【正文】 任立群 155 ? 大鼠體重下降。 ? 第 2周時(shí)肝細(xì)胞變性、壞死，表現(xiàn)為小葉中心出現(xiàn)小片 狀肝細(xì)胞氣球樣變、脂肪變性、壞死和間質(zhì)輕微炎癥反應(yīng)， 鏡下 未見明顯纖維增生。血清 ALT、 AST活性升高，血清清蛋白含量減少，肝臟羥脯氨酸含量增加。 ? 第 4周為纖維增生改變，除肝細(xì)胞變性壞死外，肝內(nèi)開 始有纖維間隔形成。 ? 第 6周時(shí)為假小葉形成改變，肝臟纖維間隔進(jìn)一步增寬，肝組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，有假小葉形成，導(dǎo)致肝硬化。 結(jié) 果 CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 156 1． CCl4加高膽固醇和酒精飲食所致大鼠肝纖維化， 是目前國(guó)內(nèi)外常采用的動(dòng)物模型。該模型可靠， 復(fù)制時(shí)間較短，肝纖維化進(jìn)展穩(wěn)定，適合于肝纖 維化、肝硬化發(fā)生發(fā)展過程的動(dòng)態(tài)研究，是值得 應(yīng)用的一種模型。 2．如果動(dòng)物體重較前一次下降 30%以上，可停止注 射 CCl4 1次，以減少動(dòng)物死亡率。 模型評(píng)價(jià) CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 157 參與肝纖維化的細(xì)胞 ??? ? 肝星狀細(xì)胞 ? 庫普弗細(xì)胞 ? 內(nèi)皮細(xì)胞 ? Pit細(xì)胞 ? 肝細(xì)胞 2022/6/23 任立群 158 ? 形態(tài)學(xué)觀察：可使用各種膠原纖維染 色，并可做圖象分析； ? 血清膠原代謝指標(biāo)檢測(cè) 如 PIIIP、 HA、 FN等。 檢測(cè)指標(biāo) CCl4復(fù)合因素 模型 2022/6/23 任立群 159 三、苯巴比妥加速形成肝纖維化 2022/6/23 任立群 161 體重 100~150g Wistar大鼠。 大鼠飲用 38mg/100ml苯巴比妥 2周，待肝臟顯著 腫大后，以 CCl4原液灌胃，開始劑量為 體重，每 5天給予 1次，以后按體重調(diào)整 CCl4用量。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 操作步驟 苯巴比妥加速 CCl4模型 2022/6/23 任立群 162 給予 CCl4后 8~10周形成小結(jié)節(jié)型肝硬化，死亡率在 40%左右； 16~20周可復(fù)制肝硬化腹水模型，腹水成功率高達(dá) % ，但動(dòng)物死亡率較高，有時(shí)達(dá) %。 結(jié) 果 苯巴比妥加速 CCl4模型 2022/6/23 任立群 163 CCl4加苯巴比妥能加速肝纖維化形成，縮短 實(shí)驗(yàn)周期，是目前制備 CCl4肝纖維化動(dòng)物模型的 較好方法。 模型評(píng)價(jià) 動(dòng)物死亡率較高。 苯巴比妥加速 CCl4模型 2022/6/23 任立群 164 壞死后性肝硬化 2022/6/23 任立群 165 門脈性肝硬化 （假小葉） 靈長(zhǎng)類肝小葉 2022/6/23 任立群 166 壞死后肝硬化（假小葉） 2022/6/23 任立群 167 A：正常肝小葉 (Mallory染色 )； B， C：肝硬化 (Masson trichrome) 2022/6/23 任立群 168 第 九 節(jié) 胰腺炎動(dòng)物模型 2022/6/23 任立群 169 引起胰腺自身消化 其他酶反應(yīng) 引起胰蛋白酶被激活的原因： （ 1）膽汁反流； （ 2）胰液分泌亢進(jìn)； （ 3）病毒感染、外傷、藥物等造成腺泡的損傷。 膽汁和腸液 中的腸激酶 激活 發(fā)病機(jī)制 胰蛋白酶原 胰蛋白酶 2022/6/23 任立群 170 急性胰腺炎模型 急性胰腺炎的主要表現(xiàn)為胰腺呈炎 癥水腫、出血和壞死。 臨床表現(xiàn)為突然發(fā)作的上腹部劇烈疼 痛并可出現(xiàn)休克。 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 171 急性胰腺炎模型 (一 )牛磺膽酸鈉膽胰管逆行注射法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 172 ? 早期?；悄懰徕c可直接導(dǎo)致胰腺腺泡細(xì)胞或小導(dǎo)管壁的細(xì)胞溶解，進(jìn)一步的損害可能是膽鹽激活胰酶，如胰蛋白酶、磷脂酶等，產(chǎn)生腺泡自身消化。 ? 采用胰管逆行注射法誘發(fā)動(dòng)物急性胰腺炎，是根據(jù)胰管、膽管共同通路和膽汁反流理論，模擬人類膽源性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制 造模機(jī)制 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 173 ? 正常情況下主胰管的壓力高于總膽管，膽汁不會(huì)進(jìn)入胰管。但當(dāng)膽總管阻塞時(shí)，膽道內(nèi)的膽汁可被壓入主胰管，引起急性胰腺炎。 ? 大鼠的膽管和胰管為共同開口的管道，解剖上稱為膽胰管，從膽胰管上分出 6~8支胰管的分支進(jìn)入胰腺實(shí)質(zhì)。 生理解剖特點(diǎn) 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 174 1. 大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水 12h， 3%戊巴比妥鈉（ 40mg/kg）腹腔注射麻醉。 2. 上腹正中切口進(jìn)入腹腔，提起胃和十二指腸，顯露出胰腺，辨認(rèn)膽胰管走向，于肝門處用微型無損傷動(dòng)脈夾夾閉膽總管，以防藥液逆流進(jìn)入肝臟。 3. 用 4號(hào)鈍針頭朝胰腺方向穿刺十二指腸前壁，在其漿膜下潛行通過十二指腸乳頭穿入膽胰管，用手指固定針頭，緩慢（約 2min）注入 %或 5%牛磺膽酸鈉溶液 1ml/kg體重。 300~350gWistar或 SD大鼠 操作方法 %或 5%?；悄懰徕c 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 175 ，用 4號(hào)針頭緊貼膽胰管匯入十二指腸處，自腸外穿刺膽胰管。 1min。檢查無漏膽，逐層關(guān)腹。 。 15h處死動(dòng)物，解剖時(shí)肉眼觀察胰腺大體變化。取胰腺等組織， 10%中性緩沖甲醛液固定，常規(guī)制備石蠟切片，在光鏡下觀察胰腺等臟器的改變。取血測(cè)定血清淀粉酶水平。 操作方法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 176 1. 術(shù)后 15 h血清淀粉酶水平明顯升高。 2. 肉眼觀察，胰腺充血腫脹，包膜緊張，出現(xiàn)不同程度出血壞死，腹腔內(nèi)可見血性腹水，胰腺周圍大網(wǎng)膜和腸系膜出現(xiàn)淡黃色的皂化斑。胃腸道明顯水腫，腎臟明顯增大，顏色晦暗。 3. 光鏡檢查，于術(shù)后 15 h可見胰腺組織大片出血、凝固性壞死及脂肪壞死，壞死區(qū)之間有大量中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞浸潤(rùn)，表現(xiàn)為急性出血壞死性胰腺炎。 結(jié) 果 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 177 ? 本模型在病因、發(fā)病機(jī)制及胰腺病變等方面與人類急性胰腺炎相似，是目前被公認(rèn)的、比較常用的復(fù)制急性胰腺炎的方法。 ? 通過改變注射速度、注射持續(xù)時(shí)間、所用?；悄懰徕c的濃度或劑量可控制胰腺病變的程度，操作簡(jiǎn)單，造模成功率較高，重復(fù)性較好，適合于評(píng)價(jià)藥物對(duì)急性胰腺炎的防治效果。 ? 胰腺病變程度及動(dòng)物死亡率與所用牛磺膽酸鈉的濃度呈正相關(guān)，隨著所用?；悄懰徕c濃度的提高，胰腺損害逐漸加重。 ? 除胰管逆行注射牛磺膽酸鈉外，還可注射自體膽汁、膽汁酸、胰酶等誘發(fā)急性胰腺炎。 模型評(píng)價(jià) 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 178 急性胰腺炎模型 (一 ) ?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法 （二）?；悄懰徕c胰腺被膜下均勻注射法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 179 急性胰腺炎模型 (一 ) ?；悄懰徕c膽胰管逆行注射法 （三）大劑量 L精氨酸分次腹腔注射法 （二）?；悄懰徕c胰腺被膜下均勻注射法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 180 造模原理 ? 大劑量 L精氨酸能減少多胺的合成，抑制核酸和蛋白質(zhì)的合成，而胰腺細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成最為活躍，故極易受損。 ? 與氧自由基及細(xì)胞因子的作用有關(guān)。 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 181 ? 血尿淀粉酶、血清脂肪酶、淀粉同工酶等 ? 形態(tài)學(xué) ? 生化 ：注射后 12h，血清淀粉酶、脂肪酶明顯升高， 24h升高最明顯， 48h開始下降， 72h接近正常。 ? 大體檢查 ：注射后 12h，胰腺輕度充血水腫； 24h后充血水腫明顯， 48h胰腺出現(xiàn)壞死，胰腺周圍脂肪皂化，伴有血性腹水； 72h胰腺壞死明顯，胰腺組織變薄。 ? 光鏡檢查 ：注射后 12h，胰腺輕度充血水腫， 24h明顯充血， 48h胰腺實(shí)質(zhì)大片凝固性壞死，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，72h 胰腺組織模糊。 指標(biāo)檢測(cè) 結(jié) 果 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 182 ? 本模型制備方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性小，損傷小，病變?cè)诟鞑课惠^一致，與人類急性壞死性胰腺炎在病程及病理改變相似，是研究急性胰腺炎發(fā)病機(jī)制和防治措施較為理想的模型。 ? 腹腔注射后，胰腺病變逐漸加重，其特點(diǎn)是胰腺組織的壞死十分明顯，而出血少見。 ? L精氨酸的劑量十分關(guān)鍵，應(yīng)先摸索劑量。當(dāng)單次注射劑量大于 400mg/100g體重時(shí)，動(dòng)物多在數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡，而劑量小于 400mg/100g體重時(shí)，胰腺病變不明顯。 ? 用成年雄性昆明種小鼠分兩次腹腔注射 L精氨酸，也可復(fù)制急性壞死性胰腺炎。 模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 183 急性胰腺炎模型 (一 ) 牛磺膽酸鈉膽胰管逆行注射法 （三）大劑量 L精氨酸分次腹腔注射法 （二）?；悄懰徕c胰腺被膜下均勻注射法 （四） 超大劑量雨蛙素大鼠、小鼠模型 （五） 乙硫氨酸飲食法 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 184 急性胰腺炎 2022/6/23 任立群 187 第十節(jié) 膽石病動(dòng)物模型 2022/6/23 任立群 188 復(fù)習(xí) : 概念 結(jié)石 膽結(jié)石 膽管結(jié)石 膽囊結(jié)石 2022/6/23 任立群 189 膽紅素 + 葡萄糖醛酸 正常情況下 酯類 (非游離狀態(tài) ) 分解 游離膽紅素 鈣 + 析出形成結(jié)石 異常情況下 (在膽道系統(tǒng) ) 發(fā)病機(jī)制 細(xì)菌含有葡萄糖醛酸酶 2022/6/23 任立群 190 色素性膽石 膽固醇性結(jié)石 2022/6/23 任立群 191 混合性膽石 2022/6/23 任立群 192 復(fù)習(xí) : 概念 結(jié)石 基本類型 ： 色素性膽石 呈泥沙樣及砂粒狀；成分以膽紅素為 主，含少量膽固醇。 膽固醇性結(jié)石 黃色或黃白色，表面光滑，剖面呈放 射狀。常為單個(gè)，體積較大，歐美多見。 混合性膽石 呈多種顏色，我國(guó)最多見，結(jié)石多為多 面體。大小數(shù)目不等。 膽結(jié)石 膽管結(jié)石 膽囊結(jié)石 2022/6/23 任立群 193 依據(jù)人類膽石形成的主要誘發(fā)因素，如 膽汁理化狀態(tài)的改變、膽汁淤滯、膽道感 染、膽道異物、代謝因素等，采用單一或復(fù) 合因素造模。 膽石病模型 2022/6/23 任立群 194 一、食餌性膽色素結(jié)石模型 膽色素結(jié)石易發(fā)生于高碳水化合物膳食的人群 ， 與正常人相比患者膽汁的磷脂明顯增高 。 給豚鼠喂飼低蛋白飼料造成肝臟及膽汁中 β 葡萄糖醛酸酶活性增高 ， 促使結(jié)合膽紅素水解為游離膽紅素 ，與鈣離子結(jié)合形成不溶于水的膽紅素鈣鹽 ， 形成結(jié)石 。 膽石病模型 發(fā)病機(jī)制 2022/6/23 任立群 195 豚鼠每日喂飼含 2%酪蛋白 、 2%豬油 、 2%纖維素 、3%蔗糖 、 %膽酸及 %膽固醇飼料 。 一、食餌性膽色素結(jié)石模型 膽石病模型 操作方法 健康成年豚鼠 結(jié) 果 于喂養(yǎng) ~3個(gè)月膽囊 內(nèi) 形成團(tuán)塊或凝塊結(jié)石 。 膽石呈褐黃色或淡黃色 ， 膽汁混濁且色深 。 2022/6/23 任立群 196 ? 飼料配方中的膽酸和膽固醇是形成結(jié)石的關(guān)鍵。 ? 用體重 350~450 g雄性豚鼠，用含 50%淀粉、 15%葡萄糖、35%標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng) 20 d，造模成功率達(dá) 94%。 ? 用體重 140~160 g地鼠，用含 70%蔗糖、 %酪蛋白、5%麻油、 5%混合鹽、 10%微晶纖維素、 1%復(fù)合維生素和 %氯化膽堿的飼料喂養(yǎng) 6周，造模成功率為 80%。 一、食餌性膽色素結(jié)石模型 膽石病模型 注意事項(xiàng) 2022/6/23 任立群 197 二、感染性膽色素結(jié)石模型 感染性膽色素結(jié)石的發(fā)病與膽道感染及膽汁瘀積有明顯關(guān)系。感染是生石的首要因素，瘀積是生石的必要條件。 膽石病模型 2022/6/23 任立群 198 用一定量大腸桿菌注入膽總管引起感染時(shí) ， 大腸桿菌產(chǎn)生 β葡萄糖醛酸酶 ， 可使水溶性膽紅素水解為游離膽紅素 ， 后者與鈣結(jié)合形成不溶性膽紅素鈣 ， 在粘液物質(zhì)的凝聚下形成膽色素結(jié)