【正文】 磺酸，再加冰醋酸至100mL。硝酸鹽還原試驗（1）原理有些細菌能從硝酸鹽提出氧而將其還原為亞硝酸鹽（偶而還會形成NH3+ NNO、NO2和NH4OH的其它產(chǎn)物），若向培養(yǎng)物中加入對氨基苯磺酸和α萘胺，會形成紅色的重氮染料對磺胺苯偶氮α萘胺，這對鑒定細菌是有用的試驗（鋅也可還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，而且對區(qū)別假陰性反應(yīng)和真陰性反應(yīng)是有用的）。② 三糖鐵瓊脂斜面（見附錄）。若為紫色，表示乳糖雖未分解；若為藍色表示乳糖雖未發(fā)酵，但細菌分解培基中所出現(xiàn)的氮源物質(zhì)而產(chǎn)堿所致。現(xiàn)多用溴甲酚紫代替石蕊， %溴甲酚紫酒精溶液。（2）培養(yǎng)基加石蕊酒精飽和溶液于新鮮脫脂乳中，分裝小管，經(jīng)流通蒸汽滅菌而成。（3）試驗方法將被檢菌純培養(yǎng)物或單個菌落劃線于檸檬酸鈉瓊脂斜面并在37℃培養(yǎng)2448h。在15min內(nèi)出現(xiàn)紅色者則為陽性，1h后可出現(xiàn)假陽性。（4）試驗方法? ：接種細菌于培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)2448h后。這個試驗對區(qū)別大腸埃希氏菌與腸桿菌是特別有用的。甲基紅（）試驗／維倍（VP）二氏試驗。于培養(yǎng)液中加入戊醇或二甲苯23mL，搖勻，靜置片刻后，沿試管壁加入歐立希氏或Kovacs試劑2mL。（3）試 劑：①歐立希氏（Ehrlich39。③ 培養(yǎng)基呈深藍色，說明淀粉未被水解，即淀粉酶陰性。（4）結(jié)果判定無變化 － 培養(yǎng)基不變色產(chǎn) 酸 ＋ 培養(yǎng)基變黃產(chǎn)酸產(chǎn)氣 ⊕ 培養(yǎng)基變黃并有氣泡淀粉水解試驗（1）原理有的細菌具有淀粉酶，能水解培養(yǎng)基中的淀粉成麥芽糖。厭氧菌用含胨、鹽、硫羥代乙醇酸鈉、瓊脂的高層半固體培養(yǎng)基半指示劑同上。（2）培養(yǎng)基成分：蛋白胨2g，氯化鈉5g，瓊脂4g，葡萄糖10g，%溴麝香草酚藍（BTB）12mL，蒸餾水1000mL制法：將蛋白胨、瓊脂、鹽類和水混合，加熱融解，然后加葡萄糖和指示劑，混合加熱10min，分裝試管，加塞包裝，115℃高壓蒸汽滅菌20min，取出使成瓊脂柱。透析培養(yǎng)根據(jù)小分子能透過半透膜擴散，而將不同分子量的物質(zhì)分離原理設(shè)計的一種細菌培養(yǎng)裝置進行細菌培養(yǎng)。四、細菌的培養(yǎng)技術(shù)根據(jù)目的和要求的差異，可采取不同的培養(yǎng)方法表面培養(yǎng)又稱固體表面培養(yǎng)。為慎重起見，可挑選若干個可疑菌落分別進行鑒定。將環(huán)上的多余細菌材料燒掉后，從第1次劃線引出第2次劃線；再從第2次劃線引出第3次劃線，如此反復(fù)34次劃線后，即可把整個平板表面劃滿，注意每一次劃線只能與上一次劃線重疊，這樣就可在最后的12次劃線上出現(xiàn)多量的單個菌落，以便進行純培養(yǎng)。不論在桌面上還是在超凈工作臺上接種，都要事先作好準備工作，把所用的物品器械擺好。因此可將適宜的化學(xué)藥品加入培養(yǎng)基中。（1）加熱處理法當(dāng)懷疑病原菌為芽胞菌時，可加入510倍滅菌生理鹽水研磨(液體病料除外)，75℃水浴30min(或80℃ 1520min)，可殺死細菌繁殖體(包括雜菌及病原菌)；然后將處理過的病料接種到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上。無鞭毛的細菌只能沿穿刺線呈明顯的線狀生長，穿刺線兩邊的培養(yǎng)基仍然澄清透明，為動力試驗陰性。③ 色素有些細菌產(chǎn)生水溶性色素，使菌落和周圍的培養(yǎng)基出現(xiàn)綠色、金黃色、白色、橙色、檸檬色等顏色，產(chǎn)生的色素有水溶性或脂溶性。但也有少數(shù)細菌新分離的毒力株就是R型，如炭疽孢桿菌、結(jié)核分枝菌等。據(jù)細菌菌落表面特征不同，可將菌落分為3型：光滑型菌落（S型菌落）：菌落表面光滑、濕潤、邊緣整齊，新分離的細菌大多呈光滑型菌落。⑤ 厭氧培養(yǎng)基：利用物理、化學(xué)或生物學(xué)方法，去除氧氣后的培養(yǎng)基；可用于厭氧性細菌的分離和培養(yǎng)。② 加富培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入某些特殊營養(yǎng)物質(zhì)（如血液/血清、酵母浸膏或生長因子等）；用以培養(yǎng)對營養(yǎng)要求高的微生物。3．培養(yǎng)基培養(yǎng)基是指由人工方法配合而成的，用于微生物培養(yǎng)、分離、鑒別、研究和保存菌種用的混合營養(yǎng)制品。無菌操作是對微生物學(xué)工作者最基本的要求，必須經(jīng)過嚴格訓(xùn)練才能形成無菌操作素養(yǎng)。在細菌分離時應(yīng)注意的事項：1．病料采集（1）病料的種類主要決定于疫病的性質(zhì)，一般方法為：①全身感染→血液及內(nèi)臟；②局部感染→病患部位；③特殊病例→特殊處理。，寬容作舟，泛舟于海，方知海之寬闊；生活如山，寬容為徑，循徑登山，方知山之高大；生活如歌，寬容是曲，和曲而歌，方知歌之動聽。正確的分離有助于很快得到可疑的致病菌，對疫病的診斷與防控至關(guān)重要。2．無菌操作無菌操作是指在微生物研究過程中，既要避免各種外界的微生物進入操作對象又要杜絕操作對象污染周圍環(huán)境的操作技術(shù)。所用器械及物品均應(yīng)事先滅菌備用，金屬器具包裝后高壓滅菌或煮沸30min，玻璃器皿可高壓滅菌也可干熱滅菌，膠皮塞、培養(yǎng)基等則要高壓滅菌。（3）培養(yǎng)基的種類① 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含有一般細菌生長繁殖需要的基本營養(yǎng)物質(zhì)；可作為一些特殊培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分。某種細菌在這種培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，產(chǎn)生某種代謝產(chǎn)物，能與這種特定化合物或試劑發(fā)生某種明顯的特征性反應(yīng)；從而達到區(qū)分不同的微生物。① 菌落的形態(tài)特征大小、形狀（露滴狀、圓形、菜花樣、不規(guī)則等）、突起或扁平、凹陷、邊緣（光滑、波形、鋸齒狀、卷發(fā)狀等）、顏色（紅色、灰白色、黑色、綠色、無色、黃色等）、表面（光滑、粗糙等）、透明度（不透明、半透明、透明等）和粘度等。R型細菌抗原不完整，毒力和抗吞噬能力都比S型細菌弱。② 菌落溶血特征α溶血：又稱草綠色溶血，菌落周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)1~2mm的草綠色環(huán)，為高鐵血紅蛋白所致；β溶血：又