20xx年醫(yī)學專題—第十四章免疫細胞的分離與檢測(編輯修改稿)
2025-11-16 00:58 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 粘附(zhān f249。)法 補體細胞毒法 淘洗法 免疫磁珠法,經(jīng)典分離(fēnl237。)方法的局限性 純度 稀有細胞,？ 高速 高純度 高精度,第三十九頁，共九十五頁。,流式細胞儀（FCM）具有(j249。yǒu)高速、 高純度、高精度優(yōu)勢。,激活(jī hu243。)細胞分類儀：用來分析、鑒定細胞的流式細胞儀。 Fluorescence activated cell sorter （FACS）,第四十頁，共九十五頁。,細胞(x236。bāo)分選,細胞(x236。bāo)分選（cell sorting）：有選擇地從一個混合細胞群體中分離出某一類特定細胞的技術(shù)。,第四十一頁，共九十五頁。,,488 nm laser,,,,Fluorescence Activated Cell Sorting,Charged Plates,Single cells sorted into test tubes,FALS Sensor,Fluorescence detector,第四十二頁，共九十五頁。,四、吞噬細胞(tūn sh236。 x236。 bāo)的分離,吞噬細胞(tūn sh236。 x236。 bāo)種類,大吞噬細胞(tūn sh236。 x236。 bāo)：單核細胞、巨噬細胞 小吞噬細胞：中性粒細胞,巨噬細胞：斑蝥敷貼法、腹腔滲出分離法、 中性粒細胞：右旋糖酐分離法、Ficoll－Hypaque分層液分離法,吞噬細胞分離法,第四十三頁，共九十五頁。,斑蟊敷貼(fū tiē)法分離人巨噬細胞,20世紀70年代(ni225。nd224。i)由我國免疫學家創(chuàng)立 斑蝥的酒精浸出液可趨化巨噬細胞 分離方法,第四十四頁，共九十五頁。,腹腔(f249。qiāng)滲出法分離腹腔(f249。qiāng)巨噬細胞,腹腔(f249。qiāng)注射誘導劑,3－4 days,腹腔內(nèi)注射(zh249。sh232。)肝素PBS,處死動物，吸取腹腔液（含大量巨噬細胞）,洗滌細胞、計數(shù),第四十五頁，共九十五頁。,3ml肝素抗凝全血＋1/4體積6％右旋糖酐生理鹽水，室溫靜置30－40min，取上層白細胞，0.8％NH4Cl溶解紅細胞，離心(l237。xīn)，取細胞沉淀用Ficoll－Hypaque分離液分離中性粒細胞和單個核細胞。,右旋糖酐法分離(fēnl237。)中性粒細胞,第四十六頁，共九十五頁。,外周血中性(zhōngx236。ng)粒細胞分離(FicollHypaque),第四十七頁，共九十五頁。,五、細胞(x236。bāo)活力檢測,細胞活力：指細胞存活的數(shù)量，一般用百分表示。 通常活力應＞95% 方法(fāngfǎ)：苔盼藍染色法 活細胞：不著色 死細胞：著色,第四十八頁，共九十五頁。,白細胞的分離(fēnl237。) 外周血單個核細胞的分離 淋巴細胞和單核細胞的分離 淋巴細胞亞群分離 吞噬細胞的分離,小結(jié)(xiǎoji233。)：免疫細胞的分離與純化,第四十九頁，共九十五頁。,第五十頁，共九十五頁。,第二節(jié) 淋巴細胞的數(shù)量(sh249。li224。ng)檢測,T細胞數(shù)量(sh249。li224。ng)檢測 B細胞數(shù)量的檢測,第五十一頁，共九十五頁。,（一） 根據(jù)T細胞表面CD分子檢測 間接熒光免疫法 免疫組織(zǔzhī)化學法：酶標、金標法 微量細胞毒試驗 花環(huán)技術(shù),一、T細胞數(shù)量(sh249。li224。ng)檢測,（二）根據(jù)T細胞受體檢測 可溶性抗原(k224。ngyu225。n)肽MHC四聚體復合法 Tetramer,第五十二頁，共九十五頁。,1. 間接熒光(y237。ngguāng)免疫法,第五十三頁，共九十五頁。,2. 免疫(miǎny236。)組織化學法： 酶標：ABC，APAAP 金標法,第五十四頁，共九十五頁。,3. 微量細胞毒試驗(sh236。y224。n),針對淋巴細胞CD分子Ab與其相應的CD分子結(jié)合， 借助補體依賴的細胞毒作用，可造成表達特定表面(biǎomi224。n)Ag 的細胞損傷，破壞膜的完整性，應用伊紅染料滲入細胞內(nèi) ，使之著染紅色，而無相應CD分子的細胞則不受損傷，因 而不著色。計數(shù)著色細胞數(shù),計算相應細胞的%。,第五十五頁，共九
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