20xx年醫(yī)學(xué)專題—mtt法檢測(cè)細(xì)胞活力精講-在線瀏覽
2024-11-04 12:59本頁(yè)面
【正文】 藥物每孔10ul；共100ul加入到96孔板（邊緣孔用PBS填充）。同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對(duì)照孔（細(xì)胞、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜），每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔。 3）每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），繼續(xù)(j236。)培養(yǎng)4 h 4）每孔加三聯(lián)裂解液（10gSDS，異丁醇5ml，10M HCl 0.1ml用雙蒸水溶解配成100ml）過夜， 第二天早晨置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。,第七頁(yè)，共二十四頁(yè)。ow249。,MTT的配制(p232。),MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后4186。尤其當(dāng)MTT變?yōu)榛揖G色時(shí)就絕對(duì)不能再用了。oji224。,第九頁(yè)，共二十四頁(yè)。y224。s表示，應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行方差分析，p0.05時(shí)為相差顯著，p0.01時(shí)為相差非常(fēich225?？梢砸詴r(shí)間為橫軸，光吸收值為縱軸繪制細(xì)胞生線曲線，專門公式求IC50（半數(shù)抑制濃度 ）。 OD對(duì)照組OD實(shí)驗(yàn)組 抑制率 % = OD對(duì)照組,100 %,第十頁(yè)，共二十四頁(yè)。xi224。,舉例(jǔ l236。ow249。代入 計(jì)算公式： Pm=0.95 Pn=0.06 P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1 Xm=lg0.1=1 lgI=lg0.1/0.01=1 lgIC50=11*(3.1(30.950.06)/4)=3.6025 IC50=0.00025,第十二頁(yè)，共二十四頁(yè)。bāo)接種濃度。 2． 設(shè)空白對(duì)照，與試驗(yàn)平行設(shè)不加細(xì)胞只加培養(yǎng)液的空白對(duì)照孔。,第十三頁(yè)，共二十四頁(yè)。y224。一般情況下，96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿時(shí)約有105個(gè)細(xì)胞。這樣，才能(c225。ng)保證MTT結(jié)晶形成酌量與細(xì)胞數(shù)呈的線性關(guān)系。,第十四頁(yè)，共二十四頁(yè)。一定要多看文獻(xiàn)，參考別人的結(jié)果再定個(gè)比較大的范圍先初篩。切記！否則，可能你用的時(shí)間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時(shí)間。在不同時(shí)間點(diǎn)的測(cè)定OD值，輸入(shūr249。,第十五頁(yè)，共二十四頁(yè)。100ul的培養(yǎng)液對(duì)于10的4～5次方的增殖期細(xì)胞來(lái)說(shuō)，很難維持68h，如果營(yíng)養(yǎng)(y237。 5.MTT法只能測(cè)
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