【文章內(nèi)容簡介】 as結(jié)合位點(diǎn)的 調(diào)節(jié)域 第五十六頁，共一百二十三頁。 ? 表達(dá) : Raf1在體內(nèi)廣泛表達(dá) 而 ARaf 和 BRaf表達(dá)方式嚴(yán)格 如 BRaf 主要在神經(jīng)組織中表達(dá) ? 激活 : 酶水平的調(diào)節(jié)較復(fù)雜 主要包括 2個(gè)過程 : 一是結(jié)合于 GTP Ras 二是 磷酸化 ( 一簇 — Ser338, Ser339, Tyr340, Tyr341) 第五十七頁，共一百二十三頁。 Raf1對于 H、 K和 N Ras顯示應(yīng)答 BRaf 可被 Rap1a活化 TC21能夠與 Raf1和 BRaf相互作用，激活它們。 ? 上游激酶的調(diào)節(jié) : 能看出磷酸化 Raf1的激酶有 Src 、PAK、 PKC及其他蛋白激酶 第五十八頁，共一百二十三頁。 ? 其他的磷酸化位點(diǎn) — Ser259和 Ser621 調(diào)節(jié) Raf1與 1433蛋白結(jié)合，穩(wěn)定其活性。不過， 1433蛋白也可能抑制 Raf活性。抑制性的磷酸化位點(diǎn)是由 Akt (Ser259)和 PKA催化的。 ? 抑制 ： RKIP可干擾 RafMEK的結(jié)合，抑制后者磷酸化和活化。 第五十九頁，共一百二十三頁。 2. ERK1/2通路中 MKK (MEK) ? MEK1和 MEK2是該通路主要的 MEK ? 為雙特異性蛋白激酶 ? 通過兩個(gè)殘基的磷酸化而被激活 ( Ser或 Thr) (同 MAPK) ? 突變可引起其活性增加 (不同于 MAPK) ? 酸性氨基酸替代，明顯增加其活性 ? 特異性較高，僅磷酸化少數(shù)底物 第六十頁，共一百二十三頁。 ? MEK4可磷酸化非 MAPK ? MEK1和 MEK2含 3個(gè)非酶活性結(jié)構(gòu)域 — ERK1/2結(jié)合位點(diǎn) ( D域 ) 富含 Pro結(jié)構(gòu)域 核輸出序列 ( NES ) MEK1 富含 Pro域 NES D域 激酶域 第六十一頁，共一百二十三頁。 ? MEK1和 MEK2的上游調(diào)節(jié)因子 — Raf、 RTK、非 RTK、 GPCR 在轉(zhuǎn)化細(xì)胞： Ras → Raf1 → MEK1 → ERK1/2 在心肌細(xì)胞 ARaf → MEK1 → ERK1/2 在 PC細(xì)胞 BRaf → MEK1 → ERK1/2 第六十二頁，共一百二十三頁。 第六十三頁，共一百二十三頁。 3. ERK1/2蛋白激酶的作用底物及滅活 ? 底物的保守性磷酸化位點(diǎn)模體為 ProLueSer/ThrPro ? 底物蛋白 — 胞質(zhì)蛋白 : p90S6K 、 cPLA2 、 EGF 受體 細(xì)胞骨架 : MAP 2 、 4 、 Tau 轉(zhuǎn)錄因子： Elk1, Ets1, Sap1a, cMyc等 ? 滅活 : MKP1, 3, 4 第六十四頁，共一百二十三頁。 4. ERK1/2通路的生物學(xué)功能 ? 刺激細(xì)胞增殖 ? 抑制細(xì)胞生長、分化 ? 細(xì)胞周期調(diào)控 ? 調(diào)控 MTOC ? 紡錘體的組裝 ? 促進(jìn)細(xì)胞存活 ? 某些情況下，與細(xì)胞死亡有關(guān) 第六十五頁，共一百二十三頁。 第六十六頁，共一百二十三頁。 第六十七頁，共一百二十三頁。 第六十八頁，共一百二十三頁。 〔二〕 JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 1991年鑒定出的新的 MAPK 與 ERK有兩點(diǎn)不同： ? 被紫外線輻射等細(xì)胞應(yīng)激所激活 ? 磷酸化 cJun的氨基活化位點(diǎn) 故稱之為 cJun Nterminal kinase (JNK) 鼠的同源物那么被命名為 Stress activated protein kinase (SAPK)。 第六十九頁，共一百二十三頁。 之所以稱為 SAPK是因?yàn)樵趹?yīng)答各種刺激時(shí)，它們的活性增加。這些應(yīng)激包括： ? 細(xì)胞因子 ? 生長因子撤離 ? 干擾 DNA和蛋白合成的試劑 ? UV輻射 ? 熱休克 ? 反響活性氧 (ROS) ? 高滲透壓 第七十頁，共一百二十三頁。 JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路 ? 是能看出的應(yīng)答最多樣刺激的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一 ? JNK通過 ThrProTyr模體的磷酸化被激活 ? 由 JNK、 MAP2Ks、 MAP3Ks 和MAP4Ks組成 ? 細(xì)胞外配體應(yīng)答的 JNK通路照比細(xì)胞應(yīng)激應(yīng)答研究得較為清楚 第七十一頁，共一百二十三頁。 第七十二頁，共一百二十三頁。 JNK： ? 人的 JNK由 3個(gè)基因 ( jnk1, jnk 2和 jnk3)編碼 ? 3個(gè)基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的不同剪接產(chǎn)生 10個(gè)JNK亞型 (46kDa, 55kDa) ? JNK家族成員間的激酶催化核心的同源性為 87% ? 同一基因編碼的 46kDa和 55kDa亞型無明顯的功能差異 第七十三頁，共一百二十三頁。 ? JNK1和 JNK2廣泛地在多種組織表達(dá) ? JNK3 主要在神經(jīng)組織表達(dá) ? JNK1和 JNK2 在激酶域的不同剪接體可改變 JNK與它們底物的相互作用 ? 不同的亞型受不同的調(diào)節(jié) 第七十四頁，共一百二十三頁。 JNK底物包括： ? 轉(zhuǎn)錄因子 cJun, JunD, ATF2, ATFα, Elk1 Sap1a, GABPα, GABPβ ? 腫瘤抑制蛋白 p53 JNK生理功能： JNK1和 JNK2有重疊功能，在免疫應(yīng)答和胚胎發(fā)育中具有重要的調(diào)節(jié)作用。 JNK3在神經(jīng)組織中有特異功能 第七十五頁，共一百二十三頁。 第七十六頁，共一百二十三頁。 1. JNK信號 通路 MKK和 MKKK MKK (MAP2Ks) ▲ MKK4 ( SEK1/MEK4/JNKK1/SKK1 ) ? 主要激活 JNK，但對 p38也有活化作用 ? 可能是個(gè)抑癌基因 ? 胚胎發(fā)育所必需 ? 使細(xì)胞免于凋亡 ? 不是惟一的激活劑 第七十七頁，共一百二十三頁。 ▲ MKK7 (MEK7/JNKK2/SKK4 ) ? 特異地激活 JNK，而不激活 p38或 ERK ? 與 MKK4相關(guān)，屬于哺乳動物細(xì)胞MAPKK超家族 ? 與果蠅的 HEP(DJNK的激活劑 )密切相關(guān) ? MKK7基因編碼 6個(gè)蛋白亞型 ? 不同亞型應(yīng)答不同的細(xì)胞外刺激和上游激酶 第七十八頁，共一百二十三頁。 MKK4與 MKK7在人和鼠組織中廣泛表達(dá)，但在不同的組織起表達(dá)的豐度不同 MKK4與 MKK7介導(dǎo)來自同一細(xì)胞外刺激的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，但它們被不同 MAP3Ks所激活。 同 MEK1/2，用酸性氨基酸臵換磷酸化位點(diǎn)的氨基酸，可增加其激酶活性。 第七十九頁，共一百二十三頁。 MEKK (MAP3Ks) 包括： MEKK1~ ASK1/MAPKKK5 MAPKKK