【文章內容簡介】 獨特、簡短、僅含有大寫拉丁字母或大寫字母和阿拉伯數(shù)字、不應含有標點符號的基本原則。1．重點內容：基因轉錄調控相關序列；多順反子，單順反子；基因組的概念；病毒、細菌及真核生物基因組的結構特征。2．難點內容：基因的結構特點，真核生物基因組的結構特征。三、學時安排5學時第三章 基因表達與基因表達調控一、目的要求：（一）掌握：遺傳信息表達，轉錄，翻譯，有意義鏈，轉錄模板鏈，開放閱讀框，遺傳密碼等基本概念?；虮磉_，管家基因，組成性基因表達，誘導表達，阻遏表達，協(xié)調表達，表達調控，反式作用因子，表達組織特異性等基本概念；乳糖操縱子的結構及其調節(jié)機制。（二）熟悉：原核生物RNA和蛋白質的生物合成基本過程，真核生物RNA和蛋白質合成特點；真核生物基因表達調控的各個水平，DNA水平調控的不同方式，反式作用因子的主要特點和調節(jié)方式，轉錄后調控的不同環(huán)節(jié)，翻譯水平和翻譯后水平調控的基本環(huán)節(jié)（三）、了解：了解轉錄和翻譯后的加工。反式作用因子結構域模式和反式作用因子的作用方式，基因表達的組織特異性和時相性。二、主要內容原核生物基因表達調控主要是在轉錄水平和翻譯水平。轉錄水平的調控涉及啟動子、S因子、阻遏蛋白、正調控蛋白等多種因素，翻譯水平的調控則涉及SD序列、mRNA的穩(wěn)定性及翻譯產(chǎn)物的調控。真核生物基因表達調控環(huán)節(jié)較多，在DNA水平可通過染色體丟失、基因擴增、基因重排、DNA甲基化以及染色質結構改變影響基因表達；在轉錄水平則主要通過反式作用因子的作用調控轉錄因子與TATA盒的結合、RNA聚合酶與轉錄因子DNA復合物的結合以及轉錄起始復合物的形成；在轉錄后水平主要通過RNA修飾、剪接及mRNA運輸?shù)目刂苼碛绊懟虮磉_；影響翻譯水平的因素有影響翻譯起始的陰遏蛋白、5`AUG、5` 端非編碼區(qū)的長度等，另外還存在小分子反義RNA對翻譯調控。翻譯后蛋白質修飾和定位也是表達調控的重要環(huán)節(jié)。同時近年提出的有關基因表達的統(tǒng)一理論慚被認識。從而形成一個完整的調控網(wǎng)絡。重點內容：原核生物轉錄水平的調控機制；真核生物轉錄水平的調控機制；真核生物轉錄后水平的調控機制。難點內容：原核生物轉錄水平的調控機制。三、學時安排4學時第四章 基因分析的基本策略一、目的要求（一）掌握：Southern 雜交和PCR等技術原理及在分析基因拷貝數(shù)的應用；Northern blot和RTPCR技術原理及在基因轉錄水平變化分析中的應用；（二）熟悉：Western blot 原理及在特定基因產(chǎn)物蛋白質分析中的應用。（三）了解：DNA序列測定的原理及其主要應用；RNA酶保護試驗原理及應用；原位雜交技術；DNA微陣列技術原理； 流式細胞術的應用；免疫 組化方法的應用。二、主要內容基因分析是一種策略性很強的工作，有許多技術可以用于基因分析，正確選擇實驗技術方法和基因分析切入點是進行基因分析首先要考慮的問題。根據(jù)信息中心法則，DNA是遺傳信息的攜帶者，RNA是基因的轉錄產(chǎn)物，蛋白質是結構基因的最終產(chǎn)物，因此，分析基因可從DNA、RNA、蛋白質水平上進行。同時研究者善于將各種技術有機結合起來，根據(jù)研究目的篩選適當技術方法，也可先制定研究策略，再進行實驗技術路線設計。重點內容：Southern 雜交和PCR等技術原理及應用；Northern blot和RTPCR技術原理及應用Western blot 原理及應用。難點內容：RNA酶保護試驗原理及應用。三、學時安排3學時第五章基因功能分析的基本策略一、目的要求（一）掌握：轉基因模型研究基因的功能原理、基因敲除技術原理、利用基因沉默技術對基因功能進行分析的原理（二）了解；三種實驗技術的操作過程及注意事項二、主要內容基因功能分析可以在DNA、RNA和蛋白質水平上采用不同的技術和模 型來實現(xiàn)。模式生物是研究基因功能不可缺少的工具，轉基因小鼠和基因敲除技術是目前研究特定基因功能最常用的動物模型，轉染細胞是利用轉基因技術建立的細胞模型。RNA干涉技術能夠實現(xiàn)在RNA水平上暫時關閉特定基因的方法。各種方法都具有各自的特點及局限性，研究者可根據(jù)不同目的篩選最合適方法與模型，實現(xiàn)對特定基因功能的研究目的。重點內容：轉基因技術、基因敲除技術及RNA干涉技術原理難點內容：轉基因技術、基因敲除技術及RNA干涉技術各自優(yōu)點及局限性三、學時安排3學時第六章 基因工程與體外表達一、目的要求：（一）、掌握：常用克隆載體；基因克隆的基本過程；外源基因在大腸桿菌和哺乳動物細胞中表達的原理和方法。（二）、熟悉：限制性核酸內切酶和其他常用工具酶的概念和特點；定點誘變技術原理。（三）、了解：昆蟲表達系統(tǒng)；酵母表達系統(tǒng)。二、主要內容：基因工程指在體外對DNA分子按照既定的目的與方案進行剪切和重新連接，或將DNA中某個位點進行人工替換或刪除，改造基因結構，然 后利用轉化、轉染、感染等方法將重組DNA導入宿主細胞，使DNA片段得到擴增。DNA的體外剪切和重新連接是在限制性核酸內切酶、邊接酶以及其他修飾酶的參與下進行的。不同目的的克隆基因需要不同的載體，常用的載體有質粒、噬菌體和粘性質粒等。載體可與外源DNA在體外連接，構成重組DNA分子，導入相應的宿主細胞，能在宿主細胞中自行復制與表達?？寺〉幕蚩蛇M一步用于表達有關基因的產(chǎn)物，進行DNA序列分析，基因治療，研究基因表達的調節(jié)因子以及基因的功能等。還可通過寡核苷酸介導法、含U模板法、PCR介導的定點誘變法等技術，定向改變克隆基因的序列結構，從而改造相應蛋白的結構?；蚬こ淘诘玫街亟M體后，通常利用大腸桿菌、哺乳動物細胞、昆蟲、酵母等表達系統(tǒng)進行克隆基因的體外表達。重點內容：基因克隆的基本操作過程。難點內容：α－互補篩選；陽性轉染細胞的篩選；定點誘變技術原理。三、學時安排：6學時第七章 基因診斷(自學)一、目的要求：（一）掌握：基因診斷的基本概念；掌握基因診斷中常用的分子生物學技術——核酸分子雜交、聚合酶鏈式反應（PCR）、單鏈構象多態(tài)性（SSCP）檢測、限制性酶酶譜分析、DNA序列測定、DNA 芯片技術；（二）熟悉基因診斷的基本方法；（三）了解遺傳病、感染性疾病以及腫瘤的基因診斷的策略；了解基因診斷在法醫(yī)學中的應用。二、主要內容：基因診斷已成為臨床實驗醫(yī)學的一個重要組成部分。PCR擴增和分子雜交是現(xiàn)代基因診斷技術的基本方法，基因診斷的基本操作流程是：樣本抽提、樣本擴增、分子雜交和信號檢測。遺傳病的基因診斷主要是針對DNA分子的遺傳分析技術，其基本方法學包括連鎖分析和直接診斷。用作連鎖分析的遺傳標志物主要有RFLP、STR、SNP。用于遺傳分析的代表性直接診斷技術有：用于DNA制圖的Southern印跡法、用于檢測點突變的ASO分子雜交法以及用于識別STR序列的PCR直接擴增法等。同時基因診斷技術已經(jīng)成為現(xiàn)代法醫(yī)學的重要內容。重點內容：各種檢測方法原理難點內容：各自優(yōu)點及缺點三、學時安排3學時第八章 基因治療(自學)一、目的要求：（一）掌握：基因治療、基因標記、基因置換、基因添加、基因干預、反義RNA、核酶等基本概念；（二）熟悉：基因轉移技術，逆轉錄病毒、腺病毒和腺相關病毒載體的特點；熟悉腫瘤基因治療思路，理解抑癌基因治療原理、實驗研究和臨床試驗及腫瘤的免疫基因治療；理解反義RNA在基因治療中的意義和應用；（三）了解：了解其它基因轉移方法；了解核酶及三鏈DNA在基因治療中的意義和基本原理；了解基因治療的前景與問題。二、主要內容基因治療是指以改變人類遺傳物質為基礎的生物醫(yī)學學治療，即通過一定方式將人正?；蛞吧突蚧蛴兄委熥饔玫腄NA順序導入人體靶細胞，以矯正或轉換致病基因的治療方法。目前開展基因治療方案采取的策略包括：用正?；蛑脫Q染色體上致病基因，將正?；蜣D移至患者的宿主細胞，使治療基因代替致病基因表達正常蛋白質而發(fā)揮作用；向患者體內或腫瘤細胞內導入腫瘤抑制基因，以抑制其表達；也可用反義RNA、SiRNA、核酶、肽核酸抑制或封閉有害基因mRNA表達；也可將抗體、細胞因子等基因導入腫瘤細胞以激活體內免疫細胞活力，增強患者免疫力。治療基因導入體內方法有非病毒方法與病毒方法，非病毒方法包括直接注射法、電穿孔法、脂質體轉運法，其方法安全性好但效率低。與病毒方法各具有不同優(yōu)缺點。重點內容：基因治療概念、基因治療策略方法、難點內容：治療基因導入體內方法，各自優(yōu)缺點、病毒載體結構特點；核酶及三鏈DNA在基因治療的原理三、學時安排3學時第九章 基因組學與醫(yī)學(自學)一、目的求：（一）掌握：基因組學、人類基因組計劃、基因病和SNP的概念；結構基因組學、功能基因組學的概念及研究內容。（二）熟悉：比較基因組學的概念；疾病相關基因的鑒定策略。（三）了解：基因組學與醫(yī)學的關系。二、主要內容人類基因組計劃的研究目標是闡明構成人類基因組的全部DNA的結構；闡明基因的編碼方式和分布特點；理解基因及其調控序列之間的相互關系；理解DNA全部序列所蘊藏的意義。該計劃包括為遺傳圖譜、物理圖譜、序列圖譜、轉錄圖譜分析。功能基因組學是研究基因組中所有基因功能的學科。功能基因組學是從基因整體水平對基因的活動規(guī)律進行探討，其研究內容主要包括基因組的表達、蛋白質產(chǎn)物的功能、基因組多樣性的研究、基因組功能注釋。重點內容：人類基因組計劃、功能基因組學的研究內容。難點內容：功能基因組學的研究內容。三、學時安排 2學時四、實驗內容及學時安排1大腸桿菌質粒DNA的提取 3學時 2瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA 3學時 3 DNA純度、濃度和分子量的測定 4學時 4大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備與轉化 4學時 5動植物基因組DNA的提取與