20xx年醫(yī)學(xué)專題—病原細菌的分離與鑒定(編輯修改稿)
2024-11-19 04:36 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 － 培養(yǎng)基不變色產(chǎn) 酸 ＋ 培養(yǎng)基變黃產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ⊕ 培養(yǎng)基變黃并有氣泡淀粉水解試驗（1）原理有的細菌具有淀粉酶，能水解培養(yǎng)基中的淀粉成麥芽糖。淀粉水解后遇碘液不再呈藍紫色反應(yīng)。（2）培養(yǎng)基與試劑 3%可溶性淀粉瓊脂平板（見附錄）和革蘭氏碘溶液（見附錄一）（3）試驗方法① 將細菌劃線接種于3%可溶性淀粉瓊脂平板上，在37℃培養(yǎng)24h。② 取出平板，在菌落處滴加碘液少許，觀察。③ 培養(yǎng)基呈深藍色，說明淀粉未被水解，即淀粉酶陰性。能水解淀粉的細菌其菌落周圍有透明的環(huán)（即淀粉酶陽性）。吲哚（靛基質(zhì)）試驗（1）原理有些細菌（如大腸埃希氏菌）能分解蛋白質(zhì)中的色氨酸生成吲哚，后者與對位二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈紅色。（2）培養(yǎng)基：鄧亨氏蛋白胨水溶液（見附錄）。（3）試 劑：①歐立希氏（Ehrlich39。s）試劑 ②Kovac39。s試劑對位二氨基苯甲醛 1g 對位二氨基苯甲醛 5g無水乙醇 95ml 戊醇（或異戊醇） 75ml濃鹽酸 20ml 濃鹽酸 25ml先用乙醇溶解試劑后加鹽酸，避光保存。（4）試驗方法① 試管試驗法：以接種環(huán)將待檢菌新鮮斜面培養(yǎng)物接種于鄧亨氏蛋白胨水溶液中，置37℃培養(yǎng)2448h （可延長45d）。于培養(yǎng)液中加入戊醇或二甲苯23mL，搖勻，靜置片刻后，沿試管壁加入歐立希氏或Kovacs試劑2mL。在戊醇或二甲苯下面的液體變?yōu)榧t色者為陽性反應(yīng)。② 斑點試驗法：將一片濾紙放在培養(yǎng)皿的蓋子上或一張載玻片上；；取1824h血瓊脂平板培養(yǎng)物涂布于浸濕的濾紙上；在13min內(nèi)棕色的試劑由紫紅變?yōu)榧t色者為陽性。③ 加熱試驗法：將一小指頭大的脫脂棉，滴上兩滴歐立希氏試劑，再在同一處加滴上兩滴高硫酸鉀（K2S2O8）飽和水溶液，置于含培養(yǎng)液的被檢試管中，離液面約半寸；將被檢試管放入燒杯或搪瓷缸水浴煮沸為止；脫脂棉上出現(xiàn)紅色者為陽性。甲基紅（）試驗／維倍（VP）二氏試驗。（1）原理甲基紅是一種pH指示劑，（紅色）—（黃色），當(dāng)細菌分解培養(yǎng)基中葡萄糖產(chǎn)酸，且產(chǎn)酸量大致使培養(yǎng)基在加入甲基紅指示劑后顯紅色為陽性。VP試驗則是某些細菌能使葡萄糖發(fā)酵而產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再變?yōu)橐阴＜谆状?，乙酞甲基甲醇又變?,3,丁二烯醇，2,3,丁二烯醇在有堿存在時氧化成二乙酰，后者和胨中的胍基化合物起作用產(chǎn)生粉紅色化合物。，則VP是陰性；或者相反。這個試驗對區(qū)別大腸埃希氏菌與腸桿菌是特別有用的。（2）培養(yǎng)基 葡萄糖蛋白胨水溶液（見附錄）。（3）試劑① 甲基紅 95%酒精 60mL蒸餾水 40mL② 甲液：α萘酚酒精溶液（α萘酚5g無水乙醇100mL）乙液：KOH溶液（KOH 40g，水100mL）將甲液和乙液分裝棕色瓶中，于410℃保存?；蛄蛩徙~ 1g濃氨水 40mI10%KOH 950mL蒸餾水 10mL待溶解后分裝棕色瓶中備用。（4）試驗方法? ：接種細菌于培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)2448h后。于培養(yǎng)物中加入幾滴試劑，變紅色者為陽性反應(yīng)，桔紅到黃色則為陰性。? VP試驗:。將6%，隨后加16%KOH ，輕搖，然后讓其靜置1015min。在15min內(nèi)出現(xiàn)紅色者則為陽性，1h后可出現(xiàn)假陽性。檸檬酸鹽利用試驗（1）原理在這個培養(yǎng)基中檸檬酸鈉為唯一的碳源，磷酸銨是唯一的氮源，若細菌利用這些鹽作為碳素和氮素來源而生長，利用檸檬酸鈉則生成碳酸鹽以及銨鹽被利用所產(chǎn)生的NH3+轉(zhuǎn)變?yōu)镹H4OH，使培養(yǎng)基變堿，pH升高，指示劑溴麝香草酚藍就顯出深藍色。（2）培養(yǎng)基西蒙氏（Simmon39。s）檸檬酸鈉瓊脂斜面培養(yǎng)基（見附錄）。（3）試驗方法將被檢菌純培養(yǎng)物或單個菌落劃線于檸檬酸鈉瓊脂斜面并在37℃培養(yǎng)2448h。腸桿菌、枸椽酸桿菌和一些沙門氏菌種產(chǎn)生陽性反應(yīng)，可見菌體生長好或培養(yǎng)基顯為深藍色。石蕊牛乳試驗（1）原理石蕊是一種指示劑，；pH接近中性，未接種的培養(yǎng)基為紫藍色故稱紫乳。石蕊也是一種氧化還原指示劑，可以還原為白色，所以，石蕊牛乳（紫乳）是用來測定被檢細菌幾種代謝性質(zhì)的一種鑒別培養(yǎng)基。（2）培養(yǎng)基加石蕊酒精飽和溶液于新鮮脫脂乳中，分裝小管，經(jīng)流通蒸汽滅菌而成。（3）試劑石蕊酒精溶液的制備：8g石蕊在30mL的40%乙醇中研磨，吸出上清液，加乙醇研磨，連續(xù)兩次。加40%乙醇總量100mL，并煮沸1min。取用上清液，必要時可加幾滴1mol/L鹽酸使呈紫色。現(xiàn)多用溴甲酚紫代替石蕊， %溴甲酚紫酒精溶液。（4）試驗方法與解釋將被檢菌接種于紫乳，置37℃溫箱培養(yǎng)，觀察結(jié)果。若細菌分解乳糖產(chǎn)酸，指示劑變色（石蕊為紅色，溴甲酚紫為黃色）。若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，使牛乳酸凝，氣體使凝塊中有裂隙，如產(chǎn)氣莢膜梭菌呈“暴烈發(fā)酵”。若為紫色，表示乳糖雖未分解；若為藍色表示乳糖雖未發(fā)酵，但細菌分解培基中所出現(xiàn)的氮源物質(zhì)而產(chǎn)堿所致。若指示劑還原則為無色，常出現(xiàn)在酸凝塊形成之后。硫化氫試驗（1）原理
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