瘦肉精檢測方法(編輯修改稿)
2024-11-10 19:34 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 后的供試肝樣，作為供試試料。取均漿后的空白肝樣，作為空白試料。取均漿后的空白肝樣(1土0．05)e添加l00ng／m1的克倫特羅對照溶液20tzL作為2ng／g空白添加試料。a：提取(肝)取(1士o．05)z試料，置50ml離心管中；，旋渦混勻，中速振蕩1．5h；在10—15~C下以4000r／mill以上速度離心15min；上清液移人另一50ml離心管中，加入氫氧化鈉溶液300gL，混勻，振蕩15min；／l磷酸二氫鉀溶液4。0ml，混勻，2—8~C放置過夜；取上述溶液于10～15~C以4000r／111113以上的速度離心15min，上清液備用。b．凈化(肝)C，固相萃取柱依次用無水甲醇3mi、／L磷酸二氫鉀溶液2mi預(yù)洗，不使柱床干涸；將備用上清液全部過柱；／L磷酸二氫鉀溶液2ml淋洗，擠干，棄去所有淋洗液；用無水甲醇2mi洗脫，／mm以下，擠干，收集洗脫液；于50～60~C下用氮氣或空氣緩緩吹干洗脫液；，以4000r／mill以上的速度離心15rain，清液作為試樣溶液供酶聯(lián)免疫測定法測定。③測定a．室溫應(yīng)控制在19～30~C。b．取在19—30~C放置1—2h的試劑盒，按每個標準溶液和試樣溶液至少兩孔計算所需酶聯(lián)板條的數(shù)量，插入框架。每個微孔加入用緩沖溶液100倍稀釋的抗體100~tL，封口膜封板，室溫孵育30min。c倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒有殘余液體。用多道移液器加水250pL到酶聯(lián)板的微?L內(nèi)，稍后倒出孔內(nèi)液體，再將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，如此重復(fù)操作洗板3次。d．分別吸取標準溶液、空白試料、空白添加試料和供試試料各20uL，分別放入不同微孔底中央，并在每孔內(nèi)加入用緩沖溶液100倍稀釋的酶結(jié)合物100~I。，在微型振蕩器上混勻，用封口膜封好，室溫孵育30min。e．倒出孔內(nèi)液體，將酶聯(lián)板倒置在吸水紙上拍打，使孔內(nèi)沒有殘余液體，重復(fù)洗板3次。f．用多道移液器加入用底物緩沖溶液10倍稀釋的底物100uL，室溫避光孵育15min。g．用多道移液器每孔加終止液100uL。h．在1h內(nèi)將酶聯(lián)板放于酶標儀內(nèi)，于450nm波長處測定吸光度值。(4)計算 用數(shù)據(jù)分析軟件對結(jié)果進行分析，繪出標準曲線，并得出試料中克倫特羅的含量。(5)靈敏度和回收率／Kg。本方法在1ug／kg添加濃度水平上豬尿回收率范圍為60％一120％，豬肝回收率范圍為40％～120％。第三篇：新型瘦肉精種類及其檢測方法新型瘦肉精種類及其檢測方法“瘦肉精”是指能夠抑制動物體脂肪生長，促進蛋白質(zhì)合成的一類藥物統(tǒng)稱。它并不是一種特定的物質(zhì)，廣義上來說，凡是通過非正常手段促進瘦肉生長，抑制肥肉生長的的飼料添加劑均可成為“瘦肉精”。傳統(tǒng)的瘦肉精主要是β—興奮劑類的藥物，例如鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺等。近年來人們對瘦肉精的危害越來越了解，因此各國政府對違法添加瘦肉精行為的打擊力度也越來越大。鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺等傳統(tǒng)瘦肉精逐漸銷聲匿跡。但由于利益的驅(qū)動和檢測技術(shù)的相對滯后，新型瘦肉精開始出現(xiàn)。新型的瘦肉精不但種類繁多，也更加不易被現(xiàn)有技術(shù)手段檢測，食用后對人體健康的危害也更嚴重，對兒童、年老體弱者作用更明顯。下面列舉幾種常見的新型瘦肉精及一些新型瘦肉精的檢測方法： 1．苯乙醇胺A 苯乙醇胺A是苯乙醇胺衍生物中一種，又名克倫巴胺，能夠明顯提高豬的生長速度，增加瘦肉率。研究發(fā)現(xiàn)在飼料中添加苯乙醇胺A，豬的肌纖維密度增加，肌纖維橫徑增粗。苯乙醇胺A還可以顯著提高豬血清生長激素和甲狀腺素水平，從而使血清葡萄糖含量明顯增加，有利于蛋白質(zhì)在體內(nèi)沉積，并提高基礎(chǔ)代謝水平，使體脂趨于分解。但食用含苯乙醇胺A的豬肉后，人體會出現(xiàn)惡心、頭暈、四肢無力、手顫等中毒
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