【正文】 2022/6/23 任立群 42 ① 應(yīng)激法 ② 幽門結(jié)扎法 ③ 藥物法 ④ 醋酸法 常用的方法 急性胃潰瘍動(dòng)物 模型 治療性給藥 —— 醋酸法復(fù)制的模型 預(yù)防性給藥 —— 其他模型 乙醇 組胺 促胃液素 腎上腺類固醇 水楊酸鹽 血清素 利血平 保泰松 …… 2022/6/23 任立群 43 ① 應(yīng)激法 ② 幽門結(jié)扎法 ③ 藥物法 ④ 醋酸法 常用的方法 急性胃潰瘍動(dòng)物 模型 陽(yáng)性對(duì)照藥： H2受體拮抗藥 —— 西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等 加強(qiáng)胃黏膜防御功能 —— 甘珀酸，果膠鉍，硫糖鋁 乙醇 組胺 促胃液素 腎上腺類固醇 水楊酸鹽 血清素 利血平 保泰松 …… 2022/6/23 任立群 44 研究抗胃潰瘍藥物 胃黏膜形態(tài)觀察 胃分泌試驗(yàn) 胃黏膜血流量測(cè)量 胃粘液測(cè)定 抗炎鎮(zhèn)痛試驗(yàn) 抑制幽門螺桿菌試驗(yàn)等 2022/6/23 任立群 45 一、應(yīng)激性胃潰瘍模型 應(yīng)激刺激 血管收縮 胃運(yùn)動(dòng)亢進(jìn) 副交感神經(jīng) 垂體 腎 上腺系統(tǒng)興奮性 ↑ 應(yīng)激性潰瘍 胃酸、胃蛋白酶和 胃泌素分泌 ↑ 胃黏膜缺血、缺氧和 抵抗力 ↓ 交感神經(jīng)興奮性 ↑ 應(yīng)激性胃潰瘍模型 造模機(jī)制 2022/6/23 任立群 47 應(yīng)激刺激有那些 ? 外傷 休克 感染 過(guò)冷、過(guò)熱 心理創(chuàng)傷 饑餓 水浸 束縛 應(yīng)激性胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 48 體重 160~180g Wistar大鼠，雌雄不限。 多用雌性。 大鼠固定鋼板或束縛籠；恒溫水浴裝置 。 應(yīng)激性胃潰瘍模型 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 器 材 2022/6/23 任立群 49 應(yīng)激束縛籠 應(yīng)激性胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 50 ? 禁食（不禁水） 24h，醚麻，將動(dòng)物固定 (籠或固定器 )。 ? 待其清醒后垂直浸于 18~20℃ 的恒溫水浴槽中，水面浸至劍突水平。 ? 水浸泡 7h后取出，處死動(dòng)物，立即開(kāi)腹檢查。 ? 胃的固定及處理。 應(yīng)激性胃潰瘍模型 操作方法 2022/6/23 任立群 51 胃的固定及檢查 2022/6/23 任立群 52 大鼠胃內(nèi)、外面觀 2022/6/23 任立群 53 ? 禁食（不禁水） 24h，醚麻，將動(dòng)物固定 (籠或固定器 )。 ? 待其清醒后垂直浸于 18~20℃ 的恒溫水浴槽中，水面浸至劍突水平。 ? 水浸泡 7h后取出，處死動(dòng)物，立即開(kāi)腹檢查。 ? 胃的固定及處理。 ? 用 10倍解剖顯微鏡測(cè)量每一個(gè)黏膜損傷的長(zhǎng)度。 ? 給藥方法 動(dòng)物預(yù)先灌胃給予受試藥 4d，末次給藥后 1h進(jìn)行水浸應(yīng)激試驗(yàn)。水浸應(yīng)激 7h后處死動(dòng)物，測(cè)量潰瘍指數(shù)。 應(yīng)激性胃潰瘍模型 操作方法 2022/6/23 任立群 54 水浸 3h，胃黏膜即發(fā)生損傷； 7~8h胃黏膜可出現(xiàn)多發(fā)性、出血性糜爛小點(diǎn)； 20h胃黏膜病變相當(dāng)嚴(yán)重，但潰瘍改變不超過(guò)粘膜肌層，且以 腺胃 （含胃體和胃竇）為重。 應(yīng)激性潰瘍?cè)谙傥覆垦匮茏咝蟹植?，表面覆蓋凝血塊，去除凝血后可見(jiàn)深褐色條索狀潰瘍。 應(yīng)激性胃潰瘍模型 結(jié) 果 2022/6/23 任立群 55 以長(zhǎng)度、寬度、點(diǎn)數(shù) “ 記分 ” 以淤血和長(zhǎng)度記分 潰瘍程度的評(píng)定 ： 應(yīng)激性胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 56 模型組潰瘍指數(shù)－給藥組潰瘍指數(shù) 潰瘍抑制百分率＝ 100% 模型組潰瘍指數(shù) ２ .根據(jù)潰瘍指數(shù)推算： 發(fā)生潰瘍的動(dòng)物數(shù) 潰瘍發(fā)生百分率＝ 100% 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù) 應(yīng)激性胃潰瘍模型 潰瘍程度的評(píng)定 2022/6/23 任立群 57 1. 水浸應(yīng)激性胃潰瘍發(fā)生率可達(dá) 100%，重復(fù)性 較好。中樞抑制劑、抗膽堿藥、制酸藥對(duì)其有明顯 對(duì)抗作用。盡管胃病變與人類消化性潰瘍不同，但 由于方法簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，迄今仍是研究抗?jié)兯? 物的常用模型。 2. 水溫應(yīng)保持恒定。 3. 動(dòng)物禁食期間，如自食糞便會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 應(yīng)激性胃潰瘍模型 模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) 2022/6/23 任立群 58 應(yīng)激性胃潰瘍模型 模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) ，松緊度合適。 。 30~60 min給予。 ? 雷尼替丁 g/kg 體重 ? 西咪替丁（甲氰咪胍） g/kg體重 2022/6/23 任立群 59 消化性潰瘍病因及發(fā)病機(jī)制 — ROBBINS 《 BASIC PATHOLOGY》 There are two key facts about pathogenesis in peptic ulcer. One is mucosal exposure to gastric acid and pepsin. Second, there is a very strong causal association with Helicobacter pylori infection. 2022/6/23 任立群 60 消化性潰瘍病因及發(fā)病機(jī)制 胃酸對(duì)胃黏膜起腐蝕作用 胃蛋白酶在酸性環(huán)境中活性增強(qiáng)，對(duì)胃黏膜產(chǎn)生消化作用 （ HP） HP可通過(guò)釋放尿素酶分解尿素產(chǎn)生氨、分泌空泡形成細(xì)胞毒素、磷脂酶等，損傷上皮細(xì)胞產(chǎn)生炎癥，長(zhǎng)期作用可導(dǎo)致消化性潰瘍的形成。 2022/6/23 任立群 61 二、幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 62 幽門結(jié)扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度 胃液在胃中潴留，損傷胃黏膜造成胃潰瘍。 成年大鼠，雄雌均可。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 造模機(jī)制 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2022/6/23 任立群 63 3天。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食 (24h)不禁水。 ，切口約2~3cm。在左側(cè)肋緣部位用手指輕輕上推暴露胃。 扎，注意勿將鄰近的其他器官、血管結(jié)扎。同時(shí)經(jīng)十二指腸給予受試藥?？p合腹壁切口，用紗布包扎切口。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 操作方法 2022/6/23 任立群 64 4. 幽門結(jié)扎后，停止供水供食，術(shù)后 18h處死大鼠，取胃固定、剖檢。 5. 沿胃大彎剪開(kāi)胃壁，洗凈胃內(nèi)容物，將胃壁展開(kāi)，胃黏膜面向上用大頭釘固定在蠟板上。 6. 用肉眼或放大鏡觀察胃黏膜面，記錄每只動(dòng)物產(chǎn)生的潰瘍數(shù)、潰瘍程度、潰瘍面積（或潰瘍指數(shù)）及病變的情況。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 65 病變程度的評(píng)價(jià) 1— 潰瘍面積 通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑和橫徑 S=π （ d1/2）（ d2/2） 式中 S為潰瘍面積， d1為通過(guò)潰瘍中心量取的最大縱徑， d2為通過(guò)潰瘍中心量取的最大橫徑。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 66 病變程度的評(píng)價(jià) 2— 潰瘍指數(shù) 可計(jì)數(shù) 前胃 部潰瘍面積，以其總和作為潰瘍指數(shù)。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 67 病變程度的評(píng)價(jià) 3— 潰瘍程度（ Okabe法） 在解剖顯微鏡下測(cè)量潰瘍面積，將每只 鼠潰瘍面積的總合分為 5個(gè)等級(jí)作為潰瘍指數(shù)： 潰瘍面積 (mm2)： 112 1325 2637 3850 ≥50mm 2或穿孔 潰瘍指數(shù) : 1級(jí) 2級(jí) 3級(jí) 4級(jí) 5級(jí) 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 68 模型組潰瘍指數(shù)－給藥組潰瘍指數(shù) 潰瘍抑制百分率＝ 100% 模型組潰瘍指數(shù) 發(fā)生潰瘍的動(dòng)物數(shù) 潰瘍發(fā)生百分率＝ 100% 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù) 病變程度的評(píng)價(jià) 3— 潰瘍程度（ Okabe法） 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 69 形成的潰瘍主要發(fā)生在對(duì)胃液抵抗力較弱的前胃部（瘤胃），多為圓形或橢圓形。 但病變較表淺，屬于胃黏膜急性出血性糜爛，與人類胃潰瘍的典型病變差距較大。 結(jié) 果 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 70 Shay等創(chuàng)立的模型，方法簡(jiǎn)單，潰瘍發(fā)生快，發(fā)生率達(dá) 97%，主要用于觀察藥物對(duì)潰瘍形成的預(yù)防作用。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) 48~72h。一般經(jīng)驗(yàn)是： 體重小于 180g，禁食 24~48h，這樣動(dòng)物可以耐受手術(shù)； 體重超過(guò) 180g，禁食 48~72h，可提高潰瘍發(fā)生率。 。 2022/6/23 任立群 71 。 幽門結(jié)扎法胃潰瘍模型 模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) ，動(dòng)物應(yīng)預(yù)先給 藥或同時(shí)給藥，若粗制劑可采用灌胃給藥，應(yīng)確 認(rèn)胃內(nèi)已排空后方能結(jié)扎幽門。粗制劑可在幽門 結(jié)扎的同時(shí)采用十二指腸內(nèi)注入給藥較好。 :灌胃給予 西咪替?。浊柽潆遥? 雷尼替丁 2022/6/23 任立群 72 大鼠胃的解剖及幽門結(jié)扎法所致胃潰瘍圖 2022/6/23 任立群 73 2022/6/23 任立群 74 三、乙醇誘發(fā)胃損傷模型 2022/6/23 任立群 75 、氨基己糖含量， 降低胃黏膜血流量，減小胃黏膜跨膜電位 差，破壞主細(xì)胞減少粘液分泌，以及引起 胃黏膜微循環(huán)障礙等，從而破壞了胃黏膜 屏障的完整性導(dǎo)致潰瘍。 2. 細(xì)胞內(nèi)鈣超載和細(xì)胞凋亡。 乙醇法致急性胃潰瘍 造模機(jī)制 2022/6/23 任立群 76 成年大鼠，性別不拘。 大鼠禁食 24h，不禁水。最后 1次給予受試 藥后，灌服無(wú)水乙醇 1ml/只。 1h后開(kāi)腹取胃， 固定檢查，以潰瘍指數(shù)進(jìn)行組間比較。 乙醇法致急性胃潰瘍 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 操作步驟 2022/6/23 任立群 77 15min后即可造成明顯的胃黏膜損傷， 且時(shí)間越長(zhǎng)損傷越嚴(yán)重。損傷主要表現(xiàn)為 粘膜充血、水腫、細(xì)胞壞死，伴有糜爛、 出血及縱行的條索狀出血壞死。 乙醇法致急性胃潰瘍 結(jié) 果 2022/6/23 任立群 78 可以胃黏膜損傷長(zhǎng)度的總和作為潰瘍指數(shù)。 也可參照下表進(jìn)行評(píng)分，以評(píng)分總和確定 損傷程度。 粘膜損傷長(zhǎng)度 1mm 1～ 2mm 2～ 3mm 3～ 4mm 評(píng) 分 1 2 3 4 乙醇法致急性胃潰瘍 結(jié) 果 2022/6/23 任立群 79 ? 乙醇性胃潰瘍的程度與乙醇的濃度成正比，一般乙醇濃度 40％以上可引起胃黏膜明顯損傷， 80％以上時(shí)出現(xiàn)明顯破潰、壞死。因此，制備胃潰瘍模型時(shí)多采用 75％以上濃度的乙醇或無(wú)水乙醇。 ? 也可用鹽酸 乙醇 (50%乙醇 ／ L鹽酸 )給大鼠灌胃 (1ml/100mg)造成潰瘍，稱為 酸乙醇性潰瘍 。 乙醇法致急性胃潰瘍 注意事項(xiàng) 2022/6/23 任立群 80 四、利血平誘發(fā)胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 81 誘發(fā)潰瘍的主要機(jī)制包括： ①減弱腎上腺素能神經(jīng)功能，迷走神經(jīng)興奮性相對(duì)增高，使胃酸分泌增加，胃平滑肌