研究 。適用于各種實驗動物 ， 現(xiàn)以大鼠為例進(jìn)行介紹 。 ? 1． 實驗準(zhǔn)備 ? （ 1） 成年健康 Wistar或 SD大鼠 ， 體重 250g， 性別不限 。 ? （ 2） 重力打擊裝置：金屬臺架 ， 不同管徑和長度的玻璃管 ， 金屬砝碼 、 撞桿 。 ? （ 3） 腦立體定位儀 。 2． 實驗方法 ? （ 1） 用 10%水合氯醛 （ 300mg/kg） 腹腔注射麻醉動物 ， 固定于腦立體定位儀上 。 ? （ 2） 無菌操作 ， 于顱頂部正中切開皮膚 ， 皮下組織 ， 暴露顱骨 。 也可根據(jù)實驗要求 ， 用骨鉆去除顱骨 ， 暴露硬腦膜 ， 注意勿損傷硬腦膜和腦組織 。 將撞桿輕輕置于預(yù)備打擊的顱骨或開顱后的硬腦膜表面 （ 圖 22） 。 ? ? （ 3） 根據(jù)實驗要求 ， 選擇合適管徑和長度的玻璃管 ， 合適的砝碼 。 調(diào)整玻璃管于垂直位 ， 使其下端開口貼于預(yù)備打擊的顱骨 （ 或硬腦膜 ） 表面 。 ? （ 4） 用一定重量砝碼 ， 從預(yù)定高度沿玻璃管自由落下 ， 撞擊撞桿 ， 造成顱骨及腦組織損傷 ， 傷力以勢能克厘米 （ gcm） 表示 。 ? （ 5） 消毒 ， 縫合皮膚 。 術(shù)后動物分籠飼養(yǎng) ， 自由攝食和飲水 。 ? 3． 評價指標(biāo) ? （ 1） 動物受到打擊后可出現(xiàn)意識障礙和行為功能異常 。 可應(yīng)用神經(jīng)功能等級評分方法綜合評價動物的行為功能 （ 參見第一章第六節(jié) ） 。 ? （ 2） 有無骨折 ， 硬膜外血腫 ， 腦挫裂傷等 。 ? 二 、 脊髓損傷模型 ? 脊髓損傷模型 （ Animal model of spinal cord injury） 繁多 ， 而且缺乏統(tǒng)一的分型 。 目前 ， 較為成熟的脊髓損傷模型有脊髓背側(cè)損傷模型 ， 脊髓腹側(cè)損傷模型 ，脊髓縱向壓縮損傷模型 ， 脊髓缺血性損傷模型以及脊髓火器傷損傷模型 。 ? ? （ 一 ） 脊髓背側(cè)損傷模型 ? 1 9 1 1 年 Allen 采用動物墜落 （ Weight dropping， WD） 撞擊脊髓背側(cè) ， 首次在動物身上復(fù)制出脊髓損傷模型 ， 開創(chuàng)了脊髓損傷的標(biāo)準(zhǔn)化實驗研究 。 但 Allen氏打擊法尚存在一些技術(shù)問題 ， 如在挫傷脊髓的瞬間 ， 脊柱和脊髓的不穩(wěn)定及脊髓的側(cè)向偏移 ， 導(dǎo)致脊髓損傷的不對稱 ， 損傷區(qū)大小亦不恒定 。 從而導(dǎo)致動物的癱瘓程度和持續(xù)時間出現(xiàn)較大的差異 。 因而 ， 一些學(xué)者對WD法進(jìn)行了改進(jìn) 。 其中以 Freeman和 Wringht的改良 WD法較為成功并被廣泛地用來研究脊髓背側(cè)損傷 。 ? 1． 實驗方法 選用成年健康狗 、 兔或大鼠 。 用一個二甲基丙烯酸材料的撞桿植入一內(nèi)直徑與打擊脊髓相等的玻璃管內(nèi) ， 撞桿的脊髓端呈凸面與脊髓外形相吻合 。 選擇不同重量的砝碼用作打擊物 。 具體方法：用 3%戊巴比妥鈉 （ 40mg/kg） 靜脈或腹腔內(nèi)麻醉 。 無菌條件下 ， 于動物背側(cè)正中切開皮膚 ，皮下組織 。 暴露預(yù)備損傷段脊髓 ， 固定玻璃管于暴露脊髓表面 ， 使撞桿輕輕接觸脊髓 。 用一定重量砝碼 ， 從預(yù)定高度沿玻璃管自由落下 ， 撞擊撞桿 ， 造成脊髓分級損傷 ， 傷力以勢能 （ ） 表示 。 術(shù)后動物分籠飼養(yǎng) ， 自由攝取水和食物 。 動物出現(xiàn)明顯的截癱癥狀 ， 脊髓誘發(fā)電位潛伏期延長 ， 波形消失或?qū)挻蠡?。 ? ? 2．模型特點 該模型與人類脊髓損傷相近；創(chuàng)傷位置可以通過手術(shù)限定，打擊量可以計算；由于不撕破硬脊膜，可以防止結(jié)締組織或其他外來成份侵入損傷脊髓。本模型可用于脊髓損傷的病理生理機(jī)制和實驗性治療研究。 ? （ 二 ） 脊髓缺血性損傷脊髓模型 ? 1． 基本原理 脊髓損傷后脊髓血流改變是引起脊髓壞死和神經(jīng)功能喪失的重要原因 ， 而灰質(zhì)與白質(zhì)中的血管反應(yīng)又有所不同 。 不論創(chuàng)傷程度如何 ， 脊髓損傷后灰質(zhì)在 1~2h內(nèi)迅速出現(xiàn)缺血和梗死 。 而白質(zhì)血流的改變似乎受動物種類 、 血流量測量方法和創(chuàng)傷程度的影響 。 研究發(fā)現(xiàn) ， 輕度損傷引起血流改變的類型有所不同 ， 而重度損傷均引起缺血 。 引起缺血的脊髓損傷將導(dǎo)致組織壞死 ， 神經(jīng)功能差 。 1982年 Zivin首次利用兔制作脊髓缺血性損傷模型 ， 以了解脊髓缺血時間與損傷程度的關(guān)系 。 ? 2． 實驗方法 選用日本大耳白兔 ， 體重 2~。 用 %戊巴比妥鈉靜脈麻醉（ ） 。 無菌條件下 ， 腹正中線切口 ， 暴露分離腹主動脈 ， 緊靠左腎動脈分支下方夾閉腹主動脈 ， 分別夾閉 3 4 50min。 切口分層縫合 。 術(shù)后1~2h內(nèi)動物清醒 。 術(shù)后動物出現(xiàn)不同程序的截癱癥狀 ， 脊髓血流量下降 ， 病理檢查 ，病變主要累及前角及中央管周圍 ， 表現(xiàn)為：神經(jīng)細(xì)胞稀少 ， 核固縮