【正文】 血管系統(tǒng)也隨之發(fā)生了強(qiáng)烈性變化 ， 而引起持續(xù)性高血壓 。 ? ? 2．實(shí)驗(yàn)方法 除特殊要求外，多數(shù)都用大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，特別是體重在 100~150g之間的雌性大鼠感受性最高。也可使用在生理鹽水中添加界面活性劑和把 DOCA片劑包埋于動(dòng)物皮下的方法，約經(jīng) 2周，動(dòng)物血壓開(kāi)始上升，經(jīng) 5~7周即可出現(xiàn)惡性高血壓病態(tài)。 ? ? 六 、 自發(fā) （ 遺傳 ） 性高血壓大鼠模型 ? 1963年 Okamoto和 Aoki培育出具有持久性血壓升高的突變系大鼠，采用兄妹交配的方法，將血壓145~175mmHg的雄性 Wistar鼠與血壓 30~40mmHg的同種雌性鼠交配，其子代選擇血壓高者作近親交配，三代后，多數(shù)大鼠血壓超過(guò) 180mmHg， 即為自發(fā)性高血壓大鼠（ Spontaneous hypertensive rat，SHR）， 1969年又建立 SHR近交系，至 1979年已培育到 51代（ F51）。 ? 目前在 SHR的基礎(chǔ)上 ， 將易產(chǎn)生卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 培育出了易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。 SHRSR是抗腦出血和腦栓塞的自發(fā)性高血壓大鼠 。應(yīng)激性高血壓模型突出了中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激與高血壓的關(guān)系，但這類(lèi)模型形成高血壓時(shí)間短，不適于長(zhǎng)時(shí)間的研究。②形成高血壓所需時(shí)間較短，工作量較小。④與臨床降壓效果比較一致。 根據(jù)缺血的部位不同可分為全腦缺血和局灶性缺血/再灌流模型 ， 根據(jù)缺血 /再灌流的時(shí)間不同分為短暫性和永久性缺血模型 ， 根據(jù)制備方法可分為開(kāi)顱性和不開(kāi)顱性兩大類(lèi) 。 ? 一 、 線栓法制備局灶性腦缺血再灌流模型 ? 線栓法腦缺血再灌流模型的動(dòng)物應(yīng)具備以下條件：易于飼養(yǎng) 、 繁殖 ， 價(jià)格低廉 ， 操作簡(jiǎn)單 ， 與人類(lèi)腦梗死接近 ， 病變部位容易控制 ， 重復(fù)性好 。 ? 1． 實(shí)驗(yàn)原理 線栓法制備局灶性 MCAO/R動(dòng)物模型的機(jī)理是依靠插線的前端阻塞大腦前動(dòng)脈 ，阻止經(jīng)大腦前動(dòng)脈返流的血液 ， 依靠插線的側(cè)壁阻塞頸內(nèi)動(dòng)脈和后交通動(dòng)脈 ， 從而使一側(cè)大腦中動(dòng)脈的血流完全中斷造成大腦中動(dòng)脈閉塞腦缺血模型 。 ? 2． 實(shí)驗(yàn)方法 ? 將直徑 層硅膠 ， 使其直徑 ， 浸泡在肝素中備用 。 分離并電凝 ECA的甲狀腺上動(dòng)脈和枕動(dòng)脈分支 ， 小心處理 ICA的翼腭動(dòng)脈分支 （ 不結(jié)扎 ） 。 然后結(jié)扎 ECA近端 ，逐層縫合 ， 使尼龍線暴露于體表約 1cm。術(shù)中用 100W燈泡照射保持肛溫 36~37℃ 。術(shù)后注意保溫，加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)。 ? （ 2） TTC染色：即氯化 2,3,5三苯基四氮唑 （ 2 , 3 , 5 triphenyltetrazolium chloride， TTC） 染色 。 具體染色方法如下： ? ① 配制 1~2%的 TTC染液 。 ? ③ 置于 1~2%TTC染液中染色 （ 37℃ ）30~60min。 ? ⑤ 缺血區(qū)呈白色 ， 非缺血區(qū)呈紅色 ， 缺血半影區(qū)顏色介于前二者之間 。缺點(diǎn)是動(dòng)物要求嚴(yán)格，體重、鼠齡盡可能一致，健康狀況要好，手術(shù)過(guò)程中要細(xì)致輕柔，以免刺破血管，而且手術(shù)時(shí)間長(zhǎng)，死亡率高。 ? 二 、 一側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法 ? 1． 基本原理 沙鼠 （ mongolian gebil） 的腦內(nèi)血管系統(tǒng)與其他動(dòng)物不同 ， 其顱底 Willis動(dòng)脈環(huán)不完整 ， 缺乏后交通動(dòng)脈 ， 頸動(dòng)脈系和椎動(dòng)脈系不存在側(cè)枝血循環(huán) 。 大腦前動(dòng)脈也有發(fā)育不全的現(xiàn)象 ， 這就使缺血狀態(tài)更為嚴(yán)重 。 ? 2． 實(shí)驗(yàn)方法 暴露一側(cè)頸總動(dòng)脈鉗夾或結(jié)扎即可 ， 與線栓法相似 。 一旦出現(xiàn)上述癥狀即可確定發(fā)生了腦梗死 ， 80%以上的動(dòng)物在一周內(nèi)死亡 。 ? ? 4． 優(yōu)缺點(diǎn) 沙鼠易于飼養(yǎng) ， 手術(shù)操作簡(jiǎn)單 ，成功率高 ， 是建立局灶性腦缺血模型的理想動(dòng)物 。 ? 三 、 光化學(xué)局灶性腦梗塞模型 ? 1． 實(shí)驗(yàn)原理 光化學(xué)局灶性腦梗塞動(dòng)物模型的機(jī)理是利用某些光敏性染料在特定波長(zhǎng)的光線作用下發(fā)生光化學(xué)反應(yīng) ， 釋放一些活性物質(zhì) ， 引起血管內(nèi)皮損傷 ， 誘發(fā)血小板聚集 ， 導(dǎo)致光照區(qū)血管內(nèi)血栓形成 ， 局部腦組織缺血缺氧而壞死 ， 從而造成模擬腦梗塞現(xiàn)象 。 然后經(jīng)兔耳緣靜脈或大鼠尾靜脈，緩慢注射 %虎紅1ml/kg/min。 照射完畢用牙托粉封閉缺損處的顱骨，消毒，縫合皮膚，即完成動(dòng)物模型的制備。 經(jīng) TTC染色 ， 缺血區(qū)呈白色 ，非缺血區(qū)呈紅色 。 ? 4． 優(yōu)缺點(diǎn) 光化學(xué)腦梗塞動(dòng)物模型操作簡(jiǎn)單 ， 成功率高 ， 重復(fù)性好 ， 病灶的部位 、大小和深度易于控制 ， 動(dòng)物存活時(shí)間較長(zhǎng) ，可用于急性和慢性實(shí)驗(yàn) 。 ? 四 、 微血栓栓塞法 ? 把無(wú)菌干燥的血凝塊研碎篩濾 ， 制成微栓子混懸液 ， 從 ECA注入栓子后結(jié)扎 ECA并開(kāi)放 CCA， 微栓子被沖入 ICA后進(jìn)入 MCA。 有人選用碳素顆粒 、塑料顆粒和花生四烯酸鹽等作為栓塞劑制備腦梗塞模型 ， 但因與人類(lèi)卒中差異較大 ， 形態(tài)觀察結(jié)果有爭(zhēng)議 ， 因而應(yīng)用受到了限制 。其主要缺點(diǎn)是：由于栓子的隨機(jī)性，無(wú)法預(yù)測(cè)梗塞的部位和大小，由于側(cè)枝循環(huán)的影響使腦組織缺血程度不一，個(gè)體差異較大，不利于神經(jīng)癥狀觀察和組織定量分析。具體方法：將大鼠麻醉仰臥位固定，頸部正中切口，暴露雙側(cè) CCA后用動(dòng)脈夾夾閉，縫合皮膚。該方法重復(fù)性好，成功率高，可用于急、慢性全腦缺血實(shí)驗(yàn)研究。 第五節(jié) 腦出血模型 ? 根據(jù)制備方法的差異，腦出血模型大體可分為腦內(nèi)占位模型、人工誘發(fā)腦出血模型、高血壓卒中模型三類(lèi)。用于治療學(xué)研究時(shí)最好選擇大腦半球較發(fā)達(dá)的動(dòng)物，如貓、兔、狗和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物。以大鼠作為實(shí)驗(yàn)性腦出血對(duì)象的研究日益廣泛，方法也較為成熟。 血腫制備方法有三種： ① 開(kāi)顱后直視下注血； ② 按顱體表解剖標(biāo)志鉆孔注血； ③ 立體定向 、 定位注血 。 ? 應(yīng)用非肝素化自體血 ， 可觀察血液凝固過(guò)程中血管活性物質(zhì)釋放對(duì)腦循環(huán)及腦組織的影響 ，因而較接近臨床腦出血 ， 適合研究腦實(shí)質(zhì)出血的自然過(guò)程 、 病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn) 。 Kaufman等用 、 、 、 等不同注血量比較了一組兔腦出血的形態(tài)學(xué)和生存率 ， 結(jié)果 ， ， 動(dòng)物死亡率明顯增加 。 ? 大鼠腦尾殼核是腦內(nèi)最大的核團(tuán)，易于定位，而且尾殼核屬基底神經(jīng)節(jié)。將 25μl、 50μl及100μl新鮮未肝素化自體動(dòng)脈血液在100mmHg壓力下經(jīng)立體定向注入大鼠尾殼核。因此，以上大鼠腦注血量分別相當(dāng)于人腦的 20ml、40ml及 80ml的出血量，反應(yīng)臨床病情不同的嚴(yán)重程度。減慢注血速度可改善血腫形成質(zhì)量。用組織化學(xué)法觀察到，尾殼核血腫形成后，血腫周?chē)咸烟橇姿峄富盍α⒓疵黠@降低，酶損害區(qū)域與放射自顯影法顯示的低灌注區(qū)一致。 充脹一定時(shí)間后 ，使氣囊去充脹 ， 模擬外科血腫清除 。 ? 但自發(fā)性腦出血損害并非單一的占位效應(yīng) ， 還有來(lái)自血腫的血管活性物質(zhì)釋放所引起的作用 ， 如滲入腦組織的血漿成分可能引起炎癥性改變；蛋白水解酶和血紅蛋白氧化作用可能直接造成神經(jīng)組織損傷 ，以及抑制 Na+K+ATP酶活性 ， 催化中樞神經(jīng)系統(tǒng)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng) 。 ? 二 、 人工誘發(fā)腦出血模型 （ 一 ） 新生犬腦內(nèi)出血?jiǎng)游锬Ｐ? ? 胎齡 35周以下 ， 出生體重不足 1500g的新生兒顱內(nèi)出血發(fā)生率在 31%~55%之間 ， 若曾應(yīng)用過(guò)輔助呼吸 ， 出血發(fā)生率則高達(dá) 70%。 這些因素主要影響局部腦血流量 （ rCBF） ， 導(dǎo)致未成熟腦發(fā)生缺血和出血 。 這個(gè)區(qū)域有豐富的毛細(xì)血管 ，且缺乏神經(jīng)膠質(zhì)髓鞘或支持結(jié)構(gòu)保護(hù) ， 是未成熟腦對(duì) rCBF變化最敏感的分水嶺帶 。 股動(dòng)脈插管檢測(cè)血壓，體溫保持在 37℃ 左右。腦室出血后用放射自顯影法測(cè)定腦組織各處 rCBF， 同時(shí)作連續(xù)切片、 Nissl染色，觀察出血組織的形態(tài)。 該模型可適用于腦出血長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)研究 。 血管壁受損后引起滲血 ， 進(jìn)而血液逐漸積聚 ， 約 4h出血區(qū)融合成血腫 。 組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn) ， 開(kāi)始為散在的小片出血 ， 繼而融合成大片血腫區(qū) 。 ? 用微量膠原酶加肝素聯(lián)合注射誘導(dǎo)大鼠腦出血。該方法較單純用膠原酶注射所誘導(dǎo)的腦出血明顯提前。但出血以滲血為主，血腫區(qū)實(shí)為一彌漫性滲血區(qū)，且形成血腫的時(shí)間較長(zhǎng)，與臨床腦出血急性發(fā)病情況不同。 Chesney等通過(guò)該模型觀察了大鼠腦出血 70天對(duì)阿樸嗎啡的不對(duì)稱旋轉(zhuǎn)反應(yīng)和 8周后腦出血同側(cè)前爪的活動(dòng)情況，認(rèn)為該模型可導(dǎo)致大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)長(zhǎng)期缺損，為腦出血后神經(jīng)功能恢復(fù)的研究和藥物療效的評(píng)價(jià)提供了有用的方法。 將易產(chǎn)生卒中的 SHR和不產(chǎn)生卒中的 SHR分別以近親交配方式繁殖 ， 而培育出易卒中自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSP） 和抗卒中型自發(fā)性高血壓大鼠 （ SHRSR） 等 SHR亞種 。 ? 高血壓動(dòng)物由于已存在腦血管的病理變化，卒中發(fā)生后，腦的損害程度和不可逆程度都比正常動(dòng)物嚴(yán)重得多，而 SHR和腎性高血壓動(dòng)物又各具特點(diǎn)，互有差別。腎性高血壓動(dòng)物是一種通過(guò)腎素過(guò)度釋放的繼發(fā)性高血壓，其血流動(dòng)力學(xué)變化和血管的病理變化均與原發(fā)性高血壓相似，但避免了SHR遺傳性血管損害的影響，便于對(duì)照比較研究，而且可以選狗、貓、兔及大鼠等多種動(dòng)物復(fù)制。 ? CVS按有無(wú)癥狀分為癥狀性 CVS和無(wú)癥狀性 CVS， 其發(fā)生率分別為 20%~55%和60%~80%。血液成份對(duì) CVS的作用，一般認(rèn)為早期痙攣以 5羥色胺（ 5HT） 為主，晚期以氧合血紅蛋白（ OxyHb） 為主 。 該法主要包括： ① 經(jīng)眼眶入路刺破 MCA或 ICA或后交通動(dòng)脈 （ PcoA） ； ② 經(jīng)額顳下入路刺破 MCA， 或 ACA、ICA、 PcoA； ③ 經(jīng)顱底入路刺破基底動(dòng)脈 。 由于操作復(fù)雜 ， 損傷嚴(yán)重 ，死亡率高 ， 故該模型多用于急性實(shí)驗(yàn)研究 。盡管該法破壞性較少，操作簡(jiǎn)單，但刺破動(dòng)脈的出血量和出血速度仍難以控制，仍只適用于急性 CVS的研究。 ? 腦池注血法制作 CVS模型 ， 關(guān)鍵是使實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈周?chē)霈F(xiàn)持續(xù)凝血塊 ， 故注血后迅速將頭部置于頭低尾高位 ， 使血液不至于很快擴(kuò)散 。 視交叉池注血法更接近人腦動(dòng)脈瘤破裂引起的 SAH， 因人腦動(dòng)脈瘤大部分位于 Willis環(huán)的前半部分 。 ? 側(cè)裂池注血法：手術(shù)打開(kāi)側(cè)裂池，將新鮮的動(dòng)脈血或血管收縮劑置于側(cè)裂池內(nèi)。王政偉等經(jīng)翼點(diǎn)入路至視交叉池置管，注血后拔出導(dǎo)管，雖避免了枕大池注血法的不足，但由于顳肌下減壓，注血后不易造成急性顱壓增高。 通過(guò)解剖顯微鏡 、 顯微鏡電視錄像系統(tǒng)和血管造影 ， 動(dòng)態(tài)觀察血管痙攣情況 。 ? （ 四 ） 血液和腦脊液混合孵育后動(dòng)脈壁滴注法 ? 用孵育不同的腦脊液和新鮮動(dòng)物血混合液作用于離體或在體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ， 模仿不同時(shí)期 SAH或CVS。 該方法操作簡(jiǎn)單 ， 不需要 X線造影裝置 ， 通過(guò)手術(shù)顯微鏡即可觀察 CVS的過(guò)程 ， 此法不足之處是手術(shù)操作及空氣可致非被試因素的誤差 ， 對(duì)觀察單一因素致痙攣程度往往有一定的干擾 ， 因此對(duì)操作的技巧要求較嚴(yán)格 。 1990年 John等結(jié)扎狗一側(cè)椎動(dòng)脈，向枕大池注入易導(dǎo)致感染作用和易聚集的微粒 —— 葡萄糖、乳膠和血漿混合液， 72h后狗出現(xiàn)了嚴(yán)重的 CVS， 血管平均收縮 35%~40%。 ? （ 六 ） 顱外動(dòng)脈血管痙攣模型 ? 將自體新鮮未肝素化的動(dòng)脈血滴注于分離的股動(dòng)脈周?chē)?，持續(xù)觀察 4~6h， 以模仿急性期 CVS的變化。將內(nèi)裝血凝塊的硅彈性鞘囊放置于兔或狗的 MCA旁， 7天后出現(xiàn)血管影像及結(jié)構(gòu)學(xué)典型的血管痙攣。但由于顱外動(dòng)脈的解剖和生理與顱內(nèi)動(dòng)脈有一定的差異，故該模型不可能完全替代顱內(nèi) CVS動(dòng)物模型。 ? 二 、 癥狀性 CVS動(dòng)物模型的制作 ? 將新鮮自體動(dòng)脈血 4ml注入前額窩底蛛網(wǎng)膜下腔中，恒河猴只產(chǎn)生急性短暫性的 CVS， 未發(fā)生遲發(fā)性 CVS。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)視交叉池注血法，成功地在另一種猴身上部分制作無(wú)癥狀性 CVS動(dòng)物模型。經(jīng) 2周基底動(dòng)脈完全代償后，如無(wú)神經(jīng)功能障礙發(fā)生，則行枕大池“二次”注血， 4~5天后，成功地制作出兔癥狀性 CVS模型。但病理檢查發(fā)現(xiàn)， 11例中只有 2例有腦梗塞病灶。 該模型更接近人類(lèi) CVS后腦形態(tài)學(xué)的改變 ， 是較為理想的 CVS動(dòng)物模型之一 。 徹底結(jié)扎狗頸部血管