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常用動物模型(ppt100)-經營管理-資料下載頁

2024-08-15 10:41本頁面

【導讀】目前,人們已經通過模型動物發(fā)現了許多。研究開發(fā)新藥和制定防治措施做出了巨大貢獻。重要,其首要的問題就涉及到動物模型的建立。帶走組織的代謝產物。微循環(huán)直接與組織細胞接。大量的微小血栓,從而誘發(fā)微循環(huán)障礙動物模型。定,新購買的動物飼養(yǎng)數日,使其適應環(huán)境。配制時可適當加熱助溶。鼠尾靜脈)緩慢注射5%的HMWD,5ml/kg,物嚴重貧血、血尿和腎功能衰竭而死亡。由于動物具有自我清除HMWD的作。用,因而血液流變學改變只能維持24~48h。毛增多,細胞漿內可見眾多吞飲小泡。該動物模型不需要特殊設備,操作??捎糜诩毙詫嶒灐F鞴俟δ芩ソ叨劳?。在動物飼料中加入過量的膽固醇和。狀動脈內逐漸形成粥樣硬化斑塊。3.大鼠誘發(fā)模型喂服l%~4%膽固醇、10%豬。加5%膽固醇、2%膽酸鈉、30%可可脂,喂養(yǎng)25周,定血脂水平和代謝狀況后,隨機分組。禁食、不禁水12h,稱量體重,自耳中央動脈采血,另取主動脈根部約1&#215;1mm2大小動脈。以10%的福爾馬林固定,蘇丹Ⅲ染色。Ⅱ級:動脈粥樣硬化病變面積6%~15%(<1/

  

【正文】 前 1mm, 單側中線 1mm, 中線兩側 3mm各鉆 ,此三孔分別旋入直徑 、 長 5mm的平頭螺絲釘接觸硬膜表面,作為腦電記錄電極;⑤電泳完畢立即記錄腦電圖( EEG) 3h, 為急性期 EEG;⑥ 電泳完畢后 15天及 30天記錄 EEG為慢性 EEG。 ? 2.結果評價 急性期 EEG癇樣放電率為 75%,電泳后 ,逐漸加劇,電泳后 1h癇波波及對側,約在 , 2h左右癇波趨于停止。慢性期觀察所有動物 EEG均可出現癇樣放電。 ? 二 、 部分復雜性癲癇模型 ? 目前認為 , 研究腦興奮性 、 可塑性及長時程增強最實用的模型為點燃效應 ( kindling effect) 模型 。 哺乳類動物均可建立該類模型 , 廣泛用于抗癲癇藥物的藥效研究 , 但其機理仍未完全闡明 ?,F以大鼠為例進行介紹 。 ? 1. 實驗方法 ? ( 1)成年健康雄性 SD或 Wistar大鼠,體重 150g。麻醉后固定于立體定位儀上,根據大鼠海馬 CA1區(qū)坐標,冠狀縫后 , 中中線旁 , 雙側顱骨鉆孔,用立體定位儀將尖端剝露的直徑 漆包線所制的電極制露雙側海馬 CA1區(qū),并用牙科水泥妥善固定,也可選擇雙側杏仁核團。 ? ( 2) 術后經恢復 7天后 , 通過所制露的電極每日給予電刺激 , 參數為雙相方波 , 波寬 1ms, 頻率50~60Hz, 強度 ~, 刺激持續(xù) 2~6s; ? ( 3) 刺激數日后可記錄到對該刺激反應的后放電 , 隨著刺激反應的增加 , 后放電逐漸延長并復雜化 , 直至出現癲癇樣放電并伴癲癇發(fā)作;刺激30~50天左右 , 這種癇樣放電發(fā)作開始穩(wěn)定 , 說明動物開始點燃 , 以后不予刺激也有癲癇樣自發(fā)發(fā)作 。 ? 2. 結果評價 1978年 Racine將其分為五級: Ⅰ級:面部陣攣 , Ⅱ 級: Ⅰ 級加節(jié)律性點頭 , Ⅲ 級:Ⅱ 級加前肢陣攣 , Ⅳ 級: Ⅲ 級加后肢站立 , Ⅴ 級為 Ⅳ 級加跌倒 。 Ⅵ 、 Ⅴ 級可作為繼發(fā)性全身性癲癇模型 。 ? 三 、 藥物誘發(fā)癲癇模型 ? 馬桑內酯可誘發(fā)癲癇模型 , 根據出現癥狀的遲緩可分為急性癲癇模型和慢性癲癇模型 。 現已大鼠為例進行介紹 。 ? 1. 動物和試劑 成年健康雄性 SD或Wistar大鼠 , 體重 150g。 馬桑內酯 ,5mg/ml。 ? 2. 實驗方法 ? ( 1) 急性癲癇模型:將大鼠麻醉后固定于腦立體定位儀上 , 根據鼠腦立體定位圖譜確定側腦室的位置 , 將微量注射器垂直進針直至側腦室 , 緩慢注射馬桑內酯 2ul, 留針5min后撤出 , 小心處理針孔 , 將大鼠放回籠養(yǎng) 、 觀察 。 ? ( 2) 慢性癲癇模型:大鼠肌肉 ( 腹腔 ) 注射馬桑內酯 , 1 mg/kg體重 /次 , 然后觀察150min, 記錄點燃效應保留時間 、 自發(fā)性發(fā)作頻率和每次 Ⅴ 級發(fā)作的時間 。 每 一次 , 直至達到點燃標準 。 ? ? 3. 檢測指標 動物反復注射馬桑內酯后 , 逐漸出現不同發(fā)作級別的行為和典型癇波 , 一般癇波出現略早于癲癇行為 , 尤以海馬明顯 , 而且振幅較高 。 ? ( 1) 癲癇行為:急性癲癇模型于注射藥物后1h左右 , 動物即出現流涎 、 胡須抖動 、 動作不協調以及發(fā)生全身抽搐 。 慢性癲癇模型發(fā)作時從頭面部肌群短暫性抽搐開始 , 逐漸頻繁 , 然后發(fā)展到肢體及全身抽搐 、 陣攣 , 直至奔跑 、 跳躍 、 倒地及翻滾 , 持續(xù)時間較短 , 動物逐漸恢復到發(fā)作前狀態(tài) 。 多數動物在注射藥物 9~11次后點燃 , 表現為注射藥物后動物出現全身陣攣 強直性發(fā)作 ,以陣攣發(fā)作為主 。 ? ( 2) 腦電圖檢測:癲癇大鼠的 ECOG波形為棘波 、 尖波 、 尖慢復合波 、 棘慢復合波以及雙尖波等癇性波 , 大發(fā)作時癇波波幅為 160~460181。V, 比基波高 3~4倍 。 ? 4. 癲癇分級 根據動物的癲癇行為和腦電圖變化可將癲癇程度分為六級: 0級 , 無任何發(fā)作跡象;Ⅰ 級 , 流涎 、 須動 、 身抖等頭面部肌群的短暫發(fā)作 , 伴有典型癇波; Ⅱ 級 , 全身驚動 , 動作不協調 、 伴典型癇波; Ⅲ 級 , 前肢陣攣性發(fā)作 , 伴典型癇波; Ⅳ 級:后肢站立 , 頭傾向一側同時全身陣攣性發(fā)作 , 連續(xù)高幅癇波; Ⅴ 級 , Ⅳ 級加跌倒 。 ? 5. 點燃標準 在連續(xù)注射馬桑內酯 3~5次期間 ,出現 3次 Ⅳ ~Ⅴ 級發(fā)作即被認為達到點燃標準 。 ? 四 、 藥物誘發(fā)痙攣模型 ? 將致痙攣藥物戊四氮 ( pentylene tetrazol) 和貝美格 ( bemegride) 經腹腔或皮下注射入小鼠體內 , 或經靜脈注射入貓 、 狗 、 猴體內 , 均可誘發(fā)強直性間歇性痙攣 。 印防己毒素和荷花牡丹堿作用于突觸后受體阻斷 γ氨基酪酸作用 , 以此誘發(fā)痙攣 , 臨床表現與戊四氮引起的痙攣非常相似 , 但潛伏期較長 。 士的寧在突觸后膜與氨基乙酸競爭受體 , 主要引起強直性痙攣 , 常常由感覺刺激誘發(fā) , 動物呈角弓反張狀態(tài) 。 4去氧吡哆醇和異煙肼類物質如磷酸吡哆醛等則依賴酶系抑制劑誘發(fā)痙攣 , 但多為疾走痙攣 。 胍基化合物是正常機體的成分 , 把 γ胍基酪酸 、 N乙酰精氨酸 、 脒基?;撬岬任镔|注入動物體內也可引起痙攣 。 ? 五 、 電刺激誘發(fā)痙攣模型 ? 在實驗動物頭部通電可引起痙攣發(fā)作 。 痙攣發(fā)作模型依通電電流的強度和刺激的頻率而呈不同表現 , 通常分為最大發(fā)作和閾值發(fā)作 。 為了引起閾值發(fā)作 , 要給小鼠或大鼠比較強的刺激 。 實驗動物首先出現自失狀態(tài) , 即自僵癥 。 再稍稍提高刺激電壓 ,會引起間歇性發(fā)作 , 這種狀態(tài)僅持續(xù) 5秒左右 , 將其作為最小電刺激 ( EST) 。 EST可以通過觸毛 、顏面和耳朵的間歇性運動捕捉到 。 另一方面 , 用60Hz、 , 刺激誘發(fā)最大發(fā)作 。 運動系統(tǒng)的反應主要可見自僵 、 間歇性運動 、 強直性屈曲性或強直性伸直性痙攣 。 該模型可以通過對電流的調節(jié) , 根據腦內放電狀況進行相關生理學和藥理學研究 , 特別是在抗痙攣藥物療效觀察 , 多使用這一方法 。 第十節(jié) 神經系統(tǒng)外傷模型 ? 中樞神經系統(tǒng)外傷是神經外科學常見的急癥 , 其病情嚴重 、 發(fā)展迅速 、 變化無常 , 而且死亡率和致殘率較高 , 至今尚無有效的治療手段 。 因此 , 該領域的實驗研究顯得特別重要 。 本節(jié)主要介紹幾種常用的顱腦外傷和脊髓損傷動物模型 。 ? 一 、 顱腦外傷模型 ? 顱腦外傷可因外力的大小 、 方向 、 速度 、著力點 、 武器的性質 ( 銳性或鈍性 ) 等因素造成不同程度的閉合性或開放性顱腦損傷 , 病情的嚴重程度受傷時病人的體位 、精神狀態(tài)和身體素質等因素也有重要的關系 。 因此 , 要建立一種完全符合人類顱腦外傷的動物模型是非常困難的 。 目前 , 有關顱腦外傷模型很多 , 缺乏統(tǒng)一的分型 ,此處只介紹本實驗室開展的顱腦背側外傷模型 。 ? 利用自由墜落的物體撞擊顱骨背側 , 建立顱腦外傷模型 。 可根據實驗的要求 , 人為地控制損傷的部位 、 損傷區(qū)域的大小 ,并通過更換不同重量的物體控制損傷的程度 。 該模型與人類顱腦外傷相近;創(chuàng)傷位置可以通過手術限定 , 打擊量可以計算;由于不撕破硬腦膜 , 可以防止結締組織或其他外來成份侵入損傷腦組織 , 可用于顱腦損傷的病理生理機制和實驗性治療研究 。適用于各種實驗動物 , 現以大鼠為例進行介紹 。 ? 1. 實驗準備 ? ( 1) 成年健康 Wistar或 SD大鼠 , 體重 250g, 性別不限 。 ? ( 2) 重力打擊裝置:金屬臺架 , 不同管徑和長度的玻璃管 , 金屬砝碼 、 撞桿 。 ? ( 3) 腦立體定位儀 。 2. 實驗方法 ? ( 1) 用 10%水合氯醛 ( 300mg/kg) 腹腔注射麻醉動物 , 固定于腦立體定位儀上 。 ? ( 2) 無菌操作 , 于顱頂部正中切開皮膚 , 皮下組織 , 暴露顱骨 。 也可根據實驗要求 , 用骨鉆去除顱骨 , 暴露硬腦膜 , 注意勿損傷硬腦膜和腦組織 。 將撞桿輕輕置于預備打擊的顱骨或開顱后的硬腦膜表面 ( 圖 22) 。 ? ? ( 3) 根據實驗要求 , 選擇合適管徑和長度的玻璃管 , 合適的砝碼 。 調整玻璃管于垂直位 , 使其下端開口貼于預備打擊的顱骨 ( 或硬腦膜 ) 表面 。 ? ( 4) 用一定重量砝碼 , 從預定高度沿玻璃管自由落下 , 撞擊撞桿 , 造成顱骨及腦組織損傷 , 傷力以勢能克厘米 ( gcm) 表示 。 ? ( 5) 消毒 , 縫合皮膚 。 術后動物分籠飼養(yǎng) , 自由攝食和飲水 。 ? 3. 評價指標 ? ( 1) 動物受到打擊后可出現意識障礙和行為功能異常 。 可應用神經功能等級評分方法綜合評價動物的行為功能 ( 參見第一章第六節(jié) ) 。 ? ( 2) 有無骨折 , 硬膜外血腫 , 腦挫裂傷等 。 ? 二 、 脊髓損傷模型 ? 脊髓損傷模型 ( Animal model of spinal cord injury) 繁多 , 而且缺乏統(tǒng)一的分型 。 目前 , 較為成熟的脊髓損傷模型有脊髓背側損傷模型 , 脊髓腹側損傷模型 ,脊髓縱向壓縮損傷模型 , 脊髓缺血性損傷模型以及脊髓火器傷損傷模型 。 ? ? ( 一 ) 脊髓背側損傷模型 ? 1 9 1 1 年 Allen 采用動物墜落 ( Weight dropping, WD) 撞擊脊髓背側 , 首次在動物身上復制出脊髓損傷模型 , 開創(chuàng)了脊髓損傷的標準化實驗研究 。 但 Allen氏打擊法尚存在一些技術問題 , 如在挫傷脊髓的瞬間 , 脊柱和脊髓的不穩(wěn)定及脊髓的側向偏移 , 導致脊髓損傷的不對稱 , 損傷區(qū)大小亦不恒定 。 從而導致動物的癱瘓程度和持續(xù)時間出現較大的差異 。 因而 , 一些學者對WD法進行了改進 。 其中以 Freeman和 Wringht的改良 WD法較為成功并被廣泛地用來研究脊髓背側損傷 。 ? 1. 實驗方法 選用成年健康狗 、 兔或大鼠 。 用一個二甲基丙烯酸材料的撞桿植入一內直徑與打擊脊髓相等的玻璃管內 , 撞桿的脊髓端呈凸面與脊髓外形相吻合 。 選擇不同重量的砝碼用作打擊物 。 具體方法:用 3%戊巴比妥鈉 ( 40mg/kg) 靜脈或腹腔內麻醉 。 無菌條件下 , 于動物背側正中切開皮膚 ,皮下組織 。 暴露預備損傷段脊髓 , 固定玻璃管于暴露脊髓表面 , 使撞桿輕輕接觸脊髓 。 用一定重量砝碼 , 從預定高度沿玻璃管自由落下 , 撞擊撞桿 , 造成脊髓分級損傷 , 傷力以勢能 ( ) 表示 。 術后動物分籠飼養(yǎng) , 自由攝取水和食物 。 動物出現明顯的截癱癥狀 , 脊髓誘發(fā)電位潛伏期延長 , 波形消失或寬大畸形 。 ? ? 2.模型特點 該模型與人類脊髓損傷相近;創(chuàng)傷位置可以通過手術限定,打擊量可以計算;由于不撕破硬脊膜,可以防止結締組織或其他外來成份侵入損傷脊髓。本模型可用于脊髓損傷的病理生理機制和實驗性治療研究。 ? ( 二 ) 脊髓缺血性損傷脊髓模型 ? 1. 基本原理 脊髓損傷后脊髓血流改變是引起脊髓壞死和神經功能喪失的重要原因 , 而灰質與白質中的血管反應又有所不同 。 不論創(chuàng)傷程度如何 , 脊髓損傷后灰質在 1~2h內迅速出現缺血和梗死 。 而白質血流的改變似乎受動物種類 、 血流量測量方法和創(chuàng)傷程度的影響 。 研究發(fā)現 , 輕度損傷引起血流改變的類型有所不同 , 而重度損傷均引起缺血 。 引起缺血的脊髓損傷將導致組織壞死 , 神經功能差 。 1982年 Zivin首次利用兔制作脊髓缺血性損傷模型 , 以了解脊髓缺血時間與損傷程度的關系 。 ? 2. 實驗方法 選用日本大耳白兔 , 體重 2~。 用 %戊巴比妥鈉靜脈麻醉( ) 。 無菌條件下 , 腹正中線切口 , 暴露分離腹主動脈 , 緊靠左腎動脈分支下方夾閉腹主動脈 , 分別夾閉 3 4 50min。 切口分層縫合 。 術后1~2h內動物清醒 。 術后動物出現不同程序的截癱癥狀 , 脊髓血流量下降 , 病理檢查 ,病變主要累及前角及中央管周圍 , 表現為:神經細胞稀少 , 核固縮
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