20xx年醫(yī)學專題—第十四章免疫細胞的分離與檢測-文庫吧
2025-11-02 00:58 本頁面
【正文】 貼壁細胞淋巴細胞（T、B） 刮下貼壁細胞純單核細胞 缺點：B細胞也有較弱貼壁，使B細胞收率↓,第十七頁，共九十五頁。,過柱吸附(xīf249。)法,層析過柱，單核細胞滯留(zh236。li)于層析柱中 洗脫淋巴細胞 層析柱：玻璃纖維或葡聚糖凝膠 粘附能力：Mф、Mon＞DC ＞BC ＞ TC=RBC,第十八頁，共九十五頁。,Percoll分層液法,Percoll分層液：經(jīng)聚乙烯吡咯烷酮處理過的硅膠顆?；鞈乙海瑢毎?x236。bāo)無毒、無刺激。 Percoll原液加PBS稀釋，高速離心（21000g）連續(xù)密度梯度。,第十九頁，共九十五頁。,將PBMC加在分離液上低速(dī s249。)離心后可分離PBMC中的單核細胞和淋巴細胞,第二十頁，共九十五頁。,淋巴細胞亞群的分離(fēnl237。),E花環(huán)分離法 尼龍棉柱分離法 補體細胞毒法 親和板結合(ji233。h233。)分離法 免疫磁珠分離法 細胞分選術,第二十一頁，共九十五頁。,E花環(huán)(huā hu225。n)分離法,T細胞(x236。bāo) （CD2/LFA2/E受體）,＋,綿羊(mi225。ny225。ng)紅細胞 SRBC,E花環(huán),比重增加,FicollHypaque 分離液分離,低滲,第二十二頁，共九十五頁。,第二十三頁，共九十五頁。,尼龍(n237。l243。ng)棉柱分離法,尼龍(n237。l243。ng)棉裝入5ml注射器中,加入(jiār249。)淋巴細胞懸液,37℃、 5％ CO1－2h,RPMI 1640完全培養(yǎng)基灌洗,洗脫液中為T細胞,原理 B細胞可粘 附尼龍毛； T細胞不具 有粘附活性。,第二十四頁，共九十五頁。,方法(fāngfǎ)評價：,實驗室常用分離方法之一 簡便、易行 獲得細胞純度(chnd249。)較高 T細胞90％ B細胞80％ 尼龍毛柱法＋E花環(huán)法，T細胞可達99％以上,第二十五頁，共九十五頁。,（三）補體細胞毒法 原理：免疫細胞表面(biǎomi224。n)的某種Ag與相應Ab結合，加入補體，借助補體介導的細胞毒作用，破壞Ag陽性的細胞，收集Ag陰性的細胞。,如：在LC懸液中加入(jiār249。)抗人Ig抗體去除B細胞，得到T細胞。,如：在T細胞懸液中加入抗CD4抗體(k224。ngtǐ)去除CD4+ T細胞，得到CD8+T細胞。,第二十六頁，共九十五頁。,親和板分離法,第二十七頁，共九十五頁。,（五）免疫(miǎny236。)磁珠法,原理(yu225。nlǐ)： 將抗體交聯(lián)于磁珠表面形成免疫磁珠 （Immunomagnetic bead，IMB）,加入細胞懸液，IMB上的Ab與細胞表面的Ag反應(fǎny236。ng)，形成抗體/抗原的復合物。,外加磁場，分選出結合有免疫細胞的IMB 。,第二十八頁，共九十五頁。,分法： 直接(zh237。jiē)法 間接法,第二十九頁，共九十五頁。,直接(zh237。jiē)法,第三十頁，共九十五頁。,間接(ji224。n jiē)法,第三十一頁，共九十五頁。,免疫磁珠法細胞(x236。bāo)分選過程,第三十二頁，共九十五頁。,免 疫 磁 珠 細 胞 分 選 裝 置,特點: 簡便, 快速(ku224。i s249。), 費用低, 無需特殊設備,第三十三頁，共九十五頁。,全自動細胞(x236。bāo)分選儀,第三十四頁，共九十五頁。,MACS法 （magnetic activated cell stoter）,S,N,,,,,,,,,,,陰性(yīnx236。ng)選擇 （負選法）,主要(zhǔy224。o)組成: MACS微珠 MACS分選柱 MACS分選器,第三十五頁，共九十五頁。,第三十六頁，共九十五頁。,第三十七頁，共九十五頁。,評價(p237。ngji224。),高純度（95％～99％） 高回收率（90％～95％） 高活性（99％～100％） 效果可與流式細胞儀媲美(p236。měi)， 但更經(jīng)濟、省時、簡便、快速,第三十八頁，共九十五頁。,（六）流式細胞儀分選技術(j236。sh249。),經(jīng)典方法： 離心
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