15遺傳性疾病的分子診斷(編輯修改稿)
2025-02-02 00:17 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 子診斷學(xué) β地中海貧血臨床分類 臨 床 類 型 基 因 型 基 因 產(chǎn) 物 臨 床 表 現(xiàn) 重型 ?地貧 ?+/?+、 ?0/?0 ??0/??0、 ?+/?0 ?鏈幾乎不能合成 ?鏈合成相對增加 Hb F和 Hb A2增高 地中海貧血面容 溶血性貧血（需輸血） 輕型 ?地貧 ?+/?A、 ?0/?A ??0/?A 能合成適量的 ?鏈 貧血不明顯或輕度貧血 中間型 ?地貧 ?+/??+ ?鏈部分合成 介于重型和輕型之間（不需輸血）遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)增多癥 缺失或突變 ?鏈和 ?鏈合成受抑制 ?鏈合成明顯增加 成人 Hb F持續(xù)增加，無癥狀 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) 患兒顱骨及面頰部骨骼增大，頭顱變大，額部隆起，顴高，鼻梁塌陷，兩眼距離增寬，眼瞼浮腫，形成地中海貧血的特殊面容。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) X線顱骨照片可見顱骨內(nèi)外板變薄，板障增寬，在骨皮質(zhì)間出現(xiàn)垂直短發(fā)樣骨刺 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) ?地中海貧血的分子基礎(chǔ) ? ?地中海貧血已發(fā)現(xiàn) 100多種突變類型，包括點(diǎn)突變和 基因缺失。 ? 絕大多數(shù) ?地中海貧血是由于 ?基因發(fā)生點(diǎn)突變所致，突 變涉及基因內(nèi)及側(cè)翼序列。 （ 1）編碼區(qū)突變 （ 2）非編碼區(qū)突變 （ 3）啟動子區(qū)突變 （ 4） RNA裂解信號突變 （ 5）加帽位點(diǎn)單個堿基突變 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) ☆ 編碼區(qū)突變 ——mRNA穩(wěn)定性降低或形成無功能 mRNA （ 1）無義突變 密碼子 17： A→C 密碼子 43： G→T β0 地貧 （ 2）移碼突變 密碼子 71/72： +A 密碼子 41/42：－ TCTT β0 地貧 （ 3）起始密碼突變 ATG→AGG β0 地貧 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) ⑴ 內(nèi)含子 I GT→ AT喪失一個剪切信號。 ⑵ 新的切點(diǎn)產(chǎn)生 同義突變 → 激活 →I 和 Exon隱蔽裂解位點(diǎn) 如： GGT→ AGT 產(chǎn)生新的剪切點(diǎn) ☆ 非編碼區(qū)突變 ——影響 mRNA剪切、加工過程 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) GT→ AT GGT→AGT ，激活隱蔽剪切位點(diǎn) 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) ☆ 啟動子區(qū)突變 ——降低 mRNA的轉(zhuǎn)錄效率 28位 A→G 突變破壞了 TATA Box。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) ☆ RNA裂解信號突變 ——不能準(zhǔn)確裂解和加 polyA β珠蛋白基因 3’側(cè)翼序列中AATAAA→AA CAAA ☆ 加帽位點(diǎn)單個堿基突變 ——不能準(zhǔn)確裂解和加 polyA 加帽位點(diǎn)發(fā)生 A→ C顛換，影響轉(zhuǎn)錄效率。通常是 mRNA的第一個核苷酸。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) 分子診斷方法 ? PCR反向點(diǎn)雜交 (PCRRDB)法 ? PCR—RFLP法 ? 基因芯片法等 N D 1 2 3 4 6 5 8 7 10 9 11 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) 二、血友病 人體的凝血過程需要多種凝血因子參加。由于凝血因子基因的缺陷而使其中某一凝血因子蛋白表達(dá)降低或缺如即造成 血友病 (hemophilia)。 85％ 的血友病患者是由于血漿中缺乏凝血第 8 因子 (FⅧ )所致，約 10％的患者是由于缺乏凝血第 9 因子 (FⅨ )，前者稱為甲型血友病，后者稱為乙型血友病 。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) （一）甲型血友病及其分子診斷 ? 甲型血友病是由于凝血因子 Ⅷ (FⅧ )即 抗血友病球蛋白 (antihemophilic globulin, AHG)缺乏所導(dǎo)致的凝血機(jī)制異常的遺傳性疾病。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) 2．甲型血友病的分子機(jī)制 在 FⅧ 基因區(qū)域內(nèi)，有一種 A基因存在三個拷貝，其功能不詳，其中一個 A基因位于 FⅧ 基因的第 22 號內(nèi)含子內(nèi) (A1)，另外兩個位于 X染色體的末端 (A A3)。A1 基因可以與其上游的兩個 A基因拷貝中的一個發(fā)生同源重組，引起 FⅧ 基因的122 外顯子片段倒位，這種倒位導(dǎo)致FⅧ 功能完全喪失而發(fā)生嚴(yán)重的血友病 。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) 甲型血友病 分子診斷 （ 1）基因倒位的檢測 由于 50％左右的甲型血友病是由于FⅧ 基因中的 22 號內(nèi)含子倒位引起的，所以檢測該突變成為對患者進(jìn)行基因診斷的首選方法。在檢測基因倒位的方法中首選的是 長距離 PCR(LDPCR)技術(shù)。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) (2)非基因倒位的檢測 點(diǎn)突變是非基因倒位引起甲型血友病的主要原因，因此對該類患者的家系分析和攜帶者的基因檢測主要是通過點(diǎn)突變的檢測技術(shù)進(jìn)行。 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) ? 1)PCRRFLP法 ? 2)VNTR法 ? 3)STR法 ? 4)PCRSSCP法 南方醫(yī)科大學(xué) 分子診斷學(xué) （二）乙型血友病及其分子診斷 ? 乙型血友病，又稱 Christmas 病或 血漿凝血活酶成分 (plasma thromboplastin ponent, PTC) 缺乏癥，是凝血因子
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