【文章內(nèi)容簡介】 獨(dú)特、簡短、僅含有大寫拉丁字母或大寫字母和阿拉伯?dāng)?shù)字、不應(yīng)含有標(biāo)點(diǎn)符號的基本原則。1．重點(diǎn)內(nèi)容：基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控相關(guān)序列；多順反子，單順反子；基因組的概念；病毒、細(xì)菌及真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特征。2．難點(diǎn)內(nèi)容：基因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特征。三、學(xué)時(shí)安排5學(xué)時(shí)第三章 基因表達(dá)與基因表達(dá)調(diào)控一、目的要求：（一）掌握：遺傳信息表達(dá)，轉(zhuǎn)錄，翻譯，有意義鏈，轉(zhuǎn)錄模板鏈，開放閱讀框，遺傳密碼等基本概念?；虮磉_(dá)，管家基因，組成性基因表達(dá)，誘導(dǎo)表達(dá)，阻遏表達(dá)，協(xié)調(diào)表達(dá)，表達(dá)調(diào)控，反式作用因子，表達(dá)組織特異性等基本概念；乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。（二）熟悉：原核生物RNA和蛋白質(zhì)的生物合成基本過程，真核生物RNA和蛋白質(zhì)合成特點(diǎn)；真核生物基因表達(dá)調(diào)控的各個(gè)水平，DNA水平調(diào)控的不同方式，反式作用因子的主要特點(diǎn)和調(diào)節(jié)方式，轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的不同環(huán)節(jié)，翻譯水平和翻譯后水平調(diào)控的基本環(huán)節(jié)（三）、了解：了解轉(zhuǎn)錄和翻譯后的加工。反式作用因子結(jié)構(gòu)域模式和反式作用因子的作用方式，基因表達(dá)的組織特異性和時(shí)相性。二、主要內(nèi)容原核生物基因表達(dá)調(diào)控主要是在轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平。轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控涉及啟動子、S因子、阻遏蛋白、正調(diào)控蛋白等多種因素，翻譯水平的調(diào)控則涉及SD序列、mRNA的穩(wěn)定性及翻譯產(chǎn)物的調(diào)控。真核生物基因表達(dá)調(diào)控環(huán)節(jié)較多，在DNA水平可通過染色體丟失、基因擴(kuò)增、基因重排、DNA甲基化以及染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變影響基因表達(dá)；在轉(zhuǎn)錄水平則主要通過反式作用因子的作用調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子與TATA盒的結(jié)合、RNA聚合酶與轉(zhuǎn)錄因子DNA復(fù)合物的結(jié)合以及轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成；在轉(zhuǎn)錄后水平主要通過RNA修飾、剪接及mRNA運(yùn)輸?shù)目刂苼碛绊懟虮磉_(dá)；影響翻譯水平的因素有影響翻譯起始的陰遏蛋白、5`AUG、5` 端非編碼區(qū)的長度等，另外還存在小分子反義RNA對翻譯調(diào)控。翻譯后蛋白質(zhì)修飾和定位也是表達(dá)調(diào)控的重要環(huán)節(jié)。同時(shí)近年提出的有關(guān)基因表達(dá)的統(tǒng)一理論慚被認(rèn)識。從而形成一個(gè)完整的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。重點(diǎn)內(nèi)容：原核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制；真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制；真核生物轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控機(jī)制。難點(diǎn)內(nèi)容：原核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制。三、學(xué)時(shí)安排4學(xué)時(shí)第四章 基因分析的基本策略一、目的要求（一）掌握：Southern 雜交和PCR等技術(shù)原理及在分析基因拷貝數(shù)的應(yīng)用；Northern blot和RTPCR技術(shù)原理及在基因轉(zhuǎn)錄水平變化分析中的應(yīng)用；（二）熟悉：Western blot 原理及在特定基因產(chǎn)物蛋白質(zhì)分析中的應(yīng)用。（三）了解：DNA序列測定的原理及其主要應(yīng)用；RNA酶保護(hù)試驗(yàn)原理及應(yīng)用；原位雜交技術(shù)；DNA微陣列技術(shù)原理； 流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用；免疫 組化方法的應(yīng)用。二、主要內(nèi)容基因分析是一種策略性很強(qiáng)的工作，有許多技術(shù)可以用于基因分析，正確選擇實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法和基因分析切入點(diǎn)是進(jìn)行基因分析首先要考慮的問題。根據(jù)信息中心法則，DNA是遺傳信息的攜帶者，RNA是基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，蛋白質(zhì)是結(jié)構(gòu)基因的最終產(chǎn)物，因此，分析基因可從DNA、RNA、蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行。同時(shí)研究者善于將各種技術(shù)有機(jī)結(jié)合起來，根據(jù)研究目的篩選適當(dāng)技術(shù)方法，也可先制定研究策略，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線設(shè)計(jì)。重點(diǎn)內(nèi)容：Southern 雜交和PCR等技術(shù)原理及應(yīng)用；Northern blot和RTPCR技術(shù)原理及應(yīng)用Western blot 原理及應(yīng)用。難點(diǎn)內(nèi)容：RNA酶保護(hù)試驗(yàn)原理及應(yīng)用。三、學(xué)時(shí)安排3學(xué)時(shí)第五章基因功能分析的基本策略一、目的要求（一）掌握：轉(zhuǎn)基因模型研究基因的功能原理、基因敲除技術(shù)原理、利用基因沉默技術(shù)對基因功能進(jìn)行分析的原理（二）了解；三種實(shí)驗(yàn)技術(shù)的操作過程及注意事項(xiàng)二、主要內(nèi)容基因功能分析可以在DNA、RNA和蛋白質(zhì)水平上采用不同的技術(shù)和模 型來實(shí)現(xiàn)。模式生物是研究基因功能不可缺少的工具，轉(zhuǎn)基因小鼠和基因敲除技術(shù)是目前研究特定基因功能最常用的動物模型，轉(zhuǎn)染細(xì)胞是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)建立的細(xì)胞模型。RNA干涉技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)在RNA水平上暫時(shí)關(guān)閉特定基因的方法。各種方法都具有各自的特點(diǎn)及局限性，研究者可根據(jù)不同目的篩選最合適方法與模型，實(shí)現(xiàn)對特定基因功能的研究目的。重點(diǎn)內(nèi)容：轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因敲除技術(shù)及RNA干涉技術(shù)原理難點(diǎn)內(nèi)容：轉(zhuǎn)基因技術(shù)、基因敲除技術(shù)及RNA干涉技術(shù)各自優(yōu)點(diǎn)及局限性三、學(xué)時(shí)安排3學(xué)時(shí)第六章 基因工程與體外表達(dá)一、目的要求：（一）、掌握：常用克隆載體；基因克隆的基本過程；外源基因在大腸桿菌和哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)的原理和方法。（二）、熟悉：限制性核酸內(nèi)切酶和其他常用工具酶的概念和特點(diǎn)；定點(diǎn)誘變技術(shù)原理。（三）、了解：昆蟲表達(dá)系統(tǒng)；酵母表達(dá)系統(tǒng)。二、主要內(nèi)容：基因工程指在體外對DNA分子按照既定的目的與方案進(jìn)行剪切和重新連接，或?qū)NA中某個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行人工替換或刪除，改造基因結(jié)構(gòu)，然 后利用轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、感染等方法將重組DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使DNA片段得到擴(kuò)增。DNA的體外剪切和重新連接是在限制性核酸內(nèi)切酶、邊接酶以及其他修飾酶的參與下進(jìn)行的。不同目的的克隆基因需要不同的載體，常用的載體有質(zhì)粒、噬菌體和粘性質(zhì)粒等。載體可與外源DNA在體外連接，構(gòu)成重組DNA分子，導(dǎo)入相應(yīng)的宿主細(xì)胞，能在宿主細(xì)胞中自行復(fù)制與表達(dá)?？寺〉幕蚩蛇M(jìn)一步用于表達(dá)有關(guān)基因的產(chǎn)物，進(jìn)行DNA序列分析，基因治療，研究基因表達(dá)的調(diào)節(jié)因子以及基因的功能等。還可通過寡核苷酸介導(dǎo)法、含U模板法、PCR介導(dǎo)的定點(diǎn)誘變法等技術(shù)，定向改變克隆基因的序列結(jié)構(gòu)，從而改造相應(yīng)蛋白的結(jié)構(gòu)。基因工程在得到重組體后，通常利用大腸桿菌、哺乳動物細(xì)胞、昆蟲、酵母等表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行克隆基因的體外表達(dá)。重點(diǎn)內(nèi)容：基因克隆的基本操作過程。難點(diǎn)內(nèi)容：α－互補(bǔ)篩選；陽性轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選；定點(diǎn)誘變技術(shù)原理。三、學(xué)時(shí)安排：6學(xué)時(shí)第七章 基因診斷(自學(xué))一、目的要求：（一）掌握：基因診斷的基本概念；掌握基因診斷中常用的分子生物學(xué)技術(shù)——核酸分子雜交、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）檢測、限制性酶酶譜分析、DNA序列測定、DNA 芯片技術(shù)；（二）熟悉基因診斷的基本方法；（三）了解遺傳病、感染性疾病以及腫瘤的基因診斷的策略；了解基因診斷在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。二、主要內(nèi)容：基因診斷已成為臨床實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)的一個(gè)重要組成部分。PCR擴(kuò)增和分子雜交是現(xiàn)代基因診斷技術(shù)的基本方法，基因診斷的基本操作流程是：樣本抽提、樣本擴(kuò)增、分子雜交和信號檢測。遺傳病的基因診斷主要是針對DNA分子的遺傳分析技術(shù)，其基本方法學(xué)包括連鎖分析和直接診斷。用作連鎖分析的遺傳標(biāo)志物主要有RFLP、STR、SNP。用于遺傳分析的代表性直接診斷技術(shù)有：用于DNA制圖的Southern印跡法、用于檢測點(diǎn)突變的ASO分子雜交法以及用于識別STR序列的PCR直接擴(kuò)增法等。同時(shí)基因診斷技術(shù)已經(jīng)成為現(xiàn)代法醫(yī)學(xué)的重要內(nèi)容。重點(diǎn)內(nèi)容：各種檢測方法原理難點(diǎn)內(nèi)容：各自優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn)三、學(xué)時(shí)安排3學(xué)時(shí)第八章 基因治療(自學(xué))一、目的要求：（一）掌握：基因治療、基因標(biāo)記、基因置換、基因添加、基因干預(yù)、反義RNA、核酶等基本概念；（二）熟悉：基因轉(zhuǎn)移技術(shù)，逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒載體的特點(diǎn)；熟悉腫瘤基因治療思路，理解抑癌基因治療原理、實(shí)驗(yàn)研究和臨床試驗(yàn)及腫瘤的免疫基因治療；理解反義RNA在基因治療中的意義和應(yīng)用；（三）了解：了解其它基因轉(zhuǎn)移方法；了解核酶及三鏈DNA在基因治療中的意義和基本原理；了解基因治療的前景與問題。二、主要內(nèi)容基因治療是指以改變?nèi)祟愡z傳物質(zhì)為基礎(chǔ)的生物醫(yī)學(xué)學(xué)治療，即通過一定方式將人正?；蛞吧突蚧蛴兄委熥饔玫腄NA順序?qū)肴梭w靶細(xì)胞，以矯正或轉(zhuǎn)換致病基因的治療方法。目前開展基因治療方案采取的策略包括：用正?；蛑脫Q染色體上致病基因，將正?；蜣D(zhuǎn)移至患者的宿主細(xì)胞，使治療基因代替致病基因表達(dá)正常蛋白質(zhì)而發(fā)揮作用；向患者體內(nèi)或腫瘤細(xì)胞內(nèi)導(dǎo)入腫瘤抑制基因，以抑制其表達(dá)；也可用反義RNA、SiRNA、核酶、肽核酸抑制或封閉有害基因mRNA表達(dá)；也可將抗體、細(xì)胞因子等基因?qū)肽[瘤細(xì)胞以激活體內(nèi)免疫細(xì)胞活力，增強(qiáng)患者免疫力。治療基因?qū)塍w內(nèi)方法有非病毒方法與病毒方法，非病毒方法包括直接注射法、電穿孔法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)運(yùn)法，其方法安全性好但效率低。與病毒方法各具有不同優(yōu)缺點(diǎn)。重點(diǎn)內(nèi)容：基因治療概念、基因治療策略方法、難點(diǎn)內(nèi)容：治療基因?qū)塍w內(nèi)方法，各自優(yōu)缺點(diǎn)、病毒載體結(jié)構(gòu)特點(diǎn)；核酶及三鏈DNA在基因治療的原理三、學(xué)時(shí)安排3學(xué)時(shí)第九章 基因組學(xué)與醫(yī)學(xué)(自學(xué))一、目的求：（一）掌握：基因組學(xué)、人類基因組計(jì)劃、基因病和SNP的概念；結(jié)構(gòu)基因組學(xué)、功能基因組學(xué)的概念及研究內(nèi)容。（二）熟悉：比較基因組學(xué)的概念；疾病相關(guān)基因的鑒定策略。（三）了解：基因組學(xué)與醫(yī)學(xué)的關(guān)系。二、主要內(nèi)容人類基因組計(jì)劃的研究目標(biāo)是闡明構(gòu)成人類基因組的全部DNA的結(jié)構(gòu)；闡明基因的編碼方式和分布特點(diǎn)；理解基因及其調(diào)控序列之間的相互關(guān)系；理解DNA全部序列所蘊(yùn)藏的意義。該計(jì)劃包括為遺傳圖譜、物理圖譜、序列圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜分析。功能基因組學(xué)是研究基因組中所有基因功能的學(xué)科。功能基因組學(xué)是從基因整體水平對基因的活動規(guī)律進(jìn)行探討，其研究內(nèi)容主要包括基因組的表達(dá)、蛋白質(zhì)產(chǎn)物的功能、基因組多樣性的研究、基因組功能注釋。重點(diǎn)內(nèi)容：人類基因組計(jì)劃、功能基因組學(xué)的研究內(nèi)容。難點(diǎn)內(nèi)容：功能基因組學(xué)的研究內(nèi)容。三、學(xué)時(shí)安排 2學(xué)時(shí)四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及學(xué)時(shí)安排1大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取 3學(xué)時(shí) 2瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 3學(xué)時(shí) 3 DNA純度、濃度和分子量的測定 4學(xué)時(shí) 4大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與轉(zhuǎn)化 4學(xué)時(shí) 5動植物基因組DNA的提取與