mtt法檢測細胞活力精講(編輯修改稿)
2024-10-04 01:28 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ? 藥物濃度 、 、 、 、 、稀釋倍數(shù)為 10，最大濃度為 ，抑制率為、 、 、 、 ， 。代入 計算公式： Pm= Pn= P=+++++= Xm==1 lgI=lgIC50=11*(()/4)= IC50= 第十二頁，共二十四頁。 本卷須知 1． 選擇適當?shù)募毎臃N濃度。 在進行 MTT試驗前，對每一種細胞都應(yīng)測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間。 2． 設(shè)空白對照， 與試驗平行設(shè)不加細胞只加培養(yǎng)液的空白對照孔。最后比色時，以空白孔調(diào)零。 第十三頁，共二十四頁。 實驗前應(yīng)明確的問題 ? 。一般情況下， 96孔培養(yǎng)板的一內(nèi)貼壁細胞長滿時約有 105個細胞。但由于不同細胞貼壁后面積差異很大，因此，在進行 MTT試驗前，要進行預(yù)實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數(shù)條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數(shù)和培養(yǎng)時間，以保證培養(yǎng)終止致細胞過滿。這樣，才能保證 MTT結(jié)晶形成酌量與細胞數(shù)呈的線性關(guān)系。否那么細胞數(shù)太多敏感性降低，太少觀察不到差異。 第十四頁，共二十四頁。 。一定要多看文獻，參考別人的結(jié)果再定個比較大的范圍先初篩。根據(jù)自己初篩的結(jié)果縮小濃度和時間范圍再細篩。切記！否那么，可能你用的時間和濃度根本不是藥物的有效濃度和時間。 3. 時間點的設(shè)定。在不同時間點的測定 OD值，輸入 excel表，最后得到不同時間點的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什么時候變得平坦了〔到了平臺期〕那個時間點應(yīng)該就是最好的時間點〔因為這個時候的細胞增殖抑制表現(xiàn)的最明顯〕。 第十五頁，共二十四頁。 。 100ul的培養(yǎng)液對于 10的 4～ 5次方的增殖期細胞來說，很難維持 68h，如果營養(yǎng)不夠的話，細胞會由增殖期漸漸趨向 G0期而趨于靜止，影響結(jié)果，我們是在 48h換液的。 ，不能測定細胞絕對
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