20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力精講(已改無(wú)錯(cuò)字)
2024-11-04 12 本頁(yè)面
【正文】 十五頁(yè)，共二十四頁(yè)。,4.培養(yǎng)時(shí)間。100ul的培養(yǎng)液對(duì)于10的4～5次方的增殖期細(xì)胞來(lái)說(shuō)，很難維持68h，如果營(yíng)養(yǎng)(y237。ngyǎng)不夠的話，細(xì)胞會(huì)由增殖期漸漸趨向G0期而趨于靜止，影響結(jié)果，我們是在48h換液的。 5.MTT法只能測(cè)定細(xì)胞相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力，不能測(cè)定細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。做MTT時(shí)，盡量無(wú)菌操作，因?yàn)榧?xì)菌也可以導(dǎo)致MTT比色OD值的升高。,第十六頁(yè)，共二十四頁(yè)。,7.實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)設(shè)置(sh232。zh236。)調(diào)零孔，對(duì)照孔，加藥孔。調(diào)零孔加培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜。對(duì)照孔和加藥孔都要加細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，不同的是對(duì)照孔加溶解藥物的介質(zhì)，而加藥組加入不同濃度的藥物。 8.避免血清干擾。用含15％胎牛血清培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，高的血清物質(zhì)會(huì)影響試驗(yàn)孔的光吸收值。由于試驗(yàn)本底增加，會(huì)試驗(yàn)敏感性。因此，一般選小于10％胎牛血清的培養(yǎng)液進(jìn)行。在呈色后，盡量吸凈培養(yǎng)孔內(nèi)殘余培養(yǎng)液。,第十七頁(yè)，共二十四頁(yè)。,關(guān)于(guāny)細(xì)胞的接種(鋪板),細(xì)胞過(guò)了30代以后就不要用了。培養(yǎng)板要用好的（最好進(jìn)口板），不好的板或重復(fù)利用的板只可做預(yù)實(shí)驗(yàn)。 接種時(shí)最好按照預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索出的密度接種, 且而細(xì)胞過(guò)密或者過(guò)少，增殖都會(huì)過(guò)快或者過(guò)慢，其增值率線性關(guān)系不佳。故而MTT細(xì)胞密度多采用10000/ml，100ul/孔。 細(xì)胞密度要根據(jù)不同細(xì)胞的特點(diǎn)來(lái)定。 懸浮(xu225。nf)細(xì)胞每孔的細(xì)胞數(shù)可達(dá)到105,貼壁細(xì)胞可為103104。,第十八頁(yè)，共二十四頁(yè)。,MTT本身就是比較粗的實(shí)驗(yàn)，增殖率10%左右的波動(dòng)都不算奇怪。特別是新手，20％的波動(dòng)也是常見(jiàn)的，所以很可能是技術(shù)原因引起的，特別是種板技術(shù)一定要過(guò)關(guān)。 注意細(xì)胞懸液一定要混勻，已避免細(xì)胞沉淀下來(lái)，導(dǎo)致(dǎozh236。)每孔中的細(xì)胞數(shù)量不等，可以每接幾個(gè)就要再混勻一下。加樣器操作要熟練，盡量避免人為誤差。另外，吹散次數(shù)過(guò)多也會(huì)影響細(xì)胞活力。所以要熟練鞋、快些上板。,第十九頁(yè)，共二十四頁(yè)。,如何(rh233。)清除上清,直接吸出：加DMSO前要把液體吸掉，但培養(yǎng)液里的紫色結(jié)晶可能會(huì)吸去，可在這之前先用平板離心機(jī)離心96孔板，2000r，5分鐘，然后吸掉上清(
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