【正文】 激為主 ， 為操作式條件反射 ， 適用于較高等動物 ，如猴 、 狗 。 ? 三 、 神經(jīng)源性及應激性高血壓動物模型 ? 1． 基本原理 長期的應急反應造成交感神經(jīng)系統(tǒng)張力增高和垂體 腎上腺素軸系統(tǒng)過度分泌 ， 從而引起全身小血管收縮 ， 最終導致高血壓 。 ? 2． 實驗方法 取 120~150g大鼠 ， 麻醉后皮膚消毒 ， 沿脊椎中線切開皮膚 ， 在一側(cè)季肋下 ~2cm和距脊椎 1cm處用小血管鉗分開肌肉 ， 用兩指從腹下部將腎臟自創(chuàng)口中擠出 ， 將腎臟與周圍組織剝離 ， 將自制的雙層乳膠薄膜剪成 “ X”形 ， 沿腎門將腎臟交叉包扎 ， 然后在對側(cè)切開取出另一側(cè)腎 ，分離后切除 ， 分別縫合肌肉和皮膚創(chuàng)口 。 ? 二 、 腎外包扎性高血壓模型 ? 1． 基本原理 與腎動脈狹窄性高血壓模型相同 。選用一定直徑的銀夾或銀環(huán)套在腎動脈上造成腎動脈狹窄，如為單腎動脈狹窄型高血壓（ 1KGH）， 則在間隔 10~12天后將另一側(cè)腎摘除；雙腎動脈狹窄型高血壓（ 2KGH）， 將另一側(cè)腎動脈做同樣的處理。 ? 2．實驗方法 成年健康大鼠（兔或狗），體重 150~200g， 性別不限。 一、腎動脈狹窄性高血壓模型 ? 1．基本原理 Fahr認為，人腎硬化性高血壓可能是由于腎供血不足引起的， Goldblatt用犬證實了這一假說，并首次介紹了單腎性Goldblatt型高血壓（ 1KGH） 和雙腎性高血壓（ 2KGH） 模型。全身小動脈的痙攣與遺傳、精神刺激、應激、腎臟缺血、腎上腺皮質(zhì)的作用及鈉的作用等諸多因素有關，目前高血壓動物模型的復制多以不同角度模擬高血壓這些易患因素而形成，動物多選用大鼠、犬、貓、家兔、猴。 ? 4級 動脈內(nèi)膜粥樣斑塊幾乎堵塞整個管腔 。 ? 2級 動脈內(nèi)膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/2。 ? 動脈內(nèi)膜有輕度脂質(zhì)浸潤 。 也可將左心室 、 右心室及室間隔三部分心肌分別固定各橫切成 3塊 ， 切片染色后檢查并計算其有粥樣斑塊的小動脈數(shù)及其等級 。 ? 為便于比較分析病變的分布 ， 也可將主動脈分成主動脈弓 、 胸主動脈上段 （ 第 3~6肋 ） 、 胸主動脈下段 （ 第 6~10肋 ）及腹主動脈 ， 進行切片染色 ， 顯微鏡觀察比較 。 ? Ⅳ 級：動脈粥樣硬化病變面積 34%~50%（ 1/2） 。 ? Ⅱ 級：動脈粥樣硬化病變面積 6%~15%（ 1/6） 。 然后將主動脈貼于玻璃板上 ， 用厚度均勻的白紙描繪出主動脈壁及粥樣斑塊的圖形 ， 把斑塊部分剪下來 ， 再將粥樣斑塊及動脈壁的圖形分別稱重或計算面積 ， 即可計算出斑塊重量或面積占主動脈管壁總重量或總面積的百分比 。 ? 4級 動脈表面幾乎全為融合的粥樣斑塊所覆蓋 。 ? 2級 粥樣斑塊面積大于 3mm2。 ? 內(nèi)膜有廣泛的奶油色或乳白色變化 ， 但無凸出表面的粥樣斑塊 。 染色后粥樣斑塊呈紅色 。然后將動脈等距分為 5點，分測各點厚度，計算比值，取平均數(shù)計算內(nèi)膜與中膜的厚度比值。 ? 3．主動脈內(nèi)膜 /中膜（ I/M） 厚度比值測定 從主動脈弓分叉處取材長約 3~4mm， 用 10%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋和切片， HE染色，采用。 ? 三 、 評價指標 ? 1． TC的測定 采用中華醫(yī)學會檢驗學推薦酶法 （ CHODPAP） 。另取主動脈根部約 1 1mm2大小動脈組織迅速用 4%戊二醛（用 mmol/L磷酸緩沖液配制，濃度 ， pH=） 固定，留做透射電鏡標本。 ? 4． 自耳緣靜脈注射空氣 20ml， 氣栓處死。 ? 2． 用高脂飼料喂養(yǎng) 3周后 ， 改為 15%雞蛋黃 +5%豬大油 +80%普通飼料 ， 不再加膽固醇 ， 繼續(xù)喂養(yǎng) 3周 ， 至此兔動脈粥樣硬化模型建立完成 。 ? 二 、 實驗方法 ? 1． 實驗前 ， 以基礎飼料適應性喂養(yǎng)一周 ， 穩(wěn)定血脂水平和代謝狀況后 ， 隨機分組 。 高脂飼料配方： 15%雞蛋黃粉 +5%豬大油+%膽固醇 +普通飼料 %。 ? 一 、 實驗準備 ? 現(xiàn)以純種新西蘭白兔為例介紹其具體實驗方法 。 ? 3． 大鼠誘發(fā)模型 喂服 l%~4%膽固醇 、 10%豬油 、 %甲基硫氧嘧啶 、 86%~89%基礎飼料 ，7~10天 。 ? 1． 小型豬誘發(fā)模型 Gottigen系小型豬較為理想 ， 用含 1%~2%的高脂食物喂飼 6個月 ， 即可復制出動脈粥樣硬化模型 。 第二節(jié) 動脈粥樣硬化模型 ? 在動物飼料中加入過量的膽固醇和脂肪 ， 飼養(yǎng)一定時間后 ， 其主動脈及冠狀動脈內(nèi)逐漸形成粥樣硬化斑塊 。 ? ? 四 、 優(yōu)缺點 ? 該動物模型不需要特殊設備 ， 操作簡單 ， 成功率高 ， 重復性好 ， 易于控制 ，可用于急性實驗 。 ? 2． 形態(tài)學指標 光鏡觀察軟腦膜和腦內(nèi)微血管擴張 ， 紅細胞聚集成團并形成微小血栓 。 ? 三 、 評價指標 ? 1． 血液流變學 全血黏度 、 血漿比黏度 、 紅細胞聚集率增高 ， 紅細胞變形能力減低 。 ? 注意事項：每次注射時間不能少于10min， 否則動物會因循環(huán)容量驟增而發(fā)生心力衰竭死亡 ， 長期注射 HMWD容易引起動物嚴重貧血 、 血尿和腎功能衰竭而死亡 。 HMWD很難溶解 ，配制時可適當加熱助溶 。 ? 2 ． 主要試劑 : 高分子右旋糖酐（ HMWD） ， 分子量 40~60萬 。 ? 一 、 實驗準備 ? 1． 實驗動物 : 成年健康兔 （ 體重 2500g）或大鼠 （ 體重 250g） ， 性別根據(jù)實驗要求而定 ， 新購買的動物飼養(yǎng)數(shù)日 ， 使其適應環(huán)境 。 微循環(huán)直接與組織細胞接觸 ， 微循環(huán)功能的正常與否直接影響著組織細胞的正常功能 。神經(jīng)系統(tǒng)的結(jié)構功能尤為復雜，許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病因和發(fā)病機制至今尚不清楚，因此利用動物實驗研究疾病的發(fā)生發(fā)展過程對神經(jīng)病學研究顯得特別重要，其首要的問題就涉及到動物模型的建立。第二章 常用動物模型 隨著分子生物學、分子遺傳學和轉(zhuǎn)基因技術的飛速發(fā)展，實驗動物學的研究也不斷深入，逐漸形成了一門獨立的綜合性學科，對動物模型的認識逐步加深。目前，人們已經(jīng)通過模型動物發(fā)現(xiàn)了許多人類疾病的起因，為研究人類疾病的發(fā)生、發(fā)展、研究開發(fā)新藥和制定防治措施做出了巨大貢獻。 第一節(jié) 微循環(huán)障礙模型 心血管系統(tǒng) （ 循環(huán)系統(tǒng) ） 維持血液的正常流動 ， 向全身各器官組織提供氧和營養(yǎng)物質(zhì) ， 同時帶走組織的代謝產(chǎn)物 。 通過靜脈注射高分子量顆粒物質(zhì)高分子右旋糖酐（ HMWD）， 在紅細胞之間起“架橋”作用，并刺激損傷血管內(nèi)皮細胞，引起血小板和紅細胞聚集性（ RCA） 增加，血液黏度升高，形成大量的微小血栓，從而誘發(fā)微循環(huán)障礙動物模型。最佳時間為春 、 秋季節(jié) ， 室內(nèi)溫度一般保持在 25℃ 為宜 。 配制成 5%的混懸液 ， 過濾除去雜質(zhì) 。 ? 二 、 實驗方法 ? 兔性情溫順 ， 無需麻醉 ， 由一人固定 （ 大鼠用鼠籠固定 ） ， 另一人經(jīng)兔耳緣靜脈 （ 大鼠尾靜脈 ） 緩慢注射 5%的 HMWD， 5ml/kg，每日一次 ， 持續(xù) 10~20天 。 注射 HMWD后要注意保溫 ， 加強營養(yǎng) ， 保持清潔的環(huán)境 。 由于動物具有自我清除 HMWD的作用 ， 因而血液流變學改變只能維持 24~48h。 電鏡下血管內(nèi)皮細胞腫脹 、 微絨毛增多 ， 細胞漿內(nèi)可見眾多吞飲小泡 。 缺點是微循環(huán)障礙指標維持時間只有 24~48h， 慢性實驗需長時間連續(xù)注射 HMWD， 易造成動物重要器官功能衰竭而死亡 。 長期以來用高脂肪 、 高膽固醇飼料誘發(fā)動脈粥樣硬化的兔模型不理想 ， 主要表現(xiàn)為血源性泡沫細胞增多 ， 且病變分布與人的病變也有差異 ， 近來發(fā)現(xiàn)豬 、 狗 、 大鼠 、 雞 、 鴿都能產(chǎn)生自發(fā)或誘發(fā)動脈粥樣硬化模型 。 ? 2． 兔誘發(fā)模型 純種新西蘭白兔 ， 體重 2500g左右 ， 每天喂服膽固醇 ， 4個月可見動脈粥樣硬化斑塊 。 ? 4．雄性 C57BL/6J小鼠誘發(fā)模型 在普通飼料中加 5%膽固醇、 2%膽酸鈉、 30%可可脂，喂養(yǎng) 25周，全部小鼠在主動脈弓和近端冠狀動脈內(nèi)發(fā)生脂質(zhì)斑塊。 膽固醇由北京奧博星生物技術責任有限公司提供 。 豬油加熱融化后 ，將膽固醇 、 蛋黃粉融入豬油并加入普通飼料 ， 攪拌均勻備用 。 所有動物禁食 、 不禁水 12h， 稱量體重 ， 自耳中央動脈采血 ，測定基礎血清膽固醇 （ TC） 、 高密度脂蛋白（ HDLC） 及低密度脂蛋白 （ LDLC） 含量 ， 并計算 LDLC/HDLC。 ? 3． 第 42天夜間所有動物禁食不禁水 12h， 于次日晨各組動物稱定體重 ， 自耳中央動脈采血 2ml， 測定血清 TC， HDLC及 LDLC含量 ， 并計算 LDLC/HDLC。從主動脈根部至髂總動脈分叉處取出主動脈，將主動脈分叉處長約 3~4mm主動脈用 10%多聚甲醛固定，留作病理標本。將主動脈沿背側(cè)面縱行剪開，剔除脂肪組織，用蘇丹 Ⅲ 染色，留做大體形態(tài)觀察。 ? 2． HDLC及 LDLC的測定 采用磷鎢酸 鎂法（ PTAMG法 ） 。以內(nèi)膜最厚處為中心，測量該點的內(nèi)膜及中膜的厚度，計算比值。 ? 4． 主動脈粥樣硬化斑塊的分級標準 自耳緣靜脈注射空氣 20ml， 氣栓處死動物 ， 取出主動脈 ， 由背側(cè)縱向剖開 ，直接用肉眼觀察粥樣斑塊形成情況 ， 或?qū)用}上的脂肪剔除 ， 用蘇丹 Ⅲ 染色后觀察 。 判定方法有以下兩種： ? （ 1） 分級法 ? 0級 內(nèi)膜表面光滑 ， 無奶油色變化 ， 即無粥樣斑塊 。 ? 1級 有明顯的奶油色凸出粥樣斑塊 ， 但面積小于 3mm2。 ? 3級 大小不等的粥樣斑塊融合成片 ， 大的斑塊可超過3mm2。 ? （ 2） 百分法：將剪取的主動脈剝?nèi)ネ饽さ闹窘M織 ，以 10%的福爾馬林固定 ， 蘇丹 Ⅲ 染色 。 ? Ⅰ 級：動脈粥樣硬化病變面積 5%（ 1/20） 。 ? Ⅲ 級：動脈粥樣硬化病變面積 16%~33%（ 1/3） 。 ? Ⅴ 級：動脈粥樣硬化病變面積 50%（ 1/2） 。 ? 5． 冠狀動脈病變的分級 取出心臟 ， 以 10%的福爾馬林固定 ， 將心臟橫切成 3塊 ， 每塊冰凍切片至少 2片 ， 用蘇丹 Ⅲ 及蘇木紫染色 ， 每張切片均觀察 10個動脈斷面 ， 并以下列標準進行分級 。 ? 0級 動脈內(nèi)膜無脂質(zhì)浸潤 。 ? 1級 動脈內(nèi)膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/4。 ? 3級 動脈內(nèi)膜粥樣斑塊占血管腔面積的 1/2以上 。 第三節(jié) 高血壓模型 ? 高血壓病是全身小動脈痙攣引起血管外周阻力增加，血壓升高，并常伴有心、腦、腎和外周血管功能性或器質(zhì)性改變的全身性疾病。本實驗室選用大鼠。通過手術方式人為造成動物腎動脈狹窄，腎血流量銳減，由于腎嚴重缺血而引起腎素分泌增加，激活腎素 血管緊張素 醛固酮系統(tǒng)，導致全身小動脈收縮，鈉水潴留，循環(huán)血量增加，最終形成高血壓，稱為腎性高血壓。將動物麻醉后俯臥位固定，從脊柱旁皮膚切口，分離皮下組織腰背筋膜，切開內(nèi)斜肌筋膜，推開背長肌，暴露腎并小心地鈍性分離出一段腎動脈。術后幾天血壓開始升高， 1~3月后血壓升至高峰，并可長期維持下去。腎外異物包扎 ， 在腎外形成一層纖維素性鞘膜 ，壓迫腎實質(zhì) ， 造成腎組織缺血 ， 使腎素形成增加 ，血壓上升 。 約 20天后 ， 30%的大鼠出現(xiàn)高血壓 。 ? 2． 實驗方法 應激源大約有二類 。 另一類有心理成分也有軀體成分應激 ，大鼠應激性高血壓模型常采用噪聲和足底電擊的復合刺激 ， 每天上 、 下午各接受應激一次 ， 每次 2h，20天左右可使大鼠形成高血壓 。 ? 四 、 內(nèi)分泌性高血壓 （ DOCA） 模型 ? ? 1． 基本原理 該模型屬鈉水潴留容積依賴性（ volumedependent） 高血壓 。 與此同時