【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 及血管平滑肌收縮增強(qiáng)； ②耗竭中樞及外周神經(jīng)以及其它組織的多巴胺，使“ 多巴胺細(xì)胞保護(hù)作用減弱 ” ； ③減少胃黏膜中 NO的含量，減弱胃黏膜的抗損傷能力。 利血平法致急性胃潰瘍 造模機(jī)制 利血平是外周交感神經(jīng)阻滯藥 2022/6/23 任立群 82 體重 160~180g的 Wistar大鼠，雄雌各半。 禁食不禁水 24h后，灌胃給予受試藥后 1h, 方法 1. 皮下注射 10mg/kg體重利血平 方法 2. 腹腔注射 5mg/kg體重利血平 18h后頸椎脫位處死動(dòng)物，開腹取胃。 胃的固定和腺胃部潰瘍計(jì)數(shù)方法同水浸應(yīng)激法。 利血平法致急性胃潰瘍 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 操作方法 2022/6/23 任立群 83 損傷主要發(fā)生在腺胃部，可呈條索狀出 血點(diǎn)、瘀血斑或糜爛灶。 利血平法致急性胃潰瘍 結(jié) 果 2022/6/23 任立群 84 １ .利血平的劑量不宜過大，否則動(dòng)物容易死亡。 ２ .處死動(dòng)物最佳取材時(shí)間可根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果確定。 、禁食時(shí)間、利血平劑量、室溫等因素有關(guān)，應(yīng)盡量控制條件。 H2受體拮抗劑 （灌胃） 雷尼替丁 g/kg體重 西咪替丁（甲氰咪胍） g/kg體重 利血平法致急性胃潰瘍 注意事項(xiàng) 2022/6/23 任立群 85 五、吲哚美辛誘發(fā)胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 86 ? 吲哚美辛，又名消炎痛，是一種非甾體抗炎藥。大劑量吲哚美辛顯著抑制環(huán)氧合酶活性，致使胃黏膜防御因素減弱而形成潰瘍。 ? 環(huán)氧合酶是花生四烯酸合成前列腺素的關(guān)鍵限速酶。環(huán)氧合酶受抑制，可使胃黏膜生理性前列腺素 E合成減少。 ? 前列腺素 E通過增加粘液和碳酸氫鹽分泌、促進(jìn)粘膜血流增加、細(xì)胞保護(hù)等機(jī)制，在維持胃黏膜防御和修復(fù)功能中起重要作用。 造模機(jī)制 吲哚美辛致急性胃潰瘍 吲哚美辛 環(huán)氧合酶 前列腺素 E 2022/6/23 任立群 87 體重 160~180 g大鼠，雌雄各半。 ? 大鼠禁食不禁水 24h，皮下注射吲哚美辛 20~30mg/kg體重； 7h后處死動(dòng)物，觀察潰瘍情況并測(cè)量潰瘍指數(shù)。 ? 陽(yáng)性對(duì)照藥可選雷尼替丁，灌胃給予。 ? 吲哚美辛粉用 5%碳酸氫鈉溶液配成 10 mg/ml，再用蒸餾水稀釋成 2mg/ml。此溶液為等張溶液， pH值 ~。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 操作方法 吲哚美辛致急性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 88 潰瘍主要位于腺胃部，表現(xiàn)為與長(zhǎng)軸 平行的線狀、點(diǎn)狀瘀血點(diǎn)。 結(jié) 果 吲哚美辛致急性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 89 ? 本模型胃潰瘍發(fā)生率高，重復(fù)性好，缺點(diǎn)是潰瘍比較表淺。 ? 胃損傷程度與動(dòng)物體質(zhì)、禁食時(shí)間、吲哚美辛劑量、給予后的時(shí)間等有關(guān)。 ? 觀察藥物的抗?jié)冃Ч话銘?yīng)預(yù)先給藥，給藥后30~60 min再給吲哚美辛。 ? 可采用阿司匹林口服或腹腔注射（ 150 mg/kg體重）復(fù)制類似的胃潰瘍模型。 模型評(píng)價(jià)與注意事項(xiàng) 吲哚美辛致急性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 90 第 四 節(jié) 慢性胃潰瘍動(dòng)物模型 2022/6/23 任立群 91 一、醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 92 成年大鼠，體重 180~200g，性別不限。 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 造模機(jī)制 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 在大鼠胃漿膜面浸漬或在漿膜下注射一定量的醋酸，由于醋酸的腐蝕作用使胃黏膜損傷而造成潰瘍。 醋酸浸漬法 2022/6/23 任立群 93 禁食不禁水 24h，醚麻，開腹暴露胃。 醋酸浸蝕的兩種方法： 1. 醋酸注射法 2. 醋酸漿膜面浸漬法 操作步驟 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 94 慢性胃潰瘍動(dòng)物 模型 操作步驟 1. 醋酸注射法 （ 1）用小號(hào)注射針在漿膜下注入 30%醋酸 ml，緩慢拔出針頭，勿使醋酸溢出。用生 理鹽水清洗胃壁創(chuàng)面，胃復(fù)位，關(guān)腹。 （ 2）術(shù)后 24h給予受試藥。每天 1次，連續(xù)給予 10d。 （ 3）術(shù)后 11處死動(dòng)物，取胃、固定、剖檢。 （ 4）觀察并測(cè)量潰瘍面積。 2022/6/23 任立群 95 慢性胃潰瘍動(dòng)物 模型 操作步驟 2. 醋酸漿膜面浸漬法 （ 1）用直徑 滿冰醋酸，貼在腺胃部前壁漿膜面30s，同法重復(fù) 1次。 也可在腺胃部前壁的竇體交界處將內(nèi)徑 5mm、長(zhǎng) 30mm的玻璃管垂直放置于漿膜面上，向管腔內(nèi)加入冰醋酸，使其接觸漿膜面 。 （ 2）以生理鹽水沖洗掉冰醋酸，胃復(fù)位，關(guān)腹。 2022/6/23 任立群 96 術(shù)后 3~5天，可形成界限清楚的潰瘍。潰瘍一 般呈圓形、橢圓形或不規(guī)則形，中心凹陷，四周 微隆起，密布毛細(xì)血管。 一般術(shù)后第 5日，潰瘍形成最為嚴(yán)重，以后緩 慢愈合，但病變有反復(fù)。 已愈合的潰瘍，周圍稍有隆起，表面紅潤(rùn)， 可見愈合的痕跡。 結(jié) 果 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 97 模型評(píng)價(jià) ? 醋酸誘發(fā)的胃潰瘍是一種慢性潰瘍模型，其特點(diǎn)是潰瘍的形狀、部位、肉眼及組織病理學(xué)形態(tài)、愈合過程均類似人類慢性胃潰瘍。 ? 潰瘍發(fā)生率高達(dá) 100%，且潰瘍持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，自愈需 60~100d，故可在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)觀察藥物的治療效果，因此，該模型是評(píng)價(jià)藥物對(duì)潰瘍愈合作用較為理想的模型。 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 98 注意事項(xiàng) ? 操作過程應(yīng)嚴(yán)格消毒，籠具也應(yīng)消毒，以免術(shù)后感染，影響藥物的觀察治療。 ? 注射部位要求一致，必須將醋酸注入到漿膜下，發(fā)現(xiàn)有誤者應(yīng)棄去，以免影響結(jié)果。 ? 潰瘍?cè)畹拇笮∨c注射醋酸的量有關(guān)，醋酸的量要準(zhǔn)確，否則形成的潰瘍差異較大。 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 大鼠慢性胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 101 ? 形態(tài)觀察：甲醛固定后測(cè)量潰瘍面積，或用微量注射器注水測(cè)體積； ? 與干預(yù)措施有關(guān)的檢測(cè)：胃酸測(cè)定、胃蛋白酶消化力測(cè)定等。 ? 與屏障功能有關(guān)的指標(biāo)：胃黏膜屏障功能測(cè)定、胃粘液測(cè)定等。 ? 與潰瘍愈合質(zhì)量有關(guān)的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)：前列腺素、表皮生長(zhǎng)因子、 aFGF水平及受體表達(dá)，熱休克蛋白表達(dá)及免疫功能等。 檢測(cè)指標(biāo) 醋酸誘發(fā)慢性胃潰瘍 2022/6/23 任立群 102 二、幽門螺桿菌感染性胃潰瘍模型 2022/6/23 任立群 103 ? Hp含有大量尿素酶，能迅速分解食物中尿素 并 產(chǎn) 生氨，氨中和胃酸使局部 pH值增高，使細(xì)菌不被 胃酸殺滅。 ? Hp能分泌產(chǎn)生細(xì)胞毒素，引起細(xì)胞損傷，使細(xì)胞 空泡化，導(dǎo)致胃黏膜完整性破壞，從而形成胃炎及 胃、十二指腸潰瘍。 幽門螺桿菌胃潰瘍 造模機(jī)制 2022/6/23 任立群 104 ? 單純 給動(dòng)物灌服一定量的 Hp菌液，只能在感染動(dòng)物的胃黏膜造成炎癥反應(yīng)，很少引起胃黏膜破損、潰瘍。因此，多在動(dòng)物 胃潰瘍 模型的基礎(chǔ)上，使動(dòng)物 感染 Hp。 ? 常用 動(dòng)物有小鼠、大鼠、沙土鼠等。 幽門螺桿菌胃潰瘍 2022/6/23 任立群 105 ? BALB/c小鼠： 在胃大彎竇部粘膜掛上帶有 腐蝕性藥物 的棉線，造成胃潰瘍，在此基礎(chǔ)上感染幽門螺桿菌，加重病變程度。 ? SD大鼠 ：先用 熱烙法 復(fù)制胃潰瘍，在此基礎(chǔ)上灌胃給予Hp菌液。 ? 沙土鼠 ： 動(dòng)物禁食禁水 1 d，第 2天灌胃給予 50%乙醇 ml。之后繼續(xù)禁食禁水 ，第 2天灌胃給予 HP菌液 上、下午各 1次，隔日上午再灌胃給予菌液 1次。 操作方法 幽門螺桿菌胃潰瘍 2022/6/23 任立群 106 ? Hp定植檢查 感染后第 1和 24周感染率均達(dá)100%。 ? 胃黏膜肉眼觀察 感染后第 8周未見胃黏膜糜爛、出血和潰瘍等病變。感染后第 1 24周，約 37%動(dòng)物可見胃黏膜明顯出血、慢性活動(dòng)性胃炎及潰瘍病變。 ? 組織病理學(xué)檢查 感染后第 4周胃竇和幽門的黏膜層及固有層出現(xiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，黏膜下層血管擴(kuò)張、充血，腺體萎縮，伴有上皮細(xì)胞變性、壞死 。 隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)加重，可形成淋巴濾泡。高倍鏡下，在胃竇部、幽門部及胃體部黏膜表層上皮細(xì)胞核胃腺窩中，可見大量 Hp。 結(jié) 果 幽門螺桿菌胃潰瘍 2022/6/23 任立群 107 ? 應(yīng)注意 Hp菌的活性和濃度。由于多次灌胃給予， 應(yīng)避免其他細(xì)菌感染或抑制 Hp定植。 ? 有人主張使用清潔級(jí)或 SPF級(jí)動(dòng)物，以防止胃內(nèi) 雜菌形成優(yōu)勢(shì)菌而掩蓋了 Hp 菌生長(zhǎng)。 ? 為便于資料間的比較，最好使用目前國(guó)際公認(rèn)的 Hp NCTC 11637菌株。 注意事項(xiàng) BALB/c小鼠 ， SD大鼠 幽門螺桿菌胃潰瘍 2022/6/23 任立群 108 ? 蒙古沙土鼠胃內(nèi) Hp值較人高 ，定居的雜菌較多， Hp不易定植 。本模型先用一定量乙醇造成胃黏膜損傷，更有利于 Hp定植和胃病變形成。 ? Cag A是 Hp 很重要的毒力因子，故本模型選用 Cag A 陽(yáng)性 Hp 。 ? 為減少沙土鼠胃內(nèi)雜菌形成優(yōu)勢(shì)菌，有人主張用清潔級(jí)或 SPF沙土鼠。 注意事項(xiàng) 沙土 鼠 幽門螺桿菌胃潰瘍 2022/6/23 任立群 109 第 五 節(jié) 急性和慢性肝損傷動(dòng)物模型 2022/6/23 任立群 110 常用的肝損傷物質(zhì) ? 四氯化碳 ? D半乳糖胺 ? 硫代乙酰胺 ? 刀豆蛋白 A 2022/6/23 任立群 111 一、四氯化碳急性肝損傷模型 CCl4在肝內(nèi)經(jīng) NADPH和肝微粒體細(xì)胞色素 P450混合功 能氧化酶的作用，生成活潑的 三氯甲基自由基 （ CCl3?）和 氯 自由基 （ Cl3?） 。 ? 這些自由基能與細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜上大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，引起富含不飽和脂肪酸的生物膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的破壞，肝細(xì)胞損傷壞死； ? 三氯甲基自由基還能抑制細(xì)胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性，使 Ca2+內(nèi)流增加，從而引起細(xì)胞中毒死亡； ? 三氯甲基自由基能與蛋白質(zhì)形成共價(jià)鍵，損害線粒體使NADH及 ATP在肝內(nèi)生成減少，脂肪酸氧化受抑制，影響肝臟能量生成障礙，并使三酰甘油和脂肪酸在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積。 造模機(jī)制 CCl4急性肝損傷 模型 常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 CC l4致急性肝損傷所需劑量和用法 動(dòng)物 (CCl4)劑量 用法 形成肝損傷 (ml/kg體重 ) 所需時(shí)間 % 10 頸背部皮下注射 1次 約 24h 小鼠 % 10 腹腔注射 1次 約 24h % 10 于 7日各灌胃 1次 末次后 12~24h 25% 5 皮下注射 1次 1~8d 大鼠 25% 5 皮下注射 2次 ,間隔 4日 1~8d 15% 1 每隔 3日灌胃 1次，共 3次 末次后 16h 家兔 50% 皮下注射 1次 ，共 3次 4~7d 33% 隔日灌胃 1次，共 2次 7d CCl4急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 114 1. 根據(jù)所用 CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同 ； 2. 一般在給予 CCl4后 16~24 h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ AST）活性升高，并能反映肝損傷的程度 ； 3. 形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。 結(jié) 果 CCl4急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 115 1. 根據(jù)所用 CCl4劑量和時(shí)間的不同，肝臟的損傷程度不同 ； 2. 一般在給予 CCl4后 16~24 h血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ ALT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ AST）活性升高，并能反映肝損傷的程度 ； 3. 形態(tài)學(xué)上表現(xiàn)為 肝小葉中央?yún)^(qū)壞死和脂肪變性。 結(jié) 果 CCl4急性肝損傷 模型 2022/6/23 任立群 117 2022/6/23 任立群 118 CCl4急