【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 的EC50值。測(cè)定EC50值的更多信息可參閱第三部分（二）第1節(jié)體外抗病毒活性。IQ值是一個(gè)綜合藥物的體內(nèi)濃度和抗病毒活性的有用工具，也是描述藥物的暴露程度與病毒對(duì)藥物敏感性之間相互關(guān)系的一個(gè)指標(biāo)。如果一種藥物的IQ較高，則表明患者體內(nèi)的藥物能達(dá)到有效抑制病毒的濃度，可使耐藥發(fā)生的概率降到最低。由于同一種劑量可能并不適用于所有的患者，所以IQ值也可以用于指導(dǎo)III期和IV期臨床試驗(yàn)劑量的選擇。 在體外抗病毒活性研究的基礎(chǔ)上，可進(jìn)一步通過動(dòng)物感染模型來評(píng)價(jià)藥物的抗病毒活性。動(dòng)物模型的分析指標(biāo)包括病毒感染后（需要有證據(jù)證明）動(dòng)物發(fā)病率和死亡率、組織學(xué)檢查、各時(shí)間點(diǎn)的病毒載量、在發(fā)生病毒反彈的動(dòng)物體內(nèi)耐藥株的分離和鑒定、病毒抗原和抗體的定量檢測(cè)、藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)以及癥狀（如神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、體重減少等）。（三）細(xì)胞毒性及治療指數(shù) 申請(qǐng)人應(yīng)在臨床試驗(yàn)前開展藥物細(xì)胞毒性和治療指數(shù)的研究。需要證明藥物在體內(nèi)可達(dá)到的濃度下具有抗病毒活性，同時(shí)該濃度的藥物不會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。應(yīng)排除測(cè)定的藥物抗病毒活性是由于宿主細(xì)胞死亡所造成的可能。這一點(diǎn)非常重要。在細(xì)胞毒性試驗(yàn)中，應(yīng)設(shè)置抗病毒藥物的濃度梯度，測(cè)定導(dǎo)致50%的宿主細(xì)胞死亡的濃度[參見第三部分（二）第1節(jié)體外抗病毒活性]，即所研究藥物的半數(shù)細(xì)胞毒性濃度，通常用CC50或CCIC50來表示。治療指數(shù)或選擇性指數(shù)（即CC50/EC50）則是藥物的細(xì)胞毒性效應(yīng)與抑制病毒復(fù)制效應(yīng)的比值。理想的藥物應(yīng)具有最大的抗病毒活性，同時(shí)具有最小的細(xì)胞毒性（即具有較大的治療指數(shù)）。建議申請(qǐng)人對(duì)處于穩(wěn)定期和分裂期的各種類型的、相關(guān)的人細(xì)胞和組織細(xì)胞進(jìn)行CC50值的測(cè)定，確定藥物對(duì)不同細(xì)胞周期、不同細(xì)胞類型或不同組織的潛在毒性。 由于某些抗病毒藥物對(duì)骨髓有抑制作用，建議申請(qǐng)人采用細(xì)胞集落形成法評(píng)價(jià)某些藥物（如核苷類似物）對(duì)人骨髓祖細(xì)胞生長(zhǎng)的潛在影響。此外，某些藥物也對(duì)負(fù)責(zé)正常細(xì)胞核DNA和線粒體DNA合成及修復(fù)的細(xì)胞DNA聚合酶具有潛在的抑制作用。申請(qǐng)人應(yīng)測(cè)定抗病毒藥物對(duì)細(xì)胞聚合酶的IC50，同時(shí)應(yīng)證明藥物對(duì)病毒靶點(diǎn)作用的特異性（與對(duì)細(xì)胞聚合酶的作用相比）。人體的DNA聚合酶γ負(fù)責(zé)線粒體DNA合成，人DNA聚合酶γ被抑制與線粒體功能缺損之間具有相關(guān)性，并會(huì)導(dǎo)致人體不良反應(yīng)的發(fā)生。因此，考察某些藥物（如核苷類似物）對(duì)人聚合酶γ活性的影響以及對(duì)線粒體的毒性作用（如乳酸的生成量，線粒體DNA含量、線粒體形態(tài)學(xué)，葡萄糖利用率）就顯得非常重要。（四）體外聯(lián)合用藥的活性分析 感染病毒的患者體內(nèi)可能存在不同的病毒變異株，其中某些類型的病毒株可能對(duì)一種或多種抗病毒藥物具有耐藥性。因此，對(duì)于某些病毒而言，同時(shí)給予多種抗病毒藥物（如抗HIV1的聯(lián)合藥物療法）可能會(huì)比使用單一的藥物產(chǎn)生并維持更好的抗病毒作用。但是不同藥物之間的相互作用比較復(fù)雜，聯(lián)合用藥后可能導(dǎo)致藥物的抗病毒活性出現(xiàn)相互拮抗、相加或者協(xié)同等作用。因此，申請(qǐng)人應(yīng)在體外試驗(yàn)中評(píng)價(jià)藥物與其他已上市的、治療相同疾病藥物之間聯(lián)合用藥的抗病毒活性。具體來說，應(yīng)評(píng)價(jià)所研究藥物與所有已上市的針對(duì)相同靶點(diǎn)的藥物之間聯(lián)合用藥的抗病毒活性，對(duì)于已上市的治療相同適應(yīng)癥的不同靶點(diǎn)的藥物，應(yīng)選擇兩種或兩種以上進(jìn)行此類研究。建議申請(qǐng)人在開始評(píng)價(jià)聯(lián)合用藥療效的臨床試驗(yàn)前，先完成體外聯(lián)合用藥的活性研究。有時(shí)患者會(huì)混合感染兩種或兩種以上的病毒（如：HIV與HBV或HCV共感染），因此，體外聯(lián)合用藥活性試驗(yàn)還應(yīng)考察治療同時(shí)感染不同種類病毒的藥物與所研究藥物合用的體外抗病毒活性。（五）耐藥性 本指導(dǎo)原則主要關(guān)注病毒基因突變導(dǎo)致的病毒對(duì)特定的抗病毒藥物的表型敏感性降低的耐藥性。這里所說的耐藥性并不是絕對(duì)耐藥，而是一個(gè)相對(duì)的概念。建議在開始以感染特定病毒的患者為對(duì)象的臨床試驗(yàn)前，先通過體外試驗(yàn)選擇對(duì)藥物耐藥的病毒株，鑒定耐藥株的表型和基因型，并進(jìn)行交叉耐藥性分析。盡管通過體外試驗(yàn)獲得的耐藥性數(shù)據(jù)可能并不能準(zhǔn)確預(yù)測(cè)臨床耐藥性，但仍建議申請(qǐng)人通過體外耐藥株選擇試驗(yàn)評(píng)價(jià)目標(biāo)病毒對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥性的屏障，從而有助于臨床試驗(yàn)的設(shè)計(jì)。 通過在細(xì)胞培養(yǎng)中選擇對(duì)藥物耐藥的病毒株，可以了解耐藥性產(chǎn)生遺傳閾值的高低。遺傳閾值低的藥物可以選擇僅含1或2個(gè)突變位點(diǎn)的耐藥株。而遺傳閾值較高的藥物則可能在病毒株中發(fā)生多處突變才產(chǎn)生耐藥性。藥物和目標(biāo)病毒的許多因素可對(duì)耐藥性產(chǎn)生影響，如藥物濃度。突變株的出現(xiàn)速率取決于病毒復(fù)制速率、產(chǎn)生的病毒基因組的數(shù)量、復(fù)制機(jī)制的保真度以及宿主因素。對(duì)這些因素的了解有助于設(shè)計(jì)檢測(cè)耐藥株的體外試驗(yàn)。例如，如果需要發(fā)生多個(gè)突變方可對(duì)藥物產(chǎn)生耐藥性，則許多細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)提供的病毒滴度可能不足以用于選擇耐藥病毒。遇到這種情況時(shí)，可以在逐漸增加藥物濃度的條件下使病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中連續(xù)傳代，這樣可能會(huì)選擇出耐藥株。在評(píng)價(jià)耐藥性的體外試驗(yàn)中，藥物的濃度范圍應(yīng)覆蓋其在人體內(nèi)的預(yù)期濃度。選擇對(duì)藥物耐藥的突變毒株的試驗(yàn)應(yīng)在下列條件下重復(fù)進(jìn)行：使用不同的野生株、使用不同的耐藥株、高選擇壓力及低選擇壓力等，并確定不同的試驗(yàn)中產(chǎn)生的耐藥性突變的類型是否相同，以評(píng)價(jià)藥物濃度與耐藥性遺傳屏障之間的關(guān)系。 當(dāng)采用細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)復(fù)制目標(biāo)病毒時(shí)，