20xx年醫(yī)學(xué)專(zhuān)題—前列腺癌方面免疫組化基礎(chǔ)知識(shí)(編輯修改稿)
2024-11-05 01:59 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 6)等成功地引入了酶代替熒光色素標(biāo)記抗體，進(jìn)行組織細(xì)胞內(nèi)抗原或半抗原的定位，開(kāi)辟了酶標(biāo)抗體技術(shù)免疫酶細(xì)胞化學(xué)之路。 結(jié)合筆者(bǐzhě)經(jīng)驗(yàn)，介紹ICC染色中的主要程序：組織標(biāo)本的固定、切片、染色原理及步驟、結(jié)果判定及一些進(jìn)展、特殊應(yīng)用等供讀者參考。,第十五頁(yè)，共三十八頁(yè)。,第一節(jié) 固定(g249。d236。ng)和切片,一、固定 若想得到理想的ICC染色結(jié)果、正確地判斷抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞內(nèi)的位置，除需有良好酶和抗體外，保持組織細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的不動(dòng)性（Immobility）和免疫活性也是至關(guān)重要的。換言之，如果抗原物質(zhì)在組織細(xì)胞間彌散、丟失或失去免疫活性，無(wú)論如何(w l249。n r h233。)努力染色都是徒勞的，所以說(shuō)固定是ICC染色中非常重要的一環(huán)。ICC與其它組織學(xué)技術(shù)不同，除要求保存良好的結(jié)構(gòu)外，還需保存組織抗原的免疫活性。一般認(rèn)為，新鮮組織能夠最大限度地保存組織抗原的免疫活性，但結(jié)構(gòu)較差，易出現(xiàn)抗原彌散丟失現(xiàn)象。,第十六頁(yè)，共三十八頁(yè)。,Cumming（1980）報(bào)告，不固定的組織切片(qiē pi224。n)ICC染色時(shí)，環(huán)鳥(niǎo)苷酸含量丟失80%以上。固定的目的是使構(gòu)成組織細(xì)胞成分的蛋白等物質(zhì)不溶于水和有機(jī)溶劑，并迅速使組織細(xì)胞中各種酶降解、失活，防止組織自溶和抗原彌散，保持組織細(xì)胞的完整性和所要檢測(cè)物質(zhì)的抗原性。因此迅速充分固定是ICC染色成功的關(guān)鍵一步。用于ICC的固定劑種類(lèi)較多，選擇時(shí)應(yīng)根據(jù)所要檢測(cè)物質(zhì)的抗原性質(zhì)和切片(qiē pi224。n)方法以及所用抗體特征等做最佳篩選。制片及固定方法見(jiàn)第一章 ，下面介紹兩種近年報(bào)道的新方法。,第十七頁(yè)，共三十八頁(yè)。,1．AMEX（Acetone Meth Enzoate Xylene ）法 是改良的冰凍置換法（freeze substitution）的簡(jiǎn)稱(chēng)，主要用于石蠟包埋標(biāo)本。Sato(1986)報(bào)告，該法具有同新鮮（未固定）組織冰凍切片同樣的抗原保持性和石蠟切片的良好組織結(jié)構(gòu)保存。其機(jī)制為：組織在丙酮中固定（脫水(tuō shuǐ)），組織細(xì)胞內(nèi)水份逐漸被丙酮取代，繼之，用苯甲酸酯取代組織內(nèi)丙酮，經(jīng)二甲苯置換后，石蠟包埋。組織在20℃丙酮內(nèi)過(guò)夜亦形成冰晶，所以原方法將組織先置4℃丙酮20～30min，再移入20℃丙酮過(guò)夜。實(shí)際上組織在4℃丙酮內(nèi)過(guò)夜亦可得到同樣效果。如在該固定液內(nèi)加入少量蛋白酶活性阻斷劑，并采用低溶點(diǎn)石蠟包埋等，可獲得更佳染色結(jié)果。,第十八頁(yè)，共三十八頁(yè)。,微波(wēibō)固定（Microwave fixation）,為近幾年所注目的問(wèn)題之一。該方法能保持良好的組織(zǔzhī)結(jié)構(gòu)和抗原性，適于各種切片的酶組化、ICC以及免疫電鏡等材料固定。其固定機(jī)理可能與微波（頻率1000～3000MHz）具有被水分吸收的性質(zhì)（通常所用的微波是頻率2450MHz，波長(zhǎng)12cm）；生物材料含有大量水份，照射后，溫度升高，分子運(yùn)動(dòng)加快，促進(jìn)固定液向組織(zǔzhī)內(nèi)滲透，加速與組織(zǔzhī)成分的反應(yīng)，短時(shí)間內(nèi)達(dá)到固定的效果等有關(guān)。經(jīng)微波照射固定的組織(zǔzhī)，需置相同固定液中，繼續(xù)固定2～6h，室溫。,第十九頁(yè)，共三十八頁(yè)。,二、切片(qiē pi224。n),光鏡ICC染色，常用的有冰凍切片和石蠟切片兩種，二者各有其優(yōu)缺點(diǎn)，應(yīng)根據(jù)抗原的性質(zhì)、實(shí)驗(yàn)室條件，合理選擇之。對(duì)未知抗原顯示時(shí)，最好同時(shí)(t243。ngsh237。)應(yīng)用。冰凍切片為ICC研究所首選。,第二十頁(yè)，共三十八頁(yè)。,Shi（1991）等報(bào)告：微波爐照射的切片(qiē pi224。n)，能夠激活部分核內(nèi)抗原活性。其機(jī)制不清，可能與高溫、高熱的作用，使核內(nèi)DNA雙鏈解開(kāi)，DNA、RNA解離，抗原暴露有關(guān)。其步驟為：將切片(qiē pi224。n)脫蠟水洗后，置染色瓶中，加入去離子水或緩沖液至瓶頸處，反復(fù)多次照射，每次1min，照射5～10次，每次照射后，補(bǔ)充瓶中蒸發(fā)掉的液體，照射溫度不超過(guò)90～95℃為宜。此處理后，細(xì)胞核染色以蘇木精為佳,第二十一頁(yè)，共三十八頁(yè)。,第二節(jié) 染色(rǎns232。)方法,一、本科標(biāo)抗體法 酶標(biāo)抗體技術(shù)是通過(guò)(tōnggu242。)共價(jià)鍵將酶連結(jié)在抗體上，制成酶標(biāo)抗體，再借酶對(duì)底物的特異催化作用，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，于光鏡或電鏡下進(jìn)行細(xì)胞表面及細(xì)胞內(nèi)各種抗原成分的定位。,第二十二頁(yè)，共三十八頁(yè)。,（一）酶的種類(lèi)及特點(diǎn) 從理論上講，用
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