20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測細胞活力精講(編輯修改稿)
2024-11-04 12:59 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 和 Pm:最大陽性反應(yīng)率 Pn:最小陽性反應(yīng)率,第十一頁，共二十四頁。,舉例(jǔ l236。),藥物(y224。ow249。)濃度0.0.00.000.0000.00000.000001umol/l，稀釋倍數(shù)為10，最大濃度為0.1，抑制率為0.9 0.80、0.60.40.21，0.06。代入 計算公式： Pm=0.95 Pn=0.06 P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1 Xm=lg0.1=1 lgI=lg0.1/0.01=1 lgIC50=11*(3.1(30.950.06)/4)=3.6025 IC50=0.00025,第十二頁，共二十四頁。,注意事項,1． 選擇適當?shù)募毎?x236。bāo)接種濃度。在進行MTT試驗前，對每一種細胞都應(yīng)測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間。 2． 設(shè)空白對照，與試驗平行設(shè)不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照孔。最后比色時，以空白孔調(diào)零。,第十三頁，共二十四頁。,實驗(sh237。y224。n)前應(yīng)明確的問題,1.選擇適當?shù)募毎臃N濃度。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細胞長滿時約有105個細胞。但由于不同細胞貼壁后面積差異很大，因此，在進行MTT試驗前，要進行預(yù)實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間，以保證培養(yǎng)終止致細胞過滿。這樣，才能(c225。in233。ng)保證MTT結(jié)晶形成酌量與細胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否則細胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。,第十四頁，共二十四頁。,2.藥物濃度的設(shè)定。一定要多看文獻，參考別人的結(jié)果再定個比較大的范圍先初篩。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時間范圍再細篩。切記！否則，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。 3. 時間點的設(shè)定。在不同時間點的測定OD值，輸入(shūr249。)excel表，最后得到不同時間點的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時候變得平坦了（到了平臺期）那個時間點應(yīng)該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制表現(xiàn)的最明顯）。,第
規(guī)章制度相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1