【文章內(nèi)容簡介】 性反應，表示有生物堿存在。（2）碘化鉍鉀試驗：取樣品的稀酸水溶液1ml，加碘化鉍鉀試劑（Dragendorff氏試劑）1~2滴，出現(xiàn)棕黃至棕紅色沉淀者為陽性反應，表示有生物堿存在。（3）碘—碘化鉀試驗：取樣品的稀酸水溶液1ml，加碘—碘化鉀試劑（Wangner氏試劑）1~2滴，生成褐色至暗褐色沉淀者為陽性反應，表示有生物堿存在。（4）雷氏銨鹽試驗：取樣品的稀酸水溶液（PH4~5）1ml，加雷氏銨鹽試劑數(shù)滴，生成黃紅色沉淀者為陽性反應，表示有生物堿存在。（5）苦味酸試驗：取樣品的中性溶液1ml，加苦味酸的飽和水溶液1~2滴，生成黃色沉淀者為陽性反應，表示有生物堿存在。薄層色譜吸附劑：中性氧化鋁（Ⅲ級）干法制版 樣品：（1）粉防己堿（2）防己諾林堿（3）總提取物（均以氯仿溶解）展開劑：氯仿—丙酮—苯（3：1：4）顯色劑：噴以改良碘化鉍鉀試劑（干法鋪板顯色時，要在溶劑未干前噴顯色劑，否則氧化鋁粉末易飛散，使薄層破壞）。（四）實驗流程），濾液 藥渣（棄去）回收（沸石）乙醇至無醇味（雷氏銨鹽試驗）水分2次洗滌，無水（酚性堿）碳酸鉀干燥后，濾過 沉淀反應 回收氯仿加丙酮30ml，加熱溶解，濾過 濃縮至適量，過夜析晶，抽濾加丙酮加熱溶解，趁熱過濾加丙酮加熱溶解，趁熱過濾 濾液 濾液放置析晶，濾過，干燥放置析晶，濾過，干燥 粉防己堿（針狀結(jié)晶）防己諾林堿（粒狀結(jié)晶）六、實驗報告要求應包括原理描述、實驗流程、數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力、實驗結(jié)果、實驗效果及建議等。七、思考題粉防己堿和防己諾林堿在結(jié)構(gòu)與性質(zhì)上有何異同點？實驗過程中，應怎樣利用它們的共性及個性進行提取分離？請設計方案。分離水溶性與脂溶性生物堿的常用方法有哪些？從防己中分離脂溶性、水溶性堿，酚性、非酚性堿的依據(jù)是什么？萃取過程中怎樣防止和消除乳化？生物堿的沉淀反應應在什么條件下進行，為什么？八、實驗成績評定方法本門實驗課程考核成績占課程總成績的30%，該實驗考核成績占實驗總成績的40%。考核分實驗預習、實驗過程操作、實驗報告等三個方面，成績計算為預習實驗占20%（包括原理描述、實驗流程）、實驗過程操作占40%（包括數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力）、實驗報告占40%（包括實驗結(jié)果、實驗效果）?；被ㄖ悬S酮類化合物提取、分離和鑒定 [適用對象]——藥學、環(huán)境、中藥專業(yè)[實驗學時]——18一、實驗目的要求學習黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實驗要求：（1）通過蕓香苷提取與精制，掌握沸水提取黃酮類化合物的原理和操作。（2）掌握由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。（3）掌握黃酮苷和黃酮苷元的分離。（4）掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。二、實驗原理由槐花中提取蕓香苷的方法很多，本實驗是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進行提取和精制，或根據(jù)蕓香苷分子中具有酚羥基，顯弱酸性，能與堿成鹽而增大溶解度，以堿水為溶劑煮沸提取，其提取液加酸酸化后則蕓香苷游離析出。三、儀器設備單口圓底燒瓶，冷凝管，鐵架臺，燒杯，電爐，烘箱，水浴鍋，三角燒瓶，濾紙，微量抽濾器，布氏漏斗，試管，層析槽，石棉網(wǎng)，毛細管等。四、相關知識點槐花為豆科植物槐Sophora japonica ，主要含蕓香苷（蘆?。扛哌_12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。蕓香苷（rutoside），分子式C27H30O16，淡黃色針狀結(jié)晶，~178℃。難溶于冷水（1：8000），略溶于熱水（1：200），溶于熱甲醇（1：7），冷甲醇（1：100），熱乙醇（1：30），冷乙醇（1：650），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，黃色針狀結(jié)晶，℃（分解）。溶于熱乙醇（1：23），冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，幾不溶于水。HOOOH OH 蕓香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖 槲皮素 R=H五、實驗步驟（一）蕓香苷的提?。ㄋ崛》ǎ┓Q取槐花米50克，置1000ml燒杯中，加沸水800ml，加熱保持微沸1小時趁熱用棉花過濾，濾渣再加600ml水煮沸1小時，趁熱過濾，合并2次濾液放置過夜，析出大量淡黃色沉淀，抽濾，沉淀用水洗3~4次，抽干置于空氣中干燥即得粗蕓香苷，稱重計算得率。（二）蕓香苷的水解稱取蕓香苷粗品2克，盡量研細，投入500ml圓底燒瓶中，加2%H2SO4溶液150ml，接上冷凝管，濾取沉淀物（即苷元槲皮素），濾液保留以鑒定糖部分，槲皮素沉淀經(jīng)水洗滌抽干，自然干燥，稱重并計算水解得率。（三）蕓香苷、槲皮素重結(jié)晶稱取蕓香苷粗品2克，加甲醇50ml，加熱溶解，趁熱過濾，濾液濃縮一半，6 放置析晶，過濾。濾液適當濃縮后放置，復析出結(jié)晶，濾取結(jié)晶。必要時結(jié)晶再用甲醇重結(jié)晶一次。取槲皮素全部，加適量95%乙醇，同上法重結(jié)晶一次。（四）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定點樣：取新華一號色譜濾紙，規(guī)格20cm20cm，在濾紙下端約2cm處用鉛筆畫一直線，間隔2cm分別點上下列樣品或標準溶液：（1）糖樣品溶液（2）標準葡萄糖溶液（3）標準鼠李糖溶液（4）蕓香苷樣品甲醇溶液（5）蕓香苷標準品溶液（6）槲皮素樣品甲醇溶液（7）槲皮素標準品溶液展開劑：正丁醇醋酸水（4：1：5）上層上行展開。顯色：展開完畢，將濾紙取出，記錄溶劑前沿位置。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點之間剪開，分別顯色。（1）糖的顯色：噴苯胺鄰苯二甲酸試劑，在105℃烘10分鐘，顯棕色斑點。計算并比較樣品和標準品的Rf值。（2）黃酮化合物的顯色：①可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點。②經(jīng)氨氣熏后再觀察。③待氨氣揮盡后，噴1%AlCl3甲醇溶液，再觀察。④計算并比較樣品與標準品的Rf值。（五）蕓香苷和槲皮素性質(zhì)試驗酸性試驗：取小試管8支，每4支一組，第一組每管中加入蕓香苷1mg，第二組每管中加入槲皮素1mg，每組四管中分別加入稀氨水、5%碳酸氫鈉水溶液、5%碳酸鈉水溶液、1%氫氧化鈉水溶液各2ml，振搖后觀察各管溶解情況。溶解的溶液應呈黃色。再加濃鹽酸數(shù)滴酸化，黃色褪去或變淺，并有沉淀析出或產(chǎn)生渾濁。Molish反應：取試樣1mg置小試管中，加α萘酚試劑1~2滴，搖勻。傾斜試管。觀察兩層溶液的界面變化，出現(xiàn)紫色環(huán)者為陽性，表示樣品分子中含有糖的結(jié)構(gòu)（糖和苷類均呈陽性反應），比較蕓香苷和槲皮素的不同。Fehling試驗：取試樣數(shù)mg，加斐林氏試劑甲、乙等量 7 混合液2ml，沸水浴上加熱，如產(chǎn)生氧化亞銅的暗紅色或黃色沉淀表示有還原糖或其它還原性物質(zhì)。充分加熱作用后濾去沉淀，濾液滴加濃鹽酸酸化，在水浴上加熱水解，水解液以10% NaOH中和，再進行斐林氏試驗，此時顯陽性反應者表示樣品為糖苷化合物。比較蕓香苷和槲皮素的不同。鹽酸鎂粉反應：取蕓香苷1mg，加乙醇2ml，在水浴上加熱溶解，加鎂粉約50mg，滴加數(shù)滴濃鹽酸，溶液由黃色漸變紅色者表示有黃酮類化合物。以同法試驗槲皮素。如用鋅粉代替鎂粉，則蕓香苷（3羥基與糖結(jié)合成苷）仍有作用，而槲皮素（黃酮醇類）不呈還原顯色反應。因此可區(qū)別兩者。鋯檸檬酸反應：取樣品1mg，加乙醇2ml，在水浴上加熱溶解，再加2%二氯氧鋯甲醇溶液3~4滴，凡有3羥基或5羥基的黃酮即呈鮮黃色。然后加2%檸檬酸甲醇溶液3~4滴，有3羥基的黃酮黃色不褪。比較蕓香苷和槲皮素的不同。三氯化鋁反應：取樣品1mg溶于甲醇中，加1%三氯化鋁甲醇溶液2~3滴，黃酮類呈鮮黃色，并有熒光。（六）實驗流程 槐花米50g2g蕓香苷粗品 甲醇重結(jié)晶 2%硫酸，放冷抽濾 精制蕓香苷濾液（糖類）沉淀（苷元）95%乙醇重結(jié)晶鑒定反應 槲皮素精制品六、實驗報告要求應包括原理描述、實驗流程、數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力、實驗結(jié)果、實驗效果及建議等。七、思考題黃酮類化合物還有哪些提取方法？蕓香苷的提取還可用什么方法？酸水解常用什么酸？為什么用硫酸比用鹽酸水解后處理更方便？本實驗中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結(jié)構(gòu)與Rf值的關系。試討論苷類成分的檢識程序。八、實驗成績評定方法本門實驗課程考核成績占課程總成績的30%，該實驗考核成績占實驗總成績的40%?？己朔謱嶒烆A習、實驗過程操作、實驗報告等三個方面，其成績計算為預習實驗占20%（包括原理描述、實驗流程）、實驗過程操作占40%（包括數(shù)據(jù)記錄、解決問題的能力）、實驗報告占40%（包括實驗結(jié)果、實驗效果）?；被ㄖ悬S酮類化合物分離和鑒定[適用對象]——中藥國際交流、中藥知識產(chǎn)權(quán)、中藥制藥工程、中藥資源專業(yè) [實驗學時]——9一、實驗目的要求學習黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實驗要求：（1）了解沸水提取黃酮類化合物的原理和操作。（2）了解由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。（3）掌握黃酮類化合物的主要性質(zhì)及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。二、實驗原理由槐花中提取蕓香苷的方法很多，本實驗是根據(jù)蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進行提取和精制。紙色譜的分離原理是利用各種化合物在流動相和固定相中分配系數(shù)的不同而達到分離目的。三、儀器設備烘箱，水浴鍋，鐵架臺，燒杯，三角燒瓶，濾紙，試管，層析槽，毛細管等。四、相關知識點槐花為豆科植物槐Sophora japonica ，主要含蕓香苷（蘆 9 ?。?，含量高達12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。蕓香苷（rutoside），分子式C27H30O16，淡黃色針狀結(jié)晶，~178℃。難溶于冷水（1：8000），略溶于熱水（1：200），溶于熱甲醇（1：7），冷甲醇（1：100），熱乙醇（1：30），冷乙醇（1：650），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素（quercetin），分子式C15H10O7，黃色針狀結(jié)晶，℃（分解）。溶于熱乙醇（1：23），冷乙醇（1：300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，幾不溶于水。HOOOH OH 蕓香苷 R= —葡萄糖—鼠李糖槲皮素 R=H五、實驗步驟（一）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定點樣：取新華一號色譜濾紙，規(guī)格20cm20cm，在濾紙下端約2cm處用鉛筆畫一直線，間隔2cm分別點上下列樣品或標準溶液：（1）糖樣品溶液（2）標準葡萄糖溶液（3）標準鼠李糖溶液（4）蕓香苷樣品甲醇溶液（5）蕓香苷標準品溶液（6）槲皮素樣品甲醇溶液（7）槲皮素標準品溶液展開劑：正丁醇醋酸水（4：1：5）上層上行展開。顯色：展開完畢，將濾紙取出，記錄溶劑前沿位置。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點之間剪開，