專(zhuān)題三土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(編輯修改稿)
2025-06-03 18:17 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 菌污染： 將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。 判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用： 完全培養(yǎng)基（營(yíng)養(yǎng)成分齊全）接種后培養(yǎng) 觀察菌落數(shù)目。 主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn) 結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 實(shí)例：在做分解尿素的細(xì)菌的篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的實(shí)驗(yàn)時(shí)， A同學(xué)從對(duì)應(yīng)的 106倍稀釋的培養(yǎng)基中篩選出大約 150個(gè)菌落，但是其他同學(xué)在同樣的稀釋度下只選擇出大約 50個(gè)菌落。分析其原因。 原因： ⑴ 土樣不同 ⑵ 培養(yǎng)基污染或操作失誤 (或者是混入了其他的含氮物質(zhì) ) 小結(jié)：通過(guò)這個(gè)事例可以看出，實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說(shuō)服力，對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。 方案一： 由其他同學(xué) 用與 A同學(xué)相同土樣 進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 方案二： 將 A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對(duì)照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。 結(jié)果預(yù)測(cè)： 如果結(jié)果與 A同學(xué)一致，則證明 A無(wú)誤；如果結(jié)果不同，則證明 A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問(wèn)題。 從肥沃 、 酸堿度接近中性的濕潤(rùn)土壤中取樣 。 先鏟去表層土 3 cm左右 ， 再取樣 ， 將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中 。 “微生物的天然培養(yǎng)基” [一 ]土壤取樣 數(shù)量最大、種類(lèi)最多 大約 70%— 90%是細(xì)菌 ◆取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。 [二 ]制備培養(yǎng)基 由于初次實(shí)驗(yàn)，對(duì)于稀釋的范圍沒(méi)有把握，因此選擇了一個(gè)較為寬泛的范圍： 稀釋倍數(shù)為 103～ 107。 準(zhǔn)備 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 和 選擇培養(yǎng)基。 每個(gè)稀釋度下需要 3個(gè)選擇培養(yǎng)基， 1個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。還需要 8個(gè)滅菌試管和 1個(gè)滅菌移液管 。 將稀釋相同倍數(shù)的菌液，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯 多于 選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對(duì)照，用來(lái)判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了 選擇 作用。 ◆應(yīng)在火焰旁稱(chēng)取土壤 10g。 ◆在稀釋土壤溶液的過(guò)程中，每一步都要在火焰旁進(jìn)行 ◆ 分離不同的微生物采用不同的稀釋度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保證獲得菌落數(shù)在 30～ 300之間、適于計(jì)數(shù)的平板 （ 三 ） 樣品的稀釋 問(wèn)題： 為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度 ？ 測(cè)定土壤中細(xì)菌的總量和測(cè)定土壤中能分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量 ， 選用的稀釋范圍相同嗎 ？ 原因： 土壤中各類(lèi)微生物的數(shù)量 （ 單位：株 /kg）是不同的 。 例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細(xì)菌數(shù)約為 2 185萬(wàn) ， 放線菌數(shù)約為 477萬(wàn) ， 霉菌數(shù)約為 。
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