【正文】 能缺損之間具有相關(guān)性，并會導致人體不良反應(yīng)的發(fā)生。藥物和目標病毒的許多因素可對耐藥性產(chǎn)生影響，如藥物濃度。針對病毒基因組中的相關(guān)部分進行DNA序列分析，鑒定耐藥相關(guān)突變，這有利于預(yù)測臨床療效，并且可以為闡述藥物的作用機制提供證據(jù)。 使用針對相同靶點的抗病毒藥物治療時，對某一種藥物敏感性降低的變異，同時也可能會對相同靶點的其他藥物的敏感性降低或喪失，這種現(xiàn)象稱為交叉耐藥。如果病毒載量未被作為主要終點指標，則建立檢測病毒載量的方法以及監(jiān)測病毒耐藥性的出現(xiàn)對于分析病毒學指標與臨床結(jié)果之間的關(guān)系將非常重要，而且有助于完善擬進行的臨床試驗的設(shè)計。如果某項試驗未按照生產(chǎn)廠家的技術(shù)規(guī)范操作，則該試驗的結(jié)果可能不會被接受。開展以感染某種病毒的患者為研究對象的臨床試驗前，應(yīng)詳細分析體外試驗中選擇到的耐藥病毒株。六、總結(jié) 本指導原則介紹了抗病毒藥物研發(fā)和申請審評相關(guān)的病毒學研究項目，目的在于使對抗病毒藥物的分析更加全面。申請人有時會提出當體外數(shù)據(jù)提示病毒在單一突變后導致高度表型耐藥時，在基線和病毒學失敗時收集初治患者亞組的樣本?；蛐秃捅硇蜋z測是考察耐藥病毒株是否出現(xiàn)的基礎(chǔ)，還有可能表明病毒的耐藥性與臨床病毒學失敗之間的關(guān)系。通過測定突變株的EC50值，并與在相同條件下同時測得的對照株的EC50值進行比較，計算突變株敏感性的變化（耐藥性倍數(shù)的變化）。含有耐藥性復制子的細胞將會形成集落，應(yīng)對其進行基因型和表型鑒定。盡管通過體外試驗獲得的耐藥性數(shù)據(jù)可能并不能準確預(yù)測臨床耐藥性，但仍建議申請人通過體外耐藥株選擇試驗評價目標病毒對藥物產(chǎn)生耐藥性的屏障，從而有助于臨床試驗的設(shè)計。建議申請人對處于穩(wěn)定期和分裂期的各種類型的、相關(guān)的人細胞和組織細胞進行CC50值的測定，確定藥物對不同細胞周期、不同細胞類型或不同組織的潛在毒性。此外，建議申請人在含有生理濃度的α酸性糖蛋白和人血清白蛋白的條件下測定藥物的EC50值。 目前用于檢測HBV復制的方法包括但不限于：l 通過生物化學試驗測定HBV DNA聚合酶的活性。由于病毒的基因容易發(fā)生變異，所以應(yīng)使用多種臨床分離株考察所研究藥物的抗病毒活性，臨床分離株應(yīng)能代表臨床試驗中的病毒群。病毒生命周期中的許多階段都可以成為潛在的抗病毒藥物的作用靶點。討論的主要問題包括：l 明確作用機制l 確定所研究藥物特定的抗病毒活性l 評價所研究藥物與其他可能合用的抗病毒藥之間發(fā)生相互作用的可能性l 提供病毒對所研究藥物產(chǎn)生耐藥性的研究數(shù)據(jù)l 提供所研究藥物與已上市的其他相同作用靶點抗病毒藥物的交叉耐藥性的研究數(shù)據(jù)二、背景近年來，國內(nèi)外在抗HIV1藥物的研究方面積累了大量的經(jīng)驗，也取得了很多進展。建議申請人進行藥物的作用機制、藥物在模型系統(tǒng)中的特定抗病毒活性的研究，并提供對藥物產(chǎn)生耐藥的病毒學數(shù)據(jù)。證明藥物作用機制的數(shù)據(jù)包括但不僅限于受體結(jié)合、抑制酶活性、確定抑制劑與受體復合物結(jié)合的X光晶體結(jié)構(gòu)、編碼靶蛋白基因的耐藥性突變位點的鑒定等。評價藥物的抗病毒活性和細胞毒性的方法包括但不局限于病毒滅活試驗、空斑減數(shù)試驗、細胞病變效應(yīng)抑制試驗、病毒抗原或核酸檢測、感染性病毒顆粒檢測、含報告基因的病毒或細胞檢測等。遺憾的是HCVcc系統(tǒng)目前僅在2a亞型中取得成功。如果一種藥物的IQ較高，則表明患者體內(nèi)的藥物能達到有效抑制病毒的濃度，可使耐藥發(fā)生的概率降到最低。因此，考察某些藥物（如核苷類似物）對人聚合酶γ活性的影響以及對線粒體的毒性作用（如乳酸的生成量，線粒體DNA含量、線粒體形態(tài)學，葡萄糖利用率）就顯得非常重要。突變株的出現(xiàn)速率取決于病毒復制速率、產(chǎn)生的病毒基因組的數(shù)量、復制機制的保真度以及宿主因素。應(yīng)測定編碼目標蛋白的完整基因序列，對于導致病毒對所研究藥物耐藥的突變類型和導致病毒對其他同類藥物耐藥的突變類型進行比較。交叉耐藥并不一定是可以類推的，因此評價所有可能性非常重要。 建議申請人在開始以病毒感染的患者為對象的臨床試驗前，首先制訂耐藥性監(jiān)測計劃，并作為臨床試驗方案的一部分。鼓勵申請人使用經(jīng)過鑒定和驗證的試驗方法。本指導原則還就如何及何時進行病毒學研究提出了建議。在方法部分應(yīng)描述使用的全部試驗方法，同時應(yīng)對使用的統(tǒng)計分析方法進行描述。根據(jù)臨床試驗方案或研究人群的具體情況，有時可能需要進行額外的基因型和表型評價或亞組分析，因此在臨床試驗的各個階段（基線及治療階段）采集并保存樣本是非常必要的。在這種情況下，可以用測定病毒載量的方法進行耐藥性監(jiān)測。任何標準的病毒學試驗方法都可用于計算病毒的表型耐藥的變化（如病毒相關(guān)蛋白檢測、PCR檢測病毒DNA或RNA、細胞病變檢測、MTT法檢測細胞毒性、報告基因表達檢測等）。使用HCV復制子細胞篩選HCV耐藥性的方法包括下列幾種： l 在含新霉素的培養(yǎng)基中，多種固定的藥物濃度下，以較低的密度培養(yǎng)HCV復制子細胞。建議在開始以感染特定病毒的患者為對象的臨床試驗前，先通過體外試驗選擇對藥物耐藥的病毒株，鑒定耐藥株的表型和基因型，并進行交叉耐藥性分析。理想的藥物應(yīng)具有最大的抗病毒活性，同時具有最小的細胞毒性（即具有較大的治療指數(shù)）。通過這些數(shù)據(jù)可以推算出藥物在100%人血清中的EC50，同時應(yīng)報告血清校正后的EC