雙脫氧末端終止測序法原理過程和目標(biāo)基因cdna序列拼接(編輯修改稿)
2025-03-29 10:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 經(jīng)成像透像最后由高靈敏度的相機(jī)分段收集信號(hào)，傳送給計(jì)算所分析處理。 14 熒光化合物標(biāo)記鏈終止法以熒光顏色為標(biāo)記信號(hào)，每種ddNTP各有 1種代表顏色；整個(gè)反應(yīng)在一個(gè)試管中進(jìn)行；當(dāng)新合成的終止單鏈通過熒光監(jiān)測儀時(shí)，可由光信號(hào)讀出末端核苷酸并由電腦記錄。 15 16 Sanger雙脫氧鏈終止 DNA測序法的測序能力： ? 手工測序：最大約 300 bp； ? 自動(dòng)測序：最大約 1200 bp。 17 二、序列比對(duì)分析 1. 相似性與同源性 ? 相似性 (similarity)： 是指一種很直接的 數(shù)量關(guān)系 ，比如部分相同或相似的百分比或其它一些合適的度量。比如說， A序列和 B序列的相似性是 80％，或者 4/5。這是個(gè)量化的關(guān)系。當(dāng)然可進(jìn)行自身局部比較。 18 ? 同源性 (homology)： 指從一些數(shù)據(jù)中推斷出的兩個(gè)基因或蛋白質(zhì)序列具而共同祖先的結(jié)論，屬于 質(zhì)的判斷 。就是說 A和 B的關(guān)系上，只有是同源序列，或者非同源序列兩種關(guān)系。而說 A和 B的同源性為 80％都是不科學(xué)的。 19 序列的相似性和序列的同源性有一定的關(guān)系，一般來說 序列間的相似性越高的話，它們是同源序列的可能性就更高 ，所以經(jīng)常可以通過序列的相似性來推測序列是否同源。 正因?yàn)榇嬖谶@樣的關(guān)系，很多時(shí)候?qū)π蛄械南嗨菩院屯葱跃蜎]有做很明顯的區(qū)分，造成經(jīng)常等價(jià)混用兩個(gè)名詞。所以有出現(xiàn) A序列和 B序列的同源性為 80％一說。 20 序列相似性比較： 就是將待研究序列與 DNA或蛋白質(zhì)序列庫進(jìn)行比較，用于確定該序列的生物屬性，也就是找出與此序列相似的已知序列是什么。完成這一工作只需要使用兩兩序列比較算法。常用的程序包有 BLAST、 FASTA等； 21 序列同源性分析： 是將待研究序列加入到一組與之同源 ，但來自不同物種的序列中進(jìn)行多序列同時(shí)比較 ， 以確定該序列與其它序列間的同源性大小 。 這是理論分析方法中最關(guān)鍵的一步 。 完成這一工作必須使用多序列比較算法 。 常用的程序包有 CLUSTAL等； 22 2. Blast簡介及應(yīng)用 （ 1） Blast簡介 BLAST 是由美國國立生物技術(shù)信息中心（ NCBI）開發(fā)的一個(gè)基于 序列相似性 的數(shù)據(jù)庫搜索程序。
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